紫檀芪對應激負荷具有高脂血癥模型小鼠血脂及免疫功能的影響

胡向陽， 舒曉春*， 馬 義

(1.中山大學附屬第五醫院，廣東珠海 519000;2.暨南大學生命科學院，廣東廣州 510632)

紫檀芪對應激負荷具有高脂血癥模型小鼠血脂及免疫功能的影響

胡向陽1， 舒曉春1*， 馬 義2

(1.中山大學附屬第五醫院，廣東珠海 519000;2.暨南大學生命科學院，廣東廣州 510632)

目的 觀察紫檀芪對應激負荷具有高脂血癥模型小鼠血脂及免疫功能的影響。方法 建立應激負荷+高脂血癥小鼠模型，將28只雄性昆明小鼠隨機分為4組:正常對照組、模型對照組、非諾貝特組、紫檀芪組，檢測各組小鼠血脂水平及脾臟T淋巴細胞亞群的變化。結果 與模型對照組比較，紫檀芪組小鼠血清TC、TG、LDL-C量降低;脾臟CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平升高。與非諾貝特組比較，紫檀芪組小鼠血清TG、LDL-C量降低，脾臟CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平升高。結論 紫檀芪對應激負荷+高脂血癥模型小鼠血脂及免疫功能具有一定的干預作用。

紫檀芪;應激;高脂血癥;T淋巴細胞亞群

應激負荷時機體產生系列的防御反應，涉及到神經、內分泌及免疫等生理功能，研究發現，持續的應激負荷會使小鼠腸系膜脂肪酶活性降低，導致機體血脂代謝紊亂［1］。紫檀芪(Pterostilbene)是白藜蘆醇衍生物，在藍莓、黑莓等漿果中含量豐富，具有預防氧化應激反應、抗真菌、抗細胞增殖等作用［2-3］。非諾貝特是氯貝丁酸衍生物類血脂調節藥，通過抑制極低密度脂蛋白和三酰甘油的生成并同時使其分解代謝增多，降低血低密度脂蛋白、膽固醇和三酰甘油，還具有抗氧化和抗應激作用。本實驗選用非諾貝特作為對照藥物，對紫檀芪在應激負荷具有高脂血模型小鼠血脂及免疫功能影響進行初步的研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康昆明小鼠，雄性，體質量(20±3)g，由南方醫科大學實驗動物中心提供，合格證號:粵檢證字2009B570，室溫，適應性飼養1周后用于本實驗。

1.2 試劑與儀器 紫檀芪，日本富士株式會社，98%，HPLC，批號:147536- 200932;非諾貝特膠囊(商品名:力平之，法國利博福尼制藥公司，規格:200 mg，編號:B1420103061，);非諾貝特膠囊、紫檀芪臨用前以生理鹽水溶解，質量濃度為1 mg/mL。膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒(南京建成生物試劑公司);抗小鼠CD3、CD4、CD8等單克隆抗體試劑盒(浙江東甌生物工程有限公司)。全自動生化分析儀(日本日立-7060型);FACSCalibur流式細胞儀(BD-TY1218)。

1.3 動物分組 健康雄性昆明小鼠28只，數字隨機分組法分為4組，即正常對照組、模型對照組、非諾貝特組、紫檀芪組。

1.4 動物模型制備 除正常對照組外，參照Bozoky［4］等方法建立小鼠高脂血模型，小鼠腹腔注射10%泰洛沙泊溶液3 mL/kg，禁食12 h后進行試驗。非諾貝特組、紫檀芪組均以10 mg/kg劑量灌胃，正常對照組、模型對照組則以等體積生理鹽水灌胃。參照文獻方法［5］，除正常對照組外，其余各組小鼠在給藥后2 h，放進小鼠束縛裝置，束縛應激負荷12 h，束縛應激期間小鼠禁食禁水，連續4周。動物處死前禁食12 h，腹腔靜脈取血，分離血清，取出脾臟。

1.5 血脂檢測 將新鮮血液制成血清后，使用全自動生化分析儀，檢測 TC、TG、LDL-C、HDL-C 的水平。

1.6 脾臟T淋巴細胞亞群的檢測 將脾臟置于玻璃勻漿器中，添加PBS溶液研磨，4℃ 1 000 r/min離心10 min，棄上清液，加入紅細胞裂解液，混勻，靜置5 min后加PBS溶液終止裂解反應，離心5 min，棄上清液，PBS溶液調整脾臟淋巴細胞數為5×106個/mL，取流式細胞分析專用管，每管加入細胞懸液100 μL。每個樣本制備3管，分別加入CD3、CD4、CD8抗體，室溫避光孵育30 min后，各管加入500 μL PBS溶液，振蕩混勻后上流式細胞儀分析。

1.7 統計學處理 使用SPSS14.0統計軟件對數據進行重復測量資料的方差分析，定量指標以(±s)表示，方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗，P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組小鼠血脂情況的變化 與正常對照組比較，各組小鼠血清TC、TG、LDL-C量均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05);模型對照組HDL-C量降低(P＜0.05)。與模型對照組比較，非諾貝特組、紫檀芪組小鼠血清 TC、TG、LDL-C量均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05)，兩組HDL-C量均升高(P＜0.05)。與非諾貝特組比較，紫檀芪組小鼠血清 TG、LDL-C量降低(P＜0.05)，TC、HDL-C量無顯著差異(P＞0.05)。見表1。

