酸棗仁總黃酮抗抑郁作用的實驗研究*

趙啟鐸，舒樂新，王 穎，牟佳佳，宋志國，李金梅

（1.天津中醫藥大學中藥學院，天津300193；2.吉林敖東集團大連藥業股份有限公司，大連 116043）

酸棗仁總黃酮抗抑郁作用的實驗研究*

趙啟鐸1，舒樂新1，王 穎1，牟佳佳1，宋志國2，李金梅2

（1.天津中醫藥大學中藥學院，天津300193；2.吉林敖東集團大連藥業股份有限公司，大連 116043）

[目的]研究酸棗仁總黃酮對行為絕望小鼠抑郁模型的影響。[方法]采用小鼠強迫游泳實驗和懸尾實驗等抑郁模型，小鼠行為絕望的不動時間作為指標，考察酸棗仁總黃酮抗抑郁活性。[結果]酸棗仁總黃酮低、中、高劑量組均能減少小鼠強迫游泳和懸尾不動時間，與空白組比較差異有統計學意義（P<0.05）；與陽性藥組比較差異有統計學意義（P<0.05）。[結論]酸棗仁總黃酮具有顯著的抗小鼠實驗性抑郁作用。

酸棗仁；總黃酮；抗抑郁；行為絕望

酸棗仁（Semen Ziziphi Spinosas)為鼠李科植物酸棗[ZiziphusjujubaMill.var.Spinosa(Bunge)HUexH.F.Chow]的干燥成熟種子，具有補肝、斂汗、寧心、生津的功能，用于虛煩不眠、體虛多汗、驚悸多夢、津傷口渴等證，《本草綱目》將其列為上品。酸棗仁是一種療效確切，不良反應小的中藥材，臨床用于治療多種類型失眠癥和神經衰弱[1]。目前中醫治療抑郁癥以疏肝健脾、養心安神復方為主，臨床研究表明：抑郁癥患者在情緒低落的同時，常表現出心煩意亂，甚至焦慮、躁狂等特征。有80%的患者還可出現嚴重的失眠，因此采用安神開竅中藥治療實屬必要[2]。近年來的研究表明酸棗仁具有抗抑郁的藥理活性[3-5]。本研究采用國際通用的行為絕望小鼠抑郁模型進行實驗，從行為學角度觀察酸棗仁總黃酮的抗抑郁作用。

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 實驗動物 雄性昆明種小鼠（20±2）g，SPF級，購自天津市山川紅實驗動物科技有限公司，合格證號：SCXK（津）2009-0001，在飼養環境下適應1周后使用。

1.1.2 藥品及試劑 炒酸棗仁購自天津中新藥業集團有限公司，經天津中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室張麗娟教授鑒定；鹽酸氯米帕明片，北京諾華制藥有限公司產品，批號X0026，規格25mg/片，用前用2%吐溫-80水溶液配制成1 g/L，備用。

1.1.3 儀器及裝置 XZC-4小鼠自主活動測定儀，黑龍江省牡丹江市中華電器廠產品，實驗材料懸尾裝置自制，木棒上用木板隔離成4個分區，用膠帶固定鼠尾。強迫游泳所需的2 000mL燒杯7個。BP211D 1/105分析天平，上海君達儀器廠；秒表，瑞士霍耶爾-奧利達斯廠。

1.2 方法

1.2.1 酸棗仁總黃酮的制備 酸棗仁藥材，粉碎過20目篩，4倍量乙醇超聲提取3次，每次40min，合并提取液，回收溶劑至浸膏，浸膏分散于水，分別用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，取正丁醇萃取部分，溶于水經D101型大孔樹脂純化，15%乙醇、35%乙醇、65%乙醇洗脫，取35%乙醇洗脫液回收，真空干燥，得總黃酮粉末。經含量測定[6]，提取物中總黃酮的含量為60.86%。總黃酮粉末用2%吐溫-80溶液分別配制成一定濃度，備用。

1.2.2 動物分組及處理 取小鼠60只，按照隨機數字表法隨機分為5組，每組12只，分別為空白對照組、鹽酸氯米帕明組、酸棗仁總黃酮低、中、高劑量組。鹽酸氯米帕明劑量為25mg/kg；酸棗仁總黃酮低、中、高劑量分別為 50、100、200mg/kg；空白對照組灌服同體積的2%吐溫-80水溶液，連續灌胃7 d，每天1次。于末次給藥后1 h，進行小鼠行為學測試實驗。

