RP-HPLC法測定鹽酸胺碘酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量Δ

譚常青，周金彩，龍紅萍（1.廣東佛山市南海區桂城醫院，佛山市 5800；.湖南科技職業學院，長沙市 410004；.中南大學藥學院，長沙市 41001）

胺碘酮（Amiodaros）作為一種高效而安全的抗心律失常藥物已被越來越多地應用于臨床[1～3]。為了克服目前劑型的缺陷和缺點[4～6]，更好地提高患者的依從性和減少藥物引起的不良反應，筆者根據時辰藥理學的原理，研制了一種新的口服劑型——鹽酸胺碘酮包衣脈沖片。目前，胺碘酮制劑的含量測定方法主要有光譜分析、電化學分析和色譜分析等，鑒于高效液相色譜法具有的高分離效率、高靈敏度及良好的重現性等優點，筆者在參考相關文獻的基礎上，嘗試采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法和外標法測定鹽酸胺碘酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量[7，8]。結果表明，此方法簡便、快速、準確、靈敏度高、重復性好，可用于該制劑的質量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型HPLC儀，包括低壓四元泵、自動進樣器、柱溫箱、DAD檢測器、ChemStations色譜工作站（美國安捷倫科技有限公司）；UVProbe-2450紫外-可見分光光度儀（日本島津公司）；BP211D電子天平（0.00001 g，德國塞多利斯公司）。

鹽酸胺碘酮包衣脈沖片（實驗室自制，批號：20100416、20100418、20100420，規格：每片200 mg）；鹽酸胺碘酮對照品（上海九福藥業公司，批號：20080716，純度：99.9%）；乙腈為色譜純，水為純凈水并經0.45 μm水系濾膜過濾，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：2%三乙胺（用磷酸調pH至4.8）-乙腈（40∶60）；檢測波長：240 nm；流速：1.0 mL·min－1；進樣量：20 μL；柱溫：25 ℃。理論板數不小于8000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 稱取鹽酸胺碘酮對照品約25 mg，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加流動相適量（約20 mL），超聲溶解，放冷至室溫后，流動相稀釋至刻度線，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，取濾液作為對照品貯備液（0.5 mg·mL－1）。精密量取對照品貯備液10.0 mL，置于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得濃度為0.1 mg·mL－1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取鹽酸胺碘酮包衣脈沖片20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于鹽酸胺碘酮5 mg），置于50 mL容量瓶中，加流動相適量（約20 mL），超聲溶解，放冷至室溫后，流動相稀釋至刻度線，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 精密稱取約相當于含主藥鹽酸胺碘酮5 mg的處方輔料量，置于50 mL容量瓶中，加流動相適量（約20 mL），超聲溶解，放冷至室溫后，流動相稀釋至刻度線，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，即得陰性對照溶液。

2.3 方法專屬性考察

分別精密吸取陰性對照溶液、對照品溶液及供試品溶液各20 μL，按“2.1”項下色譜條件測定。結果表明，輔料、鹽酸胺碘酮對照品及供試品色譜峰均很好分離，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.陰性對照；B.對照品；C.供試品；1.鹽酸胺碘酮（tR＝25.061 min）Fig 1 HPLC chromatogramsA.negative control；B.reference substance；C.sample；1.amiodarone hydrocholride（tR＝25.061 min）

2.4 線性關系考察

精密量取對照品貯備液2.0、4.0、8.0、10.0、12.0、16.0、25.0 mL，置于50 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得濃度為 40、60、80、100、120、160、200 μg·mL－1的系列標準濃度的溶液。分別精密吸取20 μL，注入HPLC儀，記錄色譜圖。以峰面積（A）對濃度（C，μg·mL－1）進行線性回歸分析，得回歸方程A＝302.48C+20.742（r＝0.9999，n＝7）。結果表明，鹽酸胺碘酮檢測濃度在0.020～0.250 mg·mL－1范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

