金辛鎮痛液對急性血瘀證大鼠血液流變學及內皮功能的影響*

周 利，祁 青，張紅星，易艷東，林世和，黃國付，鄒 燃，安 雪，唐 雷

（湖北省武漢市中西醫結合醫院針灸科，武漢 430022）

金辛鎮痛液對急性血瘀證大鼠血液流變學及內皮功能的影響*

周 利，祁 青，張紅星，易艷東，林世和，黃國付，鄒 燃，安 雪，唐 雷

（湖北省武漢市中西醫結合醫院針灸科，武漢 430022）

[目的]觀察金辛鎮痛液對急性血瘀大鼠血液流變學、血漿內皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）的影響，以探討其活血化瘀作用。[方法]以皮下注射大劑量鹽酸腎上腺素附加冰水浴造成大鼠急性血瘀模型，檢測大鼠血液流變學指標、血漿ET-1和NO。[結果]模型對照組與正常對照組中血液流變學比較，（P＜0.01），差異有統計學意義，并結合大鼠表征證明造模成功。麝香舒活精組、金辛鎮痛液低中高劑量組與模型組比較，能不同程度地降低大鼠血液流變學指標，并且大鼠血漿ET-1減少，而NO明顯增多，P＜0.01或P＜0.05。[結論]金辛鎮痛液對血瘀證模型大鼠有著明顯的活血化瘀作用。

金辛鎮痛液；急性血瘀模型；血液流變學；內皮素-1；一氧化氮

金辛鎮痛液是本院中心實驗室的中藥外用制劑，主要成分由洋金花、細辛、乙醇等組成。其對動物急慢性炎癥、疼痛模型有明顯的抗炎、鎮痛作用[1]。并且臨床應用于痹癥的關節、肌肉、筋骨疼痛等療效確切[2]。為了探討金辛鎮痛液的活血化瘀作用，在此進行了急性血瘀模型大鼠血液流變學的研究，觀察了該藥對急性血瘀大鼠內皮功能的影響，現將結果報道如下。

1 材料

1.1 動物 SPF級SD大鼠，雌雄各半（180～220）g，由武漢大學動物實驗中心提供，許可證號：SCXK（鄂）2008-0004，合格證號為00008546。

1.2 藥物與試劑 金辛鎮痛液由湖北省武漢市中西醫結合醫院實驗中心提供，批號：051106；鹽酸腎上腺素注射液（武漢遠大制藥集團有限公司，批號：H42021700）；麝香舒活精(黃石飛云制藥有限公司，批號:050701)；肝素（萬邦醫藥，批號：H32020612）；內皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）試劑盒均由武漢華瑞康生物試劑有限公司提供。

2 方法

2.1 動物分組及給藥 取大鼠60只，按體質量用隨機數字表法分為6組，每組10只。A組為正常對照組，B組為模型對照組，C組麝香舒活精組，D、E、F組分別為金辛鎮痛液低劑量組（100%金辛鎮痛液）、中劑量組（200%金辛鎮痛液）、高劑量組（400%金辛鎮痛液）。各組大鼠在乙醚淺麻下常規方法背部脫毛，面積約8 cm2。第2天，于脫毛區涂以相應藥物，每只大鼠用藥5mL/kg，每日2次，連續給藥5 d。

2.2 動物造模及采血 于第6天第1次給藥后1 h，除A組外，其余各組均于皮下注射鹽酸腎上腺素0.8mL/kg，共2次，兩次間隔4 h。在第1次注射鹽酸腎上腺素后2 h將大鼠浸入冰水中游泳5min，以造成急性血瘀模型[3]。造模后將所有大鼠禁食12h，次晨用10%六合氯醛0.3mL/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈采血。

2.3 指標觀察 血液流變學指標測定：取血5mL肝素抗凝，送至本院檢驗科測定，內容包括：全血黏度切變率（1.00，5.00，30.00，200.00）、血漿黏度、紅細胞聚集指數、全血高切相對指數、全血低切相對指數。

血漿ET-1和NO測定：取血2mL，3 000 r/min，離心10min分離血漿，采用酶聯免疫吸附法測定血漿ET-1含量，采用硝酸還原酶法測定血漿NO含量。全部樣品測定均由專人負責，并嚴格按照試劑盒說明書所提供的方法操作。

