益氣活血解毒法對潰瘍性結腸炎血漿血小板活化的臨床及實驗研究*

安賀軍，王新月，于 玫，沈 靜

（1.解放軍第306醫院中醫科，北京 100101；2.北京中醫藥大學東直門醫院消化科，北京 100700；3.北京中醫藥大學，北京 100029）

益氣活血解毒法對潰瘍性結腸炎血漿血小板活化的臨床及實驗研究*

安賀軍1，王新月2，于 玫3，沈 靜3

（1.解放軍第306醫院中醫科，北京 100101；2.北京中醫藥大學東直門醫院消化科，北京 100700；3.北京中醫藥大學，北京 100029）

[目的]探討益氣活血解毒法對潰瘍性結腸炎（UC）血漿血小板活化的影響。[方法]分臨床研究及動物實驗兩部分；臨床研究以90例潰瘍性結腸炎復發患者按隨機數字表法隨機分為2組，中藥治療組45例，西藥對照組45例。治療3個月后對完全緩解及有效病例（其中治療組39例，對照組32例）進行為期6個月的隨訪。治療組給予益氣活血解毒立法的中藥湯劑，對照組給予柳氮磺胺吡啶治療，并各與20例作正常對照。動物實驗用三硝基苯磺酸（TNBS）復制實驗性大鼠UC模型，將其隨機分為模型組、西藥對照組、中藥治療組，并設正常對照組。進行反映血小板活化程度的特異性標志物P-選擇素的檢測。[結果]臨床研究中，治療前UC患者血漿P-選擇素水平明顯高于正常健康人（P＜0.01）；治療組治療后及隨訪時含量明顯低于西藥對照組（P＜0.05 或 P＜0.01）。動物實驗中，在治療 10 d 時，兩治療組皆可降低血漿P-選擇素水平，西藥組水平明顯低于中藥組（P＜0.05）；治療30 d時中藥組與西藥組相比無顯著差異（P＞0.05）；停藥 10 d 時，中藥組明顯低于西藥組（P＜0.05）。[結論]以益氣活血解毒立法的中藥潰結復發方與西藥比較，可有效降低血漿P-選擇素水平，從而阻抑血小板活化，可能是抗潰結復發作用機制之一。

結腸炎；潰瘍性；抗復發；益氣活血解毒；P-選擇素；血小板活化

潰瘍性結腸炎（UC）是一種以慢性炎癥和潰瘍形成為主要病理特點的消化道疾病。由于其患病率逐漸增加、高復發率和結腸直腸癌發生關系密切而成為目前研究熱點；本研究以導師在臨床長期使用行之有效的益氣活血解毒立法的潰結復發方為干預手段，探討其對血漿血小板活化的影響，報告如下。

1 臨床研究

1.1 資料與方法

1.1.1 臨床資料 采用西醫診斷標準[1]及參照1994年頒布的《慢性非特異性潰瘍性結腸炎中西醫結合診斷、辨證和療效標準（試行方案）》[2]自擬的中醫證候標準，于2006年3月—2007年1月選擇臨床類型屬于慢性復發型活動期和慢性持續型潰瘍性結腸炎患者共90例，病例來自于北京中醫藥大學東直門醫院、解放軍第301醫院、306醫院門診和病房；按隨機數字表法隨機分為中藥治療組45例，西藥對照組45例。治療過程中脫落5例，1個療程后對完全緩解及有效病例（其中治療組39例，對照組32例，最后有效病例71例）進行為期6個月的隨訪。排除有嚴重并發癥以及患有嚴重心、腦、肝、腎等疾病者。

1.1.2 治療方法 治療組給予益氣活血解毒立法的潰結復發方中藥湯劑，基本方如下：生黃芪30 g，炒白術10 g，當歸10 g，炒五靈脂10 g，生蒲黃（包）10 g，赤芍、白芍各 10 g，焦檳榔 10 g，煨木香 10 g，黃連10 g，黃柏10 g，連翹20 g。臨床并隨證加減。用法：每日1劑，水煎，取300mL，分早晚2次各150mL服用。對照組柳氮磺胺吡啶每日4～6 g，分4次口服。觀察療程為3個月，觀察完畢后，減少藥量鞏固治療，療程結束后隨訪6個月，觀察患者的復發情況。

