2型糖尿病患者外周血淋巴細胞亞群及Treg細胞檢測及臨床應用

遲 林，李昊淼，許曉風

(首都醫科大學附屬北京同仁醫院，北京100730)

近年來糖尿病(DM)炎癥發病學說逐漸形成，認為DM是一種自然免疫和炎癥性疾病，是代謝綜合征的重要組成。炎癥的發生與機體的免疫狀態密切相關，已有文獻表明2型DM(T2DM)的發病與免疫功能紊亂有關，本研究采用流式細胞測定技術檢測T2DM患者外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞及Treg細胞的變化，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2010年3～9月在我院就診的T2DM患者120例，其中男74例、女56例，年齡35～81歲，均符合1997年美國糖尿病學會診斷標準。經眼科及內科檢查，將患者分為有血管病變組68例，男39例、女29例，年齡43～81歲;無血管病變組52例，男30例、女22例，年齡37～68歲;對照組40例為我院健康體檢者，男20例、女20例，年齡20～65歲。

1.2 儀器與試劑 美國Beckman Coulter FC500流式細胞儀，CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5，CD16+56-PE/CD3-FITC，同型對照 IgG1mouse FITC/IgG1mouse PE，CD4-PC5，CD25-PE，同型對照IgG2a mouse PE，IgG1mouse PC5，Lysing Solution，PBS均為美國Beckman Coulter公司生產。

1.3 實驗方法 所有觀察對象空腹取靜脈血2 ml于EDTA-K2真空抗凝采血管內，混勻，室溫保存。取不同熒光標記抗體各20 μl加入100 μl抗凝外周血中，避光孵育 20min，加入 Lysing Solution 500 μl，避光孵育10min，加入PBS 500 μl避光孵育10min，1 500 r/min離心5min，洗滌2次，加入PBS 1 000 μl，上機檢測，記錄陽性細胞百分率。

1.4 統計學方法 全部數據經SPSS11.0統計軟件處理，數據采以±s表示，兩樣本均數比較采用t檢驗，以P≤0.05為有統計學差異。

2 結果

表1 T2DM患者與正常對照組外周血淋巴細胞亞群檢測結果(%，±s)

表1 T2DM患者與正常對照組外周血淋巴細胞亞群檢測結果(%，±s)

注:與對照組比較，*P ＜0.05

組別 n CD3+ CD4+/CD3+ CD8+/CD3+ CD4+/CD8+ CD16++CD56+/CD3－CD4+CD25+無血管病變組 52 58.44 ±7.81* 36.56 ±4.56 26.33 ±4.98* 1.31 ±0.44* 19.02 ±6.63* 9.39 ±2.12*伴血管病變組 68 57.65 ±7.35* 36.02 ±4.32 25.47 ±4.26* 1.29 ±0.52* 18.76 ±5.98* 8.99 ±2.03*對照組 40 65.93 ±6.76 37.17 ±5.81 23.66 ±3.66 1.43 ±0.42 22.46 ±6.75 10.43 ±2.07

3 討論

NK細胞被譽為天然免疫核心細胞，人類NK細胞的特征性表面標志是CD56和CD16分子，不表達CD3分子。NK細胞無需預先致敏直接殺傷靶細胞，有清除病毒感染的生物學活性，活化的NK細胞產生多種細胞因子和趨化因子，如分泌INF、IL-2及TNF等，參與天然免疫和獲得性免疫。NK細胞活性降低，直接殺傷靶細胞功能下降，同時，產生的細胞因子減少，減弱了細胞免疫的正調節作用，抑制T細胞的增殖、分化及成熟，使得機體免疫功能降低，對炎癥的監視及清除功能減弱。

調節性T細胞是一群具有負調節機體免疫反應的淋巴細胞，起著維持自身耐受和避免免疫過度損傷機體的作用。細胞被認為是天然產生的細胞群，它起源于胸腺，存在于正常機體內。體外實驗發現細胞具有低反應性與免疫抑制兩大功能［4］，這些抑制功能的發揮是接觸式抑制，不是細胞因子依賴性的抑制。它對IL-2、特異性抗原及 APC的刺激呈低反應性，活化的細胞可抑制的T細胞表達IL-2，抑制其的活化與增殖;細胞活化后CTLA-4分子表達增加，影響T細胞介導的免疫調節［5］。IL-2是T細胞生長因子，當IL-2水平降低時，Treg細胞的免疫抑制作用減弱［6］，T細胞增殖受抑制，細胞免疫功能減弱。Salomon等首次證實NOD鼠Treg細胞數目減少和功能缺陷是其進展為DM 的重要因素［7］。

總之，T2DM患者存在細胞免疫功能紊亂。由于免疫功能下降，合并各種感染的機會增加，致殘率及病死率增加，DM患者的免疫調節應予重視，加強細胞免疫功能的監測對病情判斷、療效觀察有重要意義。

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