2.4 統計學處理 本研究采用SPSS 17.0版軟件對所得數據分析處理，以均數±標準差（±s）表示，P＜0.05表示具有統計學意義。計量資料組間差異比較采用ANOVA檢驗。

3 結果

3.1 對血瘀證模型大鼠血液流變學的影響 模型對照組與正常對照組比較，血液流變學變化有統計學意義（P＜0.01），并結合生物表征，血瘀模型成立。金辛鎮痛液3個劑量組和陽性對照麝香舒活精組都能不同程度改善上述血液流變學的變化，與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01或 P＜0.05），提示金辛鎮痛液有改善急性血瘀大鼠血液流變學的作用，降低血液高濃、黏、聚、凝狀態。見表1，表2。

表1 對全血黏度的影響（±s）Tab.1 Effecton whole blood viscosity（±s）mPa/秒

表1 對全血黏度的影響（±s）Tab.1 Effecton whole blood viscosity（±s）mPa/秒

注：與正常對照組比較，*P＜0.01；與模型對照組比較，△P＜0.01或□P＜0.05。

全血黏度200/秒 30/秒 5/秒 1/秒正常對照組 5.03±0.42 7.09±0.55 13.10±1.21 32.16± 9.91模型對照組 7.76±0.89 9.43±0.94*18.16±1.85*46.28±18.33*麝香舒活精組 6.25±0.45△ 8.16±0.9△ 15.35±1.26△ 35.83± 6.80□金辛鎮痛液低劑量組 6.23±0.62△ 7.82±0.79△ 15.08±1.53△ 35.84± 9.69□金辛鎮痛液中劑量組 5.77±0.44△ 7.39±0.70△ 14.26±0.95△ 34.32±10.86△金辛鎮痛液高劑量組 5.14±0.41△ 7.20±0.60△ 13.78±1.21△ 32.93± 9.85△組別

表2 對血漿黏度、紅細胞聚集指數、全血高低相對指數的影響（±s）Tab.2 Effecton plasma viscosity,erythrocyte aggregation index and wholeblood high or low relative index（±s）

表2 對血漿黏度、紅細胞聚集指數、全血高低相對指數的影響（±s）Tab.2 Effecton plasma viscosity,erythrocyte aggregation index and wholeblood high or low relative index（±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.01；與模型對照組比較，△P＜0.01 或□P＜0.05。

全血低切相對指數正常對照組 1.37±0.08 7.09±0.93 3.16±0.64 17.91±2.04模型對照組 1.98±0.17*9.90±1.09* 4.36±0.72* 25.46±2.78麝香舒活精組 1.78±0.16□ 8.62±0.74△ 3.84±0.53□ 20.17±1.80△金辛鎮痛液低劑量組 1.79±0.16□ 8.30±0.64△ 3.83±0.43□ 20.25±1.58△金辛鎮痛液中劑量組 1.63±0.18△ 7.62±0.93△ 3.65±0.52△ 19.01±1.28△金辛鎮痛液高劑量組 1.44±0.26△ 7.32±0.56△ 3.33±0.44△ 18.59±1.36△組別 血漿黏度（mPa/秒）紅細胞聚集指數全血高切相對指數

3.2 對模型大鼠血漿ET-1和NO的影響 與正常對照組比較，模型對照組大鼠血漿ET-1的含量明顯增加，并且NO含量明顯減少，兩者差異均有統計學意義。金辛鎮痛液3個劑量組和陽性對照麝香舒活精組均能降低ET-1的含量，和提高NO的含量，與模型對照組比較，P＜0.01或P＜0.05，提示金辛鎮痛液能調節ET-1/NO平衡，改善血瘀狀態。見表3。

表3 對血瘀證模型大鼠血漿ET-1和NO的影響（±s）Tab.3 Effecton plasma ET-1 and NO in ratswith blood stasis（±s）

表3 對血瘀證模型大鼠血漿ET-1和NO的影響（±s）Tab.3 Effecton plasma ET-1 and NO in ratswith blood stasis（±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.01；與模型對照組比較，△P＜0.01 或□P＜0.05。