1.1.3 血漿標本 治療前、治療3個月后及6個月隨訪時，抽取患者靜脈血各1次，清晨空腹靜脈采血，2%乙二胺四乙酸二鈉鹽及0.7%氯化鈉（2%EDTA-Na2-0.7%NaCl）抗凝，立即分離血漿，放-70 ℃冰箱保存待檢。其中同時檢測正常人血漿20例作為血漿P-選擇素正常對照。血漿P-選擇素測定采用酶聯免疫吸附（ELISA）法，試劑盒由美國RB公司進口分裝，購自北京百事創新科技有限公司；嚴格按照試劑盒說明操作。

1.1.4 統計方法 采用統計軟件SPSS 13.0進行統計處理，計量資料用均數±標準差（±s）表示，正態分布計量資料兩組間的比較采用t檢驗，多組間的比較采用單因素方差分析，偏態分布計量資料的比較采用秩和檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

1.2 結果 治療前UC組（71例）與正常組（20例）、治療后復發組（16例）、未復發組（55例）血漿P-選擇素含量比較分別為（46.43±12.78）、（23.06±12.55）、（35.52±6.77）、（25.42±8.24）μg/L。經 t檢驗，治療前，UC組血漿P-選擇素含量明顯高于正常健康人（P＜0.01）。復發組血漿P-選擇素含量明顯高于未復發組（P＜0.01）。可以認為病情復發與血漿P-選擇素含量變化有關。

治療后及隨訪時兩組血漿P-選擇素含量的變化比較 見表1。

表1 治療后及隨訪時血漿P-選擇素含量的變化比較（±s）Tab.1 Com parison of p lasma P-selectin expression after treatmentand during follow-up visi（t±s） μg/L

表1 治療后及隨訪時血漿P-選擇素含量的變化比較（±s）Tab.1 Com parison of p lasma P-selectin expression after treatmentand during follow-up visi（t±s） μg/L

注：與西藥對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 例數 治療后 隨訪時中藥治療組 39 27.02±3.48* 29.09± 8.32**西藥對照組 32 30.64±4.46* 36.58±10.42**

治療組治療后及隨訪時血漿P-選擇素含量明顯低于西藥對照組（P＜0.05或P＜0.01）。西藥對照組隨訪時與治療后比較，差異有統計學意義（P＜0.01）。

2 動物實驗

2.1 材料與方法

2.1.1 實驗動物 清潔級健康雄性SD大鼠，體質量（160～200）g，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（京）2006-0006。

2.1.2 主要試劑與儀器 2，4，6—三硝基苯磺酸（TNBS），為 Sigma公司產品，批號：074K007；水合氯醛購自恒業中遠化工有限公司；ELISA法試劑盒由美國RB公司進口分裝，購自北京百事創新科技有限公司；離心機：型號：LDZ5－2，北京醫用離心機廠生產。

2.1.3 藥物 潰結復發方主要藥物組成同上，購自北京中醫藥大學東直門醫院，由北京中醫藥大學東直門醫院制劑室煎制，之后濃煎為生藥量5 g/mL灌胃用，每只每日1mL；灌胃劑量為60 kg體質量成年人藥量的8倍。奧沙拉秦鈉膠囊劑（暢美）由天津力生制藥有限公司生產，每粒0.25 g，蒸餾水配成混懸液，配成0.67 g/L溶液，每只每日1mL；灌胃劑量為60 kg體質量成年人藥量的8倍。

2.1.4 動物模型制備[3-4]將大鼠正常飼養1周后，禁食24 h（不禁水），稱體質量，100mg/L水合氯醛（3.8mL/kg）腹腔麻醉，將一直徑2mm、長約12 cm的橡膠管由大鼠肛門輕緩插入，約深8～10 cm，然后以0.85mL TNBS/乙醇液（120mg/kg TNBS+體積分數50%乙醇0.25mL），約5秒灌注完畢；將造模鼠倒置8min后（盡量減少造模試劑流出）放回籠內。

