同時蒸餾萃取法與GC-MS法對板栗葉揮發(fā)油化學(xué)成分分析

馬惠芬 ，閆爭亮 ，澤桑梓 ，李勇杰 ，寧德魯 ，余 珍

（1.云南省林業(yè)科學(xué)院，云南 昆明 650204；2.國家林業(yè)局云南珍稀瀕特森林植物保護(hù)和繁育重點實驗室，云南省森林植物培育與開發(fā)利用重點實驗室，云南 昆明 650204；3.中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)開放研究實驗室，云南 昆明 650204）

板栗（Castaneamollissima Blume）又名栗、中國板栗，是殼斗科栗屬的植物[1]，原產(chǎn)于中國，分布于越南、臺灣以及中國大陸地區(qū)，生長于海拔370～2 800 m的地區(qū)，多見于山地，已由人工廣泛栽培。《滇南本草》記載板栗葉可“治喉療火毒 ”，《現(xiàn)代實用中藥》中記載板栗葉“為收斂劑，外用涂漆瘡”，是民間常用中草藥[2]。目前，對板栗葉的揮發(fā)性化學(xué)成分的研究還很少，2008年何玲玲等[3]采用頂空-固相微萃取技術(shù)提取、氣相色譜 -質(zhì)譜分析，從板栗葉中分離鑒定了22各揮發(fā)性成分。本實驗采用同時蒸餾萃取法（SDE）提取板栗葉揮發(fā)油化學(xué)成分，利用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用方法分析板栗葉的揮發(fā)油化學(xué)成分，以期為進(jìn)一步綜合開發(fā)板栗資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料 本次分析測定的板栗樹葉樣本采自永仁縣油橄欖良種繁育基地。

1.1.2 儀器和試劑 所用溶劑為分析純正己烷；揮發(fā)性化學(xué)成分的分析儀器為Agilent Technologies公司的HP6890GC/5973MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。

1.2 方法

1.2.1 揮發(fā)性化學(xué)成分的提取 采用同時蒸餾法（SDE）提取板栗葉片揮發(fā)油[4-5]。將新鮮樹葉剪下后，迅速放入磨口玻璃瓶中密封，將玻璃瓶放入加有醫(yī)用冰袋的保溫瓶中。帶回實驗室后，用醫(yī)用小刀將韌皮部剪碎為2mm×2mm的碎屑，各稱取350 g放入同時蒸餾萃取裝置，正己烷萃取。同時蒸餾萃取5 h后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去正己烷，用無水硫酸鈉干燥。將所得提取液放入冰箱中保存，保存溫度為-10℃，備用。1.2.2 氣相色譜-質(zhì)譜測定條件 GC條件：HPSMS石英毛細(xì)管柱（30mm×0.25 mm×0.25μm）；柱溫120～260℃，程序升溫5℃/min，進(jìn)樣口溫度250℃；柱流量為1.0 mL/min，柱前壓100 kPa，分流比為10∶1。載氣為氦氣。

MS條件：電離方式EI，電子能量70 Ev，傳輸線溫度250℃，離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃；質(zhì)量范圍35～450 M/Z。采用wiley7n.1標(biāo)準(zhǔn)譜圖，計算機(jī)檢索定性。

2 結(jié)果與分析

圖1 板栗樹葉揮發(fā)物的總離子流圖

板栗葉的揮發(fā)油化學(xué)成分經(jīng)同時蒸餾萃取法（SDE）及氣相色譜-質(zhì)譜分析 ，得到總離子流色譜圖如圖 1所示。采用計算機(jī)對各峰質(zhì)譜圖進(jìn)行wiley7n.1標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫的檢索，根據(jù)質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行核對，利用峰面積歸一化法計算各組分的相對含量。共分離出47個色譜峰，鑒定出38個化合物，占揮發(fā)物組成的92.92%，結(jié)果見表1。

表1 板栗樹葉揮發(fā)性物質(zhì)的GC-MS分析結(jié)果

從表1可看出，板栗葉揮發(fā)性化學(xué)成主要由醇、烯、酯和醛酮類化合物組成，其中醇類物質(zhì)占的比重最大，達(dá)到53.9%，其次是酯，占15.94%。板栗葉的揮發(fā)油化學(xué)成分中含量相對較高的化合物為3-己烯-1-醇（33.98%），3-己烯乙酸酯（14.66%），壬醛（5.63%），香葉醇（4.80%），橙花叔醇（5.08%）。

3 討論

與何玲玲等[3]的結(jié)果相比較，試驗所得到的化合物數(shù)量更多，而且酯類、烯、醛酮類化合物更多，烷烴類化合物較少，得到的共同化合物共4個，分別是3-己烯-1-醇，乙酸己酯，1-辛醇，金合歡烯。雖然醇類化合物所占比例都是最大，但具體化合物的組成和相對含量的差別很大，這與提取方法有很大關(guān)系。同時蒸餾萃取法（SDE）對高沸點、低揮發(fā)性成分的分離比較有利，如對長鏈羧酸、醛、酯類物質(zhì)有較好的檢出。固相微萃取法（SPME）是對樣品進(jìn)行直接吸附，樣品處理時間短、步驟少，檢出香氣組分中的易揮發(fā)性化合物沒有發(fā)生變化[6-8]。兩種方法對樣品的分析效果各有優(yōu)缺點，兩種方法結(jié)合起來，得到的結(jié)果更為全面、可靠。

[1] 中國樹木志編輯委員會.中國樹木志[M].北京：中國林業(yè)出版社，1985.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上海人民出版社，1977.

[3] 何玲玲，王 新，陸慧寧.板栗葉揮發(fā)性成分研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（1）：85-86.

[4] 朱鳳妹，杜 彬，李 軍，等.利用GC-MS技術(shù)分析三棱揮發(fā)油化學(xué)成分[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2010，（22）：253-256.

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[6] 陳清嬋，徐永霞，吳 鵬，等.同時蒸餾萃取與頂空固相微萃取法分析豆豉揮發(fā)性成分[J].食品科學(xué)，2009，30（20）：327-330.

[7] 袁華根，賀生中，臧大存，等.同時蒸餾萃取和固相微萃取對雞肉湯揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)萃取效果的比較 [J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，21（12）：140-142，145.

[8] 胡麗花，蘇東海，蘇東民，等.同時蒸餾萃取-氣質(zhì)聯(lián)用分析饅頭揮發(fā)性物質(zhì)[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，（13）：6964-6966.