加替沙星膠囊的藥代動力學(xué)及生物等效性評價

蘇冀紅，李奇矩

1.長沙市婦幼保健院藥劑科，湖南長沙 410007；2.湖南省人民醫(yī)院藥劑科，湖南長沙 410005

加替沙星是新一代日本杏林制藥公司研發(fā)的氟喹諾酮類廣譜抗菌藥物，現(xiàn)將其專利權(quán)已轉(zhuǎn)讓給美國施貴寶制藥公司，有口服與靜脈注射兩種規(guī)格，已在全球多個國家等獲得許可上市[1]。它抗菌譜廣，抗菌活性強(qiáng)，不但對革蘭陰性菌包括大腸埃希菌、流感嗜血桿菌、克雷伯菌屬、銅綠假單胞菌、不動桿菌屬、沙門菌屬等具有較好的抗菌活性，而且對革蘭陽性球菌包括金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌及厭氧菌也有較好的抗菌活性，對非典型病原體作用增強(qiáng)，并具有良好的藥代動力學(xué)特性[2]。本實(shí)驗(yàn)比較了在我國健康成年男性志愿者中口服國產(chǎn)和進(jìn)口加替沙星片劑的藥代動力學(xué)參數(shù)，以評估兩者的生物等效性，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 儀器

HPLC 1100高壓液相色譜儀，美國Agilent，配備自動進(jìn)樣器和二極管陣列檢測器；Agilent化學(xué)高級色譜數(shù)據(jù)工作站；分析天平，上海生工電子；高速冷凍離心機(jī)，日本Olympus；HY-4多用調(diào)速振蕩器；北京醫(yī)用儀器廠：GL-88B旋渦混合器，上海醫(yī)用儀器廠。

1.2 試劑

乙腈為色譜純，四丁基溴化銨、為分析純。受試制劑國產(chǎn)加替沙星（規(guī)格：200 mg/片，重慶賽維藥業(yè)有限公司，批號：060701）；參比制劑進(jìn)口加替沙星（規(guī)格：200 mg/片，美國施貴寶制藥公司，批號：060301）；加替沙星對照品（加替沙星標(biāo)準(zhǔn)液，中國藥品生物制品檢定所，含量：98.9%，批號：130518-200402）。

1.3 受試對象與分組

選擇健康男性40例，平均年齡（36.5±3.0）歲，平均體重（61.5±5.5）kg。經(jīng)病史詢問，并全面體檢。然后采用雙周期自身隨機(jī)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。40例試驗(yàn)者隨機(jī)等分為兩組，試驗(yàn)者于試驗(yàn)前1 d晚餐后，禁食不禁水12 h，次日清晨空腹分別單次口服加替沙星膠囊試驗(yàn)制劑和參比制劑40 mg，以250 ml溫開水送服，并作記錄。服藥2 h后可自由飲水，服藥4 h后進(jìn)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)餐。試驗(yàn)期間由醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行監(jiān)護(hù)。間隔7 d后交叉給藥，重復(fù)上述試驗(yàn)。分別于服藥前（0 h）和服藥后1.0、4.0、8.0 h由前臂肘靜脈取血5 ml。血樣置于含有肝素的離心管中，立即離心5 min。分離出血漿，置-40℃冰箱中保存，備測。

1.4 血漿樣品測定

精密吸取待測樣品血漿0.5 ml，置于eppendorf 2 ml離心試管中，精密加入20%的高氯酸200μl，漩渦振蕩1 min，15 000 r/min，離心 8 min，取上清液 100 μl，進(jìn)樣，以外標(biāo)法定量，色譜工作站自動計(jì)算并打印加替沙星的色譜峰面積，將峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，求出加替沙星的血漿濃度。

1.5 色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18柱；固定進(jìn)樣環(huán)：100μl；流動相：甲醇-0.1 mol/L乙酸胺緩沖液-二乙胺；流速：0.8 ml/min；檢測波長：295 nm；柱溫：室溫。在此條件下，加替沙星血漿中內(nèi)源性雜峰分離良好。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