2.1.5 動物分組及給藥 將120只大鼠按照隨機數字表法隨機分為4組，其中模型組、西藥組、中藥組每組各30只，均予造模；正常組30只，不予造模，但與其余3組同步禁食、麻醉，同步飼養觀察。于造模后第2天起：正常組、模型組以蒸餾水灌胃，每次每只1 mL；西藥對照組以暢美混懸液按0.266 g/（kg·d）劑量給藥；中藥治療組以潰結復發方按20 g/（kg·d）劑量給藥，均每天1次，共40 d。統計方法同上。

2.1.6 取材 分別于給藥后10 d、30 d和停藥后10 d，各組隨機取10只大鼠，以100mg/L水合氯醛（3.8mL/kg）腹腔麻醉，腹主動脈取血，2%EDTANa2-0.7%NaCl抗凝，立即分離血漿，放-70℃冰箱保存待檢。血漿P-選擇素含量測定采用ELISA法，按試劑盒說明書操作。

2.2 各組血漿P-選擇素含量測定結果 見表2。

表2 各組UC模型大鼠血漿P-選擇素含量的比較（±s）Tab.2 Com parison of plasma P-selectin expression of rats with ulcerative colitis in differentgroups（±s）ng/L

表2 各組UC模型大鼠血漿P-選擇素含量的比較（±s）Tab.2 Com parison of plasma P-selectin expression of rats with ulcerative colitis in differentgroups（±s）ng/L

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與西藥組比較，#P<0.05。

組別 n 治療10 d 治療30 d 停藥后10 d正常組 30 0.281 0±0.099 7 0.273 4±0.099 7 0.261 3±0.099 7模型組 30 1.142 2±0.410 8**0.485 8±0.279 6* 0.430 8±0.246 7*中藥組 30 0.382 3±0.174 9▲▲ 0.258 2±0.054 9▲ 0.198 2±0.022 5#西藥組 30 0.238 0±0.089 4▲▲ 0.317 9±0.167 2▲ 0.379 8±0.056 8

結果顯示：模型組造模10 d時，P-選擇素含量明顯高于正常組（P<0.01）。中藥組治療10 d明顯低于模型組（P＜0.01）；停藥 10 d 時，低于西藥組（P<0.05）。

3 討論

潰瘍性結腸炎慢性復發型、慢性持續型與中醫之“休息痢”、“久痢”相類似；本病多是在脾胃虛弱基礎上，在感受外邪、飲食不節或憂思惱怒等諸多誘發因素作用下，脾虛失于健運，運化無權，水谷不歸正化，腸道傳導失司，濕熱瘀毒等病邪壅滯腸中，脂膜血絡受傷，腐敗化為膿血；濕熱瘀毒等病邪未能及時清除，腸道正常功能不能恢復，以使病情反復發作，纏綿難愈。

筆者檢測了臨床慢性復發型活動期、慢性持續型UC患者經治療完全緩解及有效病例71例的血漿P-選擇素水平，結果顯示活動期UC患者血漿P-選擇素水平明顯高于正常組，提示血小板活化直接參與了UC的病理過程。復發組與未復發組血漿P-選擇素水平比較，結果顯示復發組顯著高于未復發組，提示血小板活化可能是UC復發的病理機制之一。為了探討益氣活血解毒法是否對血小板活化具有阻抑作用，檢測了治療后及隨訪時血漿P-選擇素水平，結果顯示治療后、隨訪時中藥治療組明顯低于西藥對照組。

本動物實驗在造模第10天時模型組血漿P-選擇素水平均顯著高于正常組，之后逐漸下降，造模第40天時仍明顯高于正常組，提示造模10 d時是模型炎癥的急性期，血小板和內皮細胞活化，介導炎性細胞黏附、聚集，參與急性炎癥反應；隨著病程進入中期（造模30 d）和緩解期（造模第40天），模型組血漿P-選擇素水平逐漸下降但并未恢復正常，說明在中期和緩解期仍存在血小板活化。以益氣活血解毒立法的中藥潰結復發方與西藥比較，可有效降低血漿P-選擇素水平，從而抑制血小板及內皮細胞活化。