組別 ET-1（pg/L） NO(μmol/mL)正常對照組 128.31±23.59 43.02±14.41模型對照組組 189.00±27.19* 17.51±8.10*麝香舒活精組 157.47±38.83□ 32.43±17.20□金辛鎮痛液低劑量組 159.44±35.89□ 32.56±17.92□金辛鎮痛液中劑量組 149.24±31.23△ 34.82±22.56□金辛鎮痛液高劑量組 138.11±32.71△ 38.21±22.56△

4 討論

中醫學認為，凡離經之血不能及時排出和消散，停留于體內，或因氣虛、氣滯、寒凝、熱結、痰阻、濕濁、外傷、飲食、七情等病因所致血行不暢，停遏于經脈之內，及瘀積于臟腑組織器官的，均稱為瘀血。《素問·調經論》曰：“寒獨留則血凝泣，凝則脈不通?！薄瓣枤馓撍t脈道拘急，血行不暢而寒凝血瘀。”根據此理論，擬冰水浴刺激造成血瘀證模型，另外結合皮下注射腎上腺素，因為腎上腺素為α、β受體興奮劑，具有收縮外周血管和增加心臟收縮力的作用，通過與冰水浴相結合，可使外周血管強烈收縮，心臟后負荷增加，心肌耗氧代謝增加，心功能逐漸下降，從而使血液運行障礙，血液黏度增加，形成瘀血的病理改變[3]，從而建立急性血瘀模型。實驗研究表明血瘀證與血液循環障礙和內皮功能、血液濃黏聚凝滯狀態、血小板活化和黏附聚集、組織細胞代謝異常、免疫功能障礙等多種生理病理的改變有很大關聯。血液流變學指標異常已作為診斷血瘀證的重要客觀指標[4]，在研究中另結合動物表征，以證明造模成功及觀察用藥后血液流變學改善程度。

近年研究表明[5]，血管不僅是一個具有舒張功能的血液循環管道，而且是一個代謝活躍的內分泌器官，它可產生和分泌多種血管活性物質，以自分泌、旁分泌的方式構成一個復雜的功能單位以調節血管的舒縮及代謝功能。其中，內皮源性收縮因子，尤其是“內皮素”及內皮源性舒張因子,主要是NO，是目前研究較多的一對血管活性物質。NO和ET在血管壁中調節彼此的合成/釋放及生物學行為，ET促進內皮細胞NO的合成，NO又對ET誘發的血管收縮發揮反饋調節作用，而抑制內皮素的生物合成，這一對血管活性物質的平衡對于維持正常的血管張力起著主要作用。當血脈瘀滯時，氣血運行不暢，引起微循環障礙，血管舒縮功能和血管內皮受損，其細胞分泌功能失調或紊亂，造成ET分泌增多，而NO分泌減少，引發ET、NO平衡失調，因而導致血管收縮，血液瘀滯，血管通透性增加，血細胞聚集，血液呈高凝狀態等血瘀的表現[6]。因此，臨床上常用ET/NO比值判斷血瘀證的嚴重程度[7-8]。ET是現知最強的縮血管物質[9]，目前研究認為[10]，其對血管的強大收縮作用機制是這樣產生的：ET-1與血管平滑肌細胞膜上的特異性受體結合，激活細胞內磷酸酯酶C，生成三磷酸肌醇（IP3），及二酰甘油，IP3使細胞內儲存鈣釋放，細胞內鈣水平升高，使血管持久收縮（第一時相）。另外，ET通過G蛋白間接激活電壓依賴性Ca2+通道，使血管壁平滑肌細胞的外鈣內流；ET也可能直接作用于血管壁平滑肌細胞膜上的雙氫吡啶類敏感的鈣通道上，產生胞內游離鈣濃度的持久升高(即第二時相)。血管壁平滑肌細胞內游離鈣濃度經過第一、二時相的持久升高則產生了血管的強烈、長久的收縮效應。由于ET-1具有普遍收縮微動脈、微靜脈的作用，因此ET-1有使微循環血量減少、血流速度變慢，從而有利于血管內血栓形成的作用，在臨床和基礎實驗中都觀察到ET對血液凝固和纖維蛋白溶解系統有著密切的關系，可加強凝血過程。

