高效液相色譜法測定尼可剎米注射液的含量

姜鋒衛(wèi)河南省焦作市藥品檢驗所，河南焦作 454000

尼可剎米注射液為中樞興奮藥，臨床上用于中樞性呼吸抑制及各種原因引起的呼吸抑制。為《中國藥典》（2010年版）二部所收載，檢測方法為分光光度法[1]，文獻報道的分析方法有GC[2]、磷光分析[3]。本研究用高效液相色譜法測定注射液中尼可剎米的含量，為控制藥品質(zhì)量，提供一種簡單、靈敏、快速準確的檢測方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（包括G1322A在線脫氣機、G1311A四元泵、G1329A進樣器G1314B VWD檢測器）；92SM-202A電子天平。尼可剎米原料（天津藥業(yè)焦作有限公司提供，含量為99.3%）；尼可剎米注射液，規(guī)格1.5 mL∶0.375 g（北京市永康藥業(yè)有限公司，10060224；天津藥業(yè)焦作有限公司，批號10052322、10071922）；色譜純乙腈，純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Eclipse DCB-C18（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相[4-5]為乙腈-水（20∶80）；檢測波長263 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30℃，進樣量10μL。

2.2 對照品溶液

用天平稱取尼可剎米原料0.553 g，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋釋至刻度，搖勻；得對照品溶液（5.490 mg/mL）。

2.3 供試品溶液的制備

取供試品5支，混勻。精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液（2.5 mg/mL）。

2.4 空白對照試驗

依據(jù)該藥的處方取輔料適量，按供試品溶液制備方法制備不含尼可剎米的空白對照溶液。分別取對照品溶液10μL、供試品溶液20μL、空白對照溶液10μL進樣。

從色譜圖上看出，在該色譜條件下，供試品溶液和對照品溶液中均出現(xiàn)相應(yīng)的尼可剎米色譜峰，而空白對照溶液未見色譜峰，表明空白樣品不干擾測定。結(jié)果見圖1。

圖1 尼可剎米的色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取濃度為5.490 mg/mL的對照液10 mL置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.549 mg/mL的對照液，分別取濃度為0.553 mg/mL的對照液10μL，20μL，30μL；濃度為 5.490 mg/mL的對照液5μL，10μL，20μL注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：A=3595.7C-8.6，r=0.9993；表明在濃度為0.549～10.980 mg/mL的范圍內(nèi)進樣，樣品量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

取供試品溶液（2.5 mg/mL），按上述色譜條件重復(fù)進樣6次，每次進樣10μL，測定峰面積，RSD=0.8%（n=6）。

表1 回收率實驗結(jié)果（n=6）

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批號樣品，照供試品溶液制備方法制作供試品溶液6份，分別測定，測得供試品中尼可剎米的平均含量為100.3%，RSD=1.3%（n=6），表明方法的重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別于 0，3，6，9，12 h 進樣 10 μL，測定峰面積，結(jié)果RSD為0.95%（n=5），說明供試品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗

精密量取供試品溶液（2.5 mg/mL）5 mL，置于10 mL容量瓶中；精密量取對照品溶液（5.49 mg/mL）2 mL，加入上述容量瓶中，加水至刻度，混勻。依此法平行制備6份，依次進樣，測定含量，結(jié)果見表1。

2.10 樣品含量測定

分別精取對照品溶液和供試品溶液各10μL注入色譜儀，按外標峰面積法計算尼可剎米含量。見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

取尼可剎米原料適量用流動相溶解，在200～400 nm的波長范圍內(nèi)進行掃描。結(jié)果在263 nm處有最大吸收，故選用263 nm為本方法的檢測波長。

作者試驗過程中，曾比較用乙腈-磷酸鹽流動相和乙腈-水流動相，結(jié)果顯示乙腈-水系統(tǒng)完全可以滿足本實驗的要求，主峰的峰形較好，考慮到減化操作，故采用乙腈-水系統(tǒng)。

分別用藥典方法和本實驗方法測定上述10052322、10060224、10071922三個樣品，結(jié)果藥典法分別為99.8%、96.9%、97.0%；本方法分別為100.3%、97.1%、96.9%，顯示本方法與藥典方法無明顯差異，可用于尼可剎米注射液的含量測定。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010：224.

[2] 候一斌.尼可剎米及其代謝產(chǎn)物的氣相色譜/質(zhì)譜法檢測[J].質(zhì)譜學(xué)報，1992，1（13）：57-60.

[3] 黃如衡，周東，何長清.尼可剎米經(jīng)犬氣道給藥后的藥物動力學(xué)與藥效學(xué)[J].中國藥理學(xué)報，1994，15（3）：271.

[4] 徐帆，馮恩富，徐貴麗，等.氨茶堿、多巴胺、尼可剎米注射液配伍穩(wěn)定性研究 [J].中國藥業(yè)，2009，18（23）：12-14.

[5] 鄭希林，吳瑞良.尼可剎米注射液的穩(wěn)定性考查[J].中國藥師，2000，3（6）：380.