本研究以益氣活血解毒立法為主組成的中藥潰結復發方，補脾益氣，祛瘀行滯，清熱燥濕，能行腸胃滯氣，清化瘀毒，恢復腸道正常的通降功能，從而減少本病的復發。

[1]中華醫學會消化病學分會.對炎癥性腸病診斷治療規范的建議[J].中華消化雜志，2001，21（4）：236－239.

[2]鄭家駒.炎癥性腸病基礎與臨床[M].北京：科學出版社，2000：25.

[3]張 濤,謝建群.大鼠潰瘍性結腸炎模型的實驗研究[J].中國中西醫結合消化雜志，2006，14（4）：240.

[4]宮健偉,苑述剛,阮時寶.對免疫方法制作潰瘍性結腸炎動物模型的探討[J].中國實驗方劑學雜志，2005，11（2）：70.

Clinicalstudy and animalexperimenton benefiting vitalQi,activating blood flow and detoxication on plasma plateletactivation during ulcerative colitis

ANHe-jun1,WANGXin-yue2,YUMei3,etal
（1.Departmentof TCM,The306Hospitalof the PLA,Beijing100101,China;2.DepartmentofDigestion,Dongzhimen Hospitalof Beijing University of TCM,Beijing 100700,China;3.Beijing University of TCM,Beijing 100029,China）

[Objective]ToinvestigatetheinfluenceofbenefitingvitalQI,activatingblood flowand detoxicationonplasmaplateletactivation during ulcerative colitis(UC).[Methods]The study included clinical study and animalexperiment.In clinical study,90 caseswith recurrentUCwere randomlydivided into the treatmentgroup(n=45)and thecontrolgroup(n=45)according to the random table.Threemonths after treatment,the casesofcomplete remission and effective caseswere followed-up for6months(39 cases in treatmentgroup,32 in control group).The patients of treatmentgroup

medicinal decoction of TCM consisting of herbswith benefiting vital Qi,activating blood flow and detoxication;the controlgroup was treated with salazosulfapyridine.In animalexperiment,UCwas induced with TNBS in rats and then random ly divided intomodel control group,westernmedicine group,the traditional Chinesemedicine group,and normal control group.P-selectin,a specificmarker reflecting the activation level of plateletwas determined.[Results]In clinical study,before treatment the plasma P-selectin level in patientswith UCwas significantly higher than normolhealthy persons(P<0.01);the levelof P-selectin in recurrentgroup wassignificantly higher than those patientswithout recurrence(P<0.01);After treatmentand during the follow-up period the levelofplasma P-selectin in treatmentgroup wasmarkedly lower than those in controlgroup with westernmedicine(P<0.05 or P<0.01).In animalexperiment,plasma P-selectin levelofwesternmedicine group weremarkedly lower than thatof the traditional Chinesemedicinegroup 10 daysafter treatment(P<0.05).30 daysafter treatment,therewasnosignificantdifferencebetween TCM group and westernmedicine group(P>0.05）.Afterwithdrawing medicine for10 days the P-selectin level in traditional Chinesemedicine group was markedly lower than thatinwesternmedicine group(P<0.05).[Conclusion]The study shows that the Kuijiefufafang(prescription preventing recurrence of UC,PPRUC)consisting ofmedicinewith benefiting vital Qi,activating blood flow and detoxication can effectively decrease the P-selectin level compared with westernmedicine.Accordingly the activation of platelet is inhibited.Thatprobably is one of the therapeuticmechanism of PPRUC.

ulcerative colitis;against-relapse;benefiting vitalQi,activatingblood flow and detoxication;P-selectin;plateletactivation

R574.1

A

1672-1519(2011)04-0281-03

國家自然科學基金資助項目（NO.30572390）。

安賀軍（1969-），女，博士，主治醫師，中醫內科學專業。

王新月。

2011-02-26）