表1 各組小鼠血脂情況比較(n=7，±s)

注:與正常對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;與模型對照組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0. 01;與非諾貝特組比較，▲P ＜0.05。

組別 TG/(mmol/L) TC/(mmol/L) HDL-C/(mmol/L) LDL-C/(mmol/L)正常對照組0.62 ±0.13 1.54 ±0.17 1.28 ±0.30 0.49 ±0.12模型對照組 3.46±1.07＊＊ 5.18±0.43＊＊ 0.83±0.11* 2.75±0.33＊＊非諾貝特組 1.69±0.30＊△△ 2.48±0.17＊△△ 1.03±0.24△ 0.76±0.23＊△△紫檀芪組 1.12 ±0.28＊△△▲ 2.25±0.14＊△△ 1.27±0.16△ 1.05±0.22＊＊△△▲

2.2 各組小鼠脾臟T淋巴細胞亞群的變化 與正常對照組比較，模型對照組小鼠脾臟 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均顯著降低(P＜0.01);非諾貝特組 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05);紫檀芪組 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05);紫檀芪組CD3+變化沒有差異(P＞0.05)。與模型對照組比較，非諾貝特組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+無顯著差異(P＞0.05);紫檀芪組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有顯著升高(P＜0.01)。與非諾貝特組比較，紫檀芪組 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有不同程度的升高(P＜0.01或P＜0.05)。見表2。

表2 各組小鼠脾臟T淋巴細胞亞群的變化比較(n=7，±s)

表2 各組小鼠脾臟T淋巴細胞亞群的變化比較(n=7，±s)

注:與正常對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;與模型對照組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0. 01;與非諾貝特組比較，▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01。

組別 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+/%正常對照組31.46 ±2.15 17.21 ±3.28 9.27 ±1.39 1.64 ±0.11模型對照組 20.53±3.06＊＊ 9.37±1.14＊＊ 5.22±1.51＊＊ 0.73±0.12＊＊非諾貝特組 22.37±1.26* 8.15±1.33＊＊ 6.32±0.43* 0.80±0.05＊＊紫檀芪組 36.14±3.11△△▲ 27.18±2.12＊＊△△▲▲ 13.61±1.52＊△△▲▲ 2.37±0.11＊△△▲▲

3 討論

應激是機體對內外環境刺激的反應，應激對機體的影響研究越來越受到重視。血脂代謝包括外源性代謝途徑和內源性代謝途徑，脂肪細胞本身就是一個內分泌器官，能分泌脂肪細胞因子、激素或其他調節物［6］。李廣群等［7］研究發現，應激負荷通過下丘腦-垂體-腎上腺軸和植物神經系統的交感神經，對血脂代謝進行神經內分泌調節，進而影響動脈粥樣硬化的發生、發展。應激可引起機體一系列非特異性神經-內分泌反應，長期的應激負荷能破壞免疫器官的正常結構，在脾臟和胸腺中可見典型凋亡細胞［8］。T淋巴細胞是機體免疫細胞，T淋巴細胞各亞群水平間的相對穩定是機體發揮正常免疫功能的重要基礎，CD3+T細胞反映總T淋巴細胞水平，CD4+T細胞、CD8+T細胞及CD4+T/CD8+T比值在一定程度上表示輔助性T細胞和抑制性T細胞及其比值，CD4+T/CD8+T比值減少是機體免疫缺陷的重要指征［9］。

本實驗在應激負荷+高脂血癥小鼠模型基礎上，選用非諾貝特膠囊作為對照藥物，研究紫檀芪對束縛應激條件下高脂血模型小鼠血脂及免疫功能的作用。實驗結果發現:與模型對照組比較，紫檀芪組小鼠血清TC、TG、LDL-C含量均有不同程度的降低;脾臟 CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有顯著升高。與非諾貝特組比較，紫檀芪組小鼠血清高血脂水平降低，脾臟T淋巴細胞免疫指標有不同程度的升高。本實驗結果提示在應激負荷及高血脂條件下，血脂代謝與脾臟T淋巴細胞免疫之間可能存在著一定的相互影響或作用，但其應激負荷-血脂代謝之間的調控或作用機制尚不明確，紫檀芪對其調控或作用機制的作用途徑也需要進一步研究。

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［2］王曉琴，王振華，劉 梅，等.氧化還原調控在紫檀芪誘導HeLa細胞內質網凋亡途徑中的作用［J］.中國藥理學通報，2010，26(9):1184-1186.

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［4］Bozoky Z，Balogh L，Mathe D，etal.Evaluation of rat and rabbit sera lipoproteins in experimentally induced hyperlipidemia by analytical ultracentrifugation［J］.Eur Biophys J，2006，3(35):205-213.

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R285.5

B

1001-1528(2011)08-1400-03

2011-02-28

廣東省中醫藥管理局科研基金(A2010104)

胡向陽(1975—)，博士，主治醫師，主要從事腦血管及神經系統疾病研究。Tel:(0756)2528851，E-mail:aikongzhi@163.com

*通信作者:舒曉春(1965—)，副主任醫師，主要從事內分泌及代謝疾病研究。Tel:(0756)2528622，E-mail:zhshuxc@163.com