取空白混合血漿2.0 ml，共5份，分別置于試管中，加入適量加替沙星標(biāo)準(zhǔn)液，使血漿中加替沙星濃度依次分別為0.15、0.31、0.62、1.24、2.48 mg/L，按下述血漿樣品測定方法操作，以加替沙星的血漿濃度C（mg/L）對加替沙星的色譜峰面積（A）作線性回歸，求得加替沙星的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：C=2.97×10-6A-0.07（n=5）。

1.7 回收率試驗(yàn)

取空白血漿3份，加入適量的加替沙星標(biāo)準(zhǔn)液，分別配成高、中、低三個濃度的加替沙星樣品5.0、1.2和0.3 mg/L。按樣品測定法各測定含量3次。計(jì)算方法回收率，得到平均值依次分別為（97.5±1.5）%、（96.5±1.8）%和（96.5±2.8）%。結(jié)果見表1。

表 1 回收率試驗(yàn)（mg/ml）Tab.1 Recovery test(mg/ml)

1.8 精密度試驗(yàn)

方法同回收率方法，求得加替沙星RSD分別為1.05%、1.65%、5.42%。將上述3個濃度的樣品在8 d內(nèi)陸續(xù)各重復(fù)測定6次，求得對應(yīng)的RSD分別為1.65%、3.55%和7.32%。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 15.0程序進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，若是正態(tài)分布，用方差分析，組間、組內(nèi)比較；若是非正態(tài)分布，用秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05作為具有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

受試者單劑口服國產(chǎn)和進(jìn)口加替沙星片的藥物動力學(xué)參數(shù)見表1，結(jié)果顯示口服國產(chǎn)和進(jìn)口加替沙星后兩組的半衰期、峰時間、峰濃度和滯后時間無顯著性差異。同時生物等效性也無顯著性差異，可認(rèn)為兩種制劑具有生物等效性。見表2。

3 討論

在藥物使用上，加替沙星口服后經(jīng)胃腸道快速吸收，食物對其吸收影響輕微[3]。加替沙星膠囊血清蛋白結(jié)合率約為20%，與血藥濃度無關(guān)。在唾液中濃度為血藥濃度的80%，口服200 mg加替沙星膠囊后平均痰中濃度為2.1μg/ml，與血藥濃度的比為1.25，與其他同類藥物相比加替沙星膠囊在痰中轉(zhuǎn)移良好。加替沙星吸收后，20%與血漿蛋白結(jié)合[4]。在體內(nèi)分布廣泛，單劑口服加替沙星100、200、400及600 mg后，其平均血漿半衰期與劑量無關(guān)?？诜犹嫔承?00 mg，每日2次，連續(xù) 7 d，在第 1、4、7 d 其半衰期分別為 5.4、7.0、5.7 h[5]。 加替沙星幾乎不經(jīng)代謝以原藥形式隨尿液排出。單劑口服加替沙星400 mg，72 h用藥量的88%左右由尿液排泄[6]。

表2 口服國產(chǎn)和進(jìn)口加替沙星后藥物動力學(xué)與生物等效性參數(shù)（n=20，x±s）Tab.2 Pharmacokinetics and bioequivalence parameters of oral administration of domestic and imported gatifloxacin(n=20，x±s)

在加替沙星膠囊的藥代動力學(xué)及生物等效性評價上，主要用高效液相色譜法，它具有進(jìn)樣量少、靈敏度高和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，適合生物體液的分析，有關(guān)加替沙星膠囊的高效液相色譜法分析應(yīng)用的文獻(xiàn)報道最多，如用該法測定血清、尿液、腦脊液、唾液、糞便中的藥物[7]。對于生物體液中的蛋白質(zhì)或其他生物大分子的影響，用柱切換技術(shù)預(yù)處理柱，分離除去基質(zhì)，使分析簡單、快速[8]。本文使用的高效液相色譜法為吸收波長為295 mn，流動相為甲醇-0.1 mol/L乙酸胺緩沖液-二乙胺；流速為0.8 ml/min，結(jié)果重現(xiàn)性良好，回收率與精密率也比較高。同時本文進(jìn)行了對照分析，結(jié)果顯示受試制劑的相對生物利用度高，且受試制劑與參比制劑的藥代動力學(xué)無顯著性差異，說明兩種制劑在臨床上可相互替代使用。

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