研究結果顯示麝香舒活精組、金辛鎮痛液低中高劑量組與模型組比較，能不同程度地降低大鼠血液流變學指標，使大鼠血漿ET-1減少，NO明顯增多，差異均有統計學意義。該結果提示金辛鎮痛液對血瘀證模型大鼠有著明顯的活血化瘀作用，其抗血瘀證形成作用可能與抑制血管內皮釋放ET-1及促進N0分泌有關，但是其發揮作用的物質基礎和深層機制有待于進一步研究。

[1]張紅星，易艷東，劉 倩，等.金辛鎮痛噴霧劑抗炎鎮痛作用的實驗研究[J].湖北中醫雜志，2006,28（7）：10-11.

[2]張紅星，鄒 然，黃國付，等.中藥離子滲透治療腰椎間盤突出癥療效觀察[J].湖北中醫雜志，2009,31（1）：13-14.

[3]苗明三，朱飛鵬.常用醫藥研究動物模型[M].北京：人民衛生出版社，2007:438-439.

[4]中國中西醫結合研究會.血瘀證的診斷標準[J].中國中西醫結合雜志，1987，7（3）:129-130.

[5]姜 帆，姜 船.一氧化氮(NO)在臨床醫學中的意義[J].現代檢驗醫學雜志,2008,22(6):63-65.

[6]李莎莎，肖 雪，王躍生，等.血瘀證與活血化瘀研究進展[J].河南中醫學院學報，2009，24（1）：102-104.

[7]陳可冀,馬曉昌.關于傳統血瘀證的現代分類[J].中國中西醫結合雜志,2000,20(7):487-488.

[8]余運賢，梁 暉，黃 健，等.急性腦梗死血瘀證與一氧化氮、內皮素相關性研究[J].中國中西醫結合雜志，2000，20（7）：501－502.

[9]武哲麗，陳 群，徐志偉，等.肝病瘀血舌象患者與血瘀證各組ET/NO的臨床實驗研究[J].四川中醫，2008，26(5):4-5.

[10]陳可冀，史載祥.實用血瘀證學[M].北京：人民衛生出版社，1999:75-80.

Effectsof Jinxin zhentong linimenton hemorheological changesand endothelial function in ratswith acuteblood stasis syndrome

ZHOU Li,QIQing,ZHANGHong-xing,etal
（DepartmentAcup-Moxibustion,Wuhan Intergrated TCM andWestern Medicine Hospital,Wuhan 430022,China）

[Objective]Through observing the effectsof Jinxin zhentong linimenton hemorheological changes,endothelin-1(ET-1)and Nitrogenmonoxid(NO)in ratswith acute blood stasis,its function of promoting blood circulation to remove blood stasiswas investigated.[Methods]The acute blood stasismodel in ratswere established with subcutaneous injection of high-dose adrenaline hydrochloride and being socked in ice-water.The indexes of hemorheological parameters,ET-1 and NO in rats with acute blood stasis were detected.[Results]Therewassignificantdeferenceofhemorheologicalchanges(P＜0.01)between themodelgroup and thenormalgroup.Combining with the appeared characteristics itwas demonstrated that the acute blood stasismodel in rats was successfully established.Shexiang Shuhuojing group and Jinxin zhentong liniment in low/middle/high doses could notonly decrease the hemorheological indexs in different degrees,butalso reduceplasma ET-1(P＜0.01 or P<0.05).Theexpression ofNOwas remarkably increased,(P＜0.01 or P＜0.05).[Conclusion]Jinxin zhentong linimentcan obviously promote blood circulation to remove blood stasis.

Jinxin zhentong liniment;acute blood stasismodel;hemorheology;endothelin-1;nitrogenmonoxide

R285.5

A

1672-1519(2011)03-0323-03

湖北省武漢市科技攻關計劃項目（20065009138-05）。

周 利（1973-），女，碩士，副主任醫師，主要從事針灸治療臨床研究工作。

張紅星。

2011-03-05）