1.2.3 小鼠自主活動實驗 于給藥前和末次給藥后1 h，分別測小鼠的自主活動。方法采用XZC-4小鼠自主活動測定儀，將小鼠放入測定儀適應5min后開始測定，以10min內小鼠于給藥前后的活動次數之差為指標，比較各組小鼠自主活動強度。

1.2.4 小鼠強迫游泳實驗 參照文獻[7]。將單個小鼠放入水深10 cm燒杯（直徑13 cm，高19.5 cm）中，水溫（25±2）℃。觀察 6min，記錄后 4min小鼠游泳的不動時間（指小鼠在水中停止掙扎，或顯漂浮狀態，僅有微小的肢體運動以保持頭部浮在水面）。實驗結束將小鼠放在取暖設備下烘干，放回籠內。

1.2.5 小鼠懸尾實驗 參照文獻[8]。強迫游泳實驗小鼠飼養3 d，每天灌胃給藥1次，末次給藥后1 h，將單個小鼠尾端（在距尾2 cm處）用膠布粘在木棒上部，使其成倒掛狀態，頭部離臺面15 cm，中間以擋板隔離小鼠視線。小鼠為了克服不正常體位而掙扎活動，但活動一段時間出現間斷性不動，顯示失望狀態。觀察6min，記錄后4min內小鼠不動時間為失望時間。

1.2.6 統計學處理 用SPSS11.5統計軟件處理數據，計量資料用均數±標準差（±s）表示，正態分布計量資料的比較采用單因素方差分析，偏態分布計量資料的比較采用秩和檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 酸棗仁總黃酮對小鼠自主活動的影響 結果見表1。由表1可以看出，與空白對照組比較，鹽酸氯米帕明組小鼠自主活動次數無顯著減少和增加，無統計學意義（P>0.05），酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組小鼠自主活動次數明顯減少，有統計學意義（P<0.05）。

表1 酸棗仁總黃酮對小鼠自主活動的影響（±s）Tab.1 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on autonom icmovement test（±s）

表1 酸棗仁總黃酮對小鼠自主活動的影響（±s）Tab.1 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on autonom icmovement test（±s）

注：與空白對照組比較，*P<0.05。

組別 n 劑量（mg/kg） 自主活動（次數）空白對照組 12 — 24±71*鹽酸氯米帕明組 12 25 34±69*總黃酮低劑量組 12 50 94±71*總黃酮中劑量組 12 100 121±90*總黃酮高劑量組 12 200 124±99*

2.2 酸棗仁總黃酮對小鼠強迫游泳不動時間的影響 結果見表2。由表2可以看出，與空白對照組比較，鹽酸氯米帕明組小鼠后4min的不動時間縮短，有統計學意義（P<0.05），酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組小鼠后4min的不動時間明顯縮短，有統計學意義（P<0.05，P<0.01）；與鹽酸氯米帕明組比較，酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組對縮短小鼠后4min的不動時間，有統計學意義（P<0.05，P<0.01）；從小鼠不動減少時間趨勢上看，和給藥劑量呈一定相關性。

表2 酸棗仁總黃酮對小鼠強迫游泳實驗不動時間的影響（±s）Tab.2 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the forced sw imm ing test（±s）

表2 酸棗仁總黃酮對小鼠強迫游泳實驗不動時間的影響（±s）Tab.2 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the forced sw imm ing test（±s）

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與陽性藥組比較，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。

不動減少時間（%）空白對照組 12 — 152.10±29.31 —鹽酸氯米帕明組 12 25 114.00±19.00* 25.05總黃酮低劑量組 12 50 75.00±30.89**Δ 50.69總黃酮中劑量組 12 100 68.90±13.88**ΔΔ 54.70總黃酮高劑量組 12 200 65.30±23.88**ΔΔ 57.07組別 n 劑量（mg/kg）不動時間（s）

