胃癌患者XIAP、XIAP mRNA表達與新輔助化療療效的關系

楊 巍，張建軍，白維君

(遼寧省腫瘤醫院，沈陽110042)

胃癌是臨床常見腫瘤，中晚期胃癌患者病死率很高。新輔助化療治療中晚期胃癌雖取得一定療效，但少數患者治療后病情沒有緩解反而進展，失去對局部病灶的控制，延誤手術、放療時機。因此，尋找簡單易行、靈敏度高、特異性強的篩查胃癌化療療效的方法非常必要。凋亡抑制蛋白(IAP)家族是近年發現的具有強烈凋亡抑制作用的蛋白質家族，X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白(XIAP)是其家族新成員，可通過抑制 Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9 而阻斷胃癌細胞凋亡過程。為探討胃癌患者XIAP、XIAP mRNA表達與新輔助化療療效的關系，我們進行了相關研究。現報告如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇2006～2008年在我院行新輔助化療的胃癌患者30例，男19例、女11例，年齡41～68歲、，病程1～3個月，均經手術及病理檢查確診。其中胃腺癌27例(高分化6例、中分化9例、低分化12例)，印戒細胞癌3例;病理分期均為Ⅲ期。根據其臨床療效及胃組織病理檢查分為有效組14例、無效組16例，并設10例胃炎患者的正常胃組織標本作對照。

1．2 治療方法 患者均采用FOLFOX7化療方案，即奧沙利鉑130 mg/m2靜滴2 h、第1天，亞葉酸鈣400 mg/m2靜滴、第1天，5-氟尿嘧啶2 400 mg/m2持續靜滴46 h，每2周為一周期;連續治療2個周期。

1．3 檢測方法

1．3．1 RT-PCR法檢測XIAP mRNA表達 取兩組活檢標本，根據試劑盒操作步驟、RT-PCR法檢測XIAP mRNA表達。RNA抽取、逆轉錄cDNA后，進行PCR擴增，PCR反應體積為25 ml，內含10×buffer 2．5 ml、Mg2+1．5 ml、dNTP 0．5 ml、cDNA 2．0 ml、Taq 酶1．5 U，引物1、2 各1 ml，用 dd·H2O 補足體系至25 ml。反應條件:94℃ 2 min，94℃ 30 s，57℃ 30 s，72 ℃ 60 s，共35個循環;72 ℃ 10 min，4 ℃2 h。以基因引物行 PCR擴增，β-actin為內對照，XIAP基因引物序列(略)。XIAP產物335 bp，退火溫度57℃，循環次數35次;β-actin產物159 bp，退火溫度57℃，循環次數35次。對PCR產物行瓊脂糖凝膠電泳，經激光密度掃描儀采集數據，以各基因與β-actin條帶的光密度比值作為分析指標，實驗重復3次，取平均值進行統計分析。

1．3．2 Western-blot技術檢測XIAP表達 對組織蛋白提取后，分別行蛋白質SDS-PAGE電泳、蛋白質轉膜。轉膜結束后，將凝膠蛋白質marker部分用0．5%氨基黑10B染色，觀察蛋白質轉移是否完全。最后進行抗體雜交，在自動電泳凝膠成像分析系統下成像，以Fluor Chen V2．0系統采集數據。以電泳條帶的密度值作為條帶強度指標，β-actin蛋白表達條帶強度為標準，用條帶密度值與相應的β-actin密度值比值作指標進行比較，實驗重復3次，取平均值進行統計分析。

1．4 統計學方法 采用SPSS16．0統計軟件，計量資料用±s表示，各組胃組織XIAP mRNA、XIAP表達比較用方差分析，兩兩比較用SNKq檢驗。P≤0．05為差異有統計學意義。

2 結果

各組胃組織XIAP mRNA、XIAP表達比較見表1。

表1 各組胃組織XIAP mRNA、XIAP表達比較(±s)

表1 各組胃組織XIAP mRNA、XIAP表達比較(±s)

注:與對照組比較，*P ＜0．01;與無效組比較，#P ＜0．01

組別 n XIAP mRNA XIAP對照組10 0．710 ±0．078 0．510 ±0．128有效組 14 1．099 ±0．051*# 0．809 ±0．082*#無效組 16 1．583 ±0．064* 1．281 ±0．215*

3 討論

IAP家族是具有強烈凋亡抑制作用的蛋白質家族，其結構的共同特點是桿狀病毒IAP重復序列的結構域［1，2］。凋亡抑制蛋白(IAPs)是首先在桿狀病毒中發現的能抑制感染昆蟲細胞凋亡的蛋白家族。現已知IAPs是一類在進化上高度保守的蛋白，廣泛存在于從昆蟲到哺乳動物的細胞中［3］，可直接與Caspase結合，抑制細胞凋亡。因 XIAP可與Caspase29、Caspase27、Caspase23 直接結合，抑制Caspase活性，故認為其是IAPs家族中最具潛在抑制活性的蛋白質［4］。

體外研究證明，許多抗癌藥物的抗腫瘤作用有的是殺傷腫瘤細胞，有的是誘導腫瘤細胞凋亡。因藥物殺傷腫瘤細胞可致細胞壞死，產生嚴重炎癥反應，故誘導腫瘤細胞凋亡成為現代抗腫瘤藥物治療的新策略。Wang等［5］研究發現，通過轉染XIAP基因，癌細胞對化療藥物誘導的凋亡敏感性下降。在相同濃度的絲裂霉素C誘導下，轉染XIAP的膀胱癌T24細胞凋亡率均有一定程度下降;因XIAP可阻滯化療藥物誘導的膀胱癌細胞發生凋亡，故對膀胱癌的多藥耐藥性發生有重要意義。Wang等［5］從卵巢癌患者腹水中可以分離出T淋巴細胞表達XIAP的剪切片段，而正常人的T淋巴細胞則無此表達，表明XIAP有較強的抗凋亡活性。Sasaki等［6］在卵巢癌患者耐藥機制的研究中發現，轉導反義XIAP不僅可增加卵巢癌細胞對順鉑誘導凋亡的敏感性，而且可激活Caspase介導的p53積聚。Li等［7］檢測了卵巢癌細胞中的XIAP表達情況，發現化療耐藥細胞系XIAP的表達水平明顯高于對化療藥物敏感的細胞系。本研究顯示，正常對照組、化療有效組及無效組患者的胃組織中均有XIAP mRNA表達，以對照組最低，無效組最高;其可能原因是XIAP mRNA高表達的胃癌導致XIAP高表達，抑制了抗癌藥物誘導的腫瘤細胞凋亡，故致化療無效。本研究結果與上述實驗報道［6，7］的結果相符。

總之，本研究表明XIAP可能通過細胞凋亡調控參與胃癌化療的過程，XIAP mRNA表達水平與胃癌化療療效直接相關，此為胃癌新輔助化療患者的藥物篩選提供了新的指標。

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［7］Li J，Feng Q，Kim JM，et al．Human ovarian cancer and cisplatin resistance:possible role of inhibitor of apoptosis proteins［J］．Endocrinology，2001，142(1):370-380．