2.5 精密度試驗

分別精密吸取對照品溶液20 μL，注入HPLC儀，在同一天內連續進樣6次，并連續測量3 d，按“2.1”項下色譜條件測定。結果，日內RSD＝0.42%（n＝6），日間RSD＝0.58%（n＝3），表明本方法精密度較好。

2.6 穩定性試驗

分別精密吸取供試品溶液20 μL，室溫下于0、2、4、8、12、24 h注入HPLC儀，按“2.1”項下色譜條件測定。結果，RSD＝0.21%（n＝6），表明供試品溶液24 h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品（批號：20100418），分別按“2.2.2”項下方法平行制備成3份供試品溶液。精密吸取供試品溶液20 μL，注入HPLC儀，按“2.1”項下色譜條件測定，并記錄峰面積，采用外標法以峰面積計算鹽酸胺碘酮的含量。結果，RSD＝0.45%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗[7]

取已知含量的鹽酸胺碘酮包衣脈沖片20片（批號：20100416，含鹽酸胺碘酮為標示量的99.32%），精密稱定，研細，精密稱取適量粉末（約相當于鹽酸胺碘酮5 mg），共9份，然后按照樣品中鹽酸胺碘酮量的80%、100%、120%分別精密加入“2.2.1”項下對照品貯備液（鹽酸胺碘酮的濃度為0.5 mg·mL－1）8.0、10.0、12.0 mL，按“2.2.2”項下供試品溶液的方法制備，再按“2.1”項下色譜條件測定含量，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests of amiodarone hydrocholride（n＝9）

2.9 樣品含量測定

分別取本品3批樣品適量（相當于鹽酸胺碘酮5 mg），按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20 μL，注入HPLC儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 2 Content determination of samples（n＝3）

3 討論

筆者研制的鹽酸碘胺酮包衣脈沖片是根據時辰藥理學的原理設計的新型控釋制劑。參照2010年版《中國藥典》（二部）[9]中鹽酸胺碘酮片含量測定項下HPLC法測定主藥含量，由于使用了氨水-甲醇-乙腈混合流動相，在所記錄的對照品色譜圖中導致溶劑峰多。而本試驗鹽酸胺碘酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量測定采用2%三乙胺-乙腈為流動相，組分簡單，基線平穩，柱效高，峰形對稱性好。采用RP-HPLC法對鹽酸碘胺酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量進行測定，結果3個不同批號的鹽酸碘胺酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量均符合規定。

[1]沈志堅.胺碘酮治療快速性心律失常的臨床效果研究[J].中國醫藥指南，2010，8（20）：26.

[2]卞海林，王育林，彭 偉，等.鹽酸胺碘酮治療慢性房顫的臨床研究[J].藥學與臨床研究，2009，17（4）：331.

[3]楊春宇.胺碘酮治療快速性心律失常臨床觀察[J].中國當代醫藥，2009，16（17）：63.

[4]Punnam，SR，Goyal SK，Kotaru VP，et al.Amiodarone-A’Broad Spectrum’Antiarrhythmic Drug[J].Cardiovascular&Haematological Disorders-Drug Targets，2010，10（1）：73.

[5]Eppert HD，Goddard KB.Administration of amiodarone during resuscitation of ventricular arrhythmias[J].Journal of Emergency Nursing：JEN：Official Publication of the Emergency Department Nurses Association，2010，36（1）：26.

[6]Boutros NY，Dilly S，Bevan DH.Amiodarone-induced bone marrow granulomas[J].Clin Lab Haematol，2000，22（7）：167.

[7]方繼輝，若 婧.高效液相色譜法測定鹽酸胺碘酮分散片的含量[J].廣東藥學院學報，2006，22（2）：164.

[8]胡晉紅，張立超，李 珍，等.鹽酸胺碘酮制劑質量研究：市售片體外溶出度考查[J].第二軍醫大學學報，2000，21（2）：140.

[9]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：770-771.