2.3 酸棗仁總黃酮對小鼠懸尾不動時間的影響結果見表3。由表3可以看出，與空白對照組比較，鹽酸氯米帕明組小鼠后4min的不動時間縮短，有統計學意義（P<0.05），酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組小鼠后4min的不動時間明顯縮短，有統計學意義（P<0.05，P<0.01）；與鹽酸氯米帕明組比較，酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組對縮短小鼠后4min的不動時間無顯著差異；從小鼠不動減少時間趨勢上看，和給藥劑量呈一定相關性。

表3 酸棗仁總黃酮對小鼠懸尾實驗不動時間的影響（±s）Tab.3 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the tailsuspension test（±s）

表3 酸棗仁總黃酮對小鼠懸尾實驗不動時間的影響（±s）Tab.3 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the tailsuspension test（±s）

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 劑量（mg/kg）不動時間（s）不動減少時間（%）空白對照組 12 — 115.60±26.72 —鹽酸氯米帕明組 12 25 70.00±26.49* 39.45總黃酮低劑量組 12 50 69.20±33.41* 40.14總黃酮中劑量組 12 100 66.50±25.44* 42.47總黃酮高劑量組 12 200 64.40±24.02** 44.29

3 討論

酸棗仁盛產于中國北方地區，中醫常作為養心安神藥用于鎮靜催眠，臨床上則多以復方形式用于虛煩不眠，驚悸多夢等癥。目前中醫治療抑郁癥以疏肝健脾、養心安神復方為主，臨床研究表明：抑郁癥患者在情緒低落的同時，常表現出心煩意亂，甚至焦慮、躁狂等特征，這與傳統中藥酸棗仁的功效主治相符。通過對抗抑郁方劑進行統計分析，結果顯示42首方劑中安神藥出現頻率最高。而單味藥中，使用最多的是酸棗仁、遠志[9]。已有研究表明，酸棗仁總提取物具有顯著的抗抑郁作用，但有關酸棗仁抗抑郁有效部位的研究報道僅有關于總生物堿的研究[3-5]。酸棗仁中的脂肪油類、黃酮類、皂苷類，是酸棗仁藥材含有的主要成分，有必要對其抗抑郁作用進行研究。

本實驗采用小鼠強迫游泳和小鼠懸尾實驗、研究酸棗仁總黃酮的抗抑郁作用。小鼠強迫游泳實驗（FST）和懸尾實驗（TST）是用于篩選和觀察抗抑郁藥物常用的實驗方法[10-11]。動物在強迫這一應激條件下，經掙扎后出現絕望表現即不動狀態，而抗抑郁劑可以減少動物的不動時間，提高對應激的耐受性。本實驗研究結表明：酸棗仁總黃酮能明顯減少小鼠自主活動次數，具有鎮靜作用；酸棗仁總黃酮能明顯縮短強迫游泳小鼠和懸尾絕望小鼠后4min內的不動時間，從小鼠不動減少時間趨勢上看，和給藥劑量呈一定相關性。說明酸棗仁總黃酮能夠增強實驗動物的應激耐受性，減少絕望動物的不動時間，具有明顯的抗小鼠實驗性抑郁作用。關于酸棗仁總黃酮中具體發揮作用成分及作用機制有待進一步深入研究[12-13]。

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Study on the antidepressanteffectof total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae

ZHAOQi-duo,SHU Le-xin,WANGYing,etal
（Schoolof TraditionalChineseMateriaMedica,Tianjin University of TraditionalChineseMedicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To observe the antidepressanteffectof total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae inmice.[Methods]To investigate the antidepressantactivity of total Flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae by the forced swimming testand the tailsuspension test,with behavioraldespairmice in the immobility time asan indicator.[Results]Differentdose groupsof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae could significantly reduce the immobility time ofmice during the forced swimming testand the tail Suspension test,compared with thatof the controlgroup(P<0.05);comparedwith thatof the positivegroup(P<0.05).[Conclusion]The total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae possesshad significantantidepressanteffects.

Semen ZiziphiSpinosae;total flavonoids;antidepressanteffect;behavioraldespair

R285.5

A

1672-1519(2011)04-0335-03

天津市高等學校發展項目基金（20070305）。

趙啟鐸（1976-），男，碩士，講師，主要研究方向為中藥化學成分及活性研究。

2011-03-30）