乳腺癌中E-cadherin和BCA-225蛋白表達與預后的相關性研究

湯永峰 謝莉莉

(1.南京醫科大學附屬南京市婦幼保健院病理科 南京 210004； 2.南通體臣衛生學校醫技系 南京 210000)

上皮粘附素(E-cadherin)表達于絕大多數上皮細胞表面,尤以細胞連接處最為集中,是上皮細胞表面最重要的細胞間粘附分子之一。它通過介導同型細胞間的粘附反應,維持上皮組織結構的完整性和細胞的極性,具有細胞接觸性生長抑制功能,防止細胞的相互分離,是典型的某些類型腫瘤形成/浸潤抑制因子。乳腺癌抗原(breast cancer antigen-225,BCA-225)是乳腺癌細胞株T47D分泌的一種糖蛋白,分子量為225KDa,通常乳腺腺癌表達此種蛋白[3]。本研究聯合檢測E-cadherin及BCA-225蛋白在乳腺癌中的表達,分析它們與乳腺癌患者臨床病理特征的關系,以及這二者的表達水平與乳腺癌患者的預后關系。

1 材料與方法

1.1 標本

由南通大學附屬醫院病理科提供80例2004年2月至2005年12月期間手術切除標本,均為女性。其中乳腺良性腫瘤10例。原發性乳腺癌70例,均為乳腺浸潤性導管癌。原發性乳腺癌患者年齡為30～72歲,平均50.7歲。乳腺癌病理分級I級20例,II級26例,III級24例。按國際抗癌聯盟(UICC)提出的TNM國際分期標準,I期22例,II期28例,III期20例。無淋巴結轉移39例,淋巴結轉移數目＜4個的13例,≥4個的18例。腫瘤最長徑≤5cm的61例,＞5cm的9例。雌激素受體(estrogen receptor,ER)陰性39例,陽性31例。孕激素受體(progesterone receptor,PR)陰性37例,陽性33例。術后隨訪到45例病人,失訪25例,隨訪率64.29%,隨訪截止日期2008年11月30日,生存期的計算從手術日期到隨訪截止日期,或因復發、轉移而死亡的日期為止,隨訪最長時間57個月,最短時間36個月,平均生存時間45.33個月,隨訪病例3年生存率為88.89%。患者術前均未接受放療、化療或內分泌治療。

1.2 試劑

鼠抗人E-cadherin即用型單克隆抗體(MAB-0589;Clone:A42C7),鼠抗人BCA-225即用型單克隆抗體(MAB-0175;Clone:CU18),二步法免疫組化檢測試劑盒均購于福州邁新公司。

1.3 方法

按SP試劑盒操作說明書進行。石蠟切片脫蠟水化,按要求抗原修復,免疫組化染色,DAB顯色,蘇木精復染。PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結果判斷

E-cadherin蛋白表達以細胞膜及細胞質出現棕黃色染色顆粒為陽性,但以細胞膜為主。BCA-225蛋白表達以細胞質出現棕黃色顆粒為陽性。每張切片選5個高倍視野(200倍),按腫瘤陽性細胞率和著色強度分別進行計分:(1)按陽性細胞百分率:0分為≤5%,1分為6%～25%,2分為26%～50%,3分為51%～75%,4分為>75%;(2)按著色計分:分為4個等級,0分為無著色,1分為淡黃色,2分為黃色,3分為棕黃色。兩者乘積0分為(-),1～4分為(+),5～8分為(++),9～12分為(+++)。為臨床及統計分析的目的,將(-)和(+)歸為低表達,(++)和(+++)歸為高表達[1]。

1.5 統計學處理

經統計分析軟件STATA 7.0分析。各組數據間比較采用χ2檢驗和四格表確切概率法。用Spearman等級相關分析判定相關性。Kaplan-Meier法描述生存曲線、Log-rank法進行差別顯著性檢驗、Cox比例風險回歸模型作為多因素的生存分析。P＜0.05認為差異有統計學意義。

表1 乳腺癌中E-cadherin、BCA-225蛋白表達與臨床病理特征的關系

圖1 E-cadherin表達的Kaplan-Meier生存曲線分析

2 結果

2.1 E-cadherin的表達

在乳腺浸潤性導管癌與良性病變組織中,E-cadherin蛋白陽性均定位于癌細胞及導管上皮細胞膜和細胞質上,著色深淺不一,呈片狀、灶狀或散在分布。E-cadherin表達在對照組與乳腺浸潤性導管癌組織中的差異有統計學意義。E-cadherin蛋白表達與乳腺癌患者的ER、PR及人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)無相關性,與臨床分期、病理分級、腫瘤大小和淋巴結轉移相關，見表1。

2.2 BCA-225的表達

在乳腺浸潤性導管癌中,BCA-225蛋白陽性主要定位于癌細胞質中,著色深淺不一,呈片狀、灶狀或散在分布。BCA-225表達在對照組與乳腺浸潤性導管癌組織中的差異有統計學意義。BCA-225蛋白表達與乳腺癌患者的ER、PR、TNM分期、淋巴結轉移和腫瘤大小均無相關性,而與腫瘤病理分級及癌基因Her-2相關，見表1。

2.3 E-cadherin與BCA-225蛋白在乳腺癌中表達的相關性

在31例BCA-225蛋白低表達組中,E-cadherin蛋白低表達17例,高表達14例;39例BCA-225蛋白高表達組中,E-cadherin蛋白低表達25例,高表達14例;spearman相關分析提示兩者無相關性(r=-0.0307,P＞0.05)。

2.4 乳腺癌中E-cadherin和BCA-225蛋白不同表達水平對預后影響的分析

對E-cadherin和BCA-225蛋白表達情況與生存率的關系進行Kaplan-Meier生存曲線分析,結果顯示E-cadherin高表達患者的生存率明顯高于低表達者,2組比較差異有統計學意義(χ2=6.01,P<0.05)。而BCA-225蛋白表達情況在此分析中差異無統計學意義(χ2=0.26,P>0.05)(圖1、2)。

圖2 BCA-225表達的Kaplan-Meier生存曲線分析

將腫瘤病理分級、腋淋巴結狀態及E-cadherin、BCA-225蛋白表達的情況共4種因素進行Cox比例風險回歸多因素的生存分析,結果顯示E-cadherin蛋白表達有獨立的預后意義,風險度exp為-1.795954(P<0.05)。

3 討論

E-cadherin是鈣依賴性細胞間連接的細胞粘附分子,當E-cadherin活性正常時,腫瘤細胞不易從原發灶上脫落下來,而E-cadherin失活導致細胞間粘附作用下降和極性紊亂,促使腫瘤轉移,即E-cadherin是一種癌侵襲、轉移的抑制因子。

實驗結果顯示E-cadherin在乳腺良惡性腫瘤中的表達差異顯著,其表達隨著TNM分期的增高、病理分級級別的增高、腫瘤增大及淋巴結轉移數目的增多而下降,單因素和多因素分析顯示E-cadherin是乳腺癌患者獨立的預后指標。與PARK等[2]學者的報道一致。提示E-cadherin表達缺如或下調是乳腺癌浸潤性增加、轉移能力增強的一個指征,是乳腺癌重要的預后因子,可作為篩選術后復發轉移高危人群的有效指標。關于E-cadherin在乳腺癌中表達下調或缺失的機制,有學者報道E-cadherin的基因突變,轉錄和翻譯異常[3～4],可以抑制E-cadherin在乳腺癌中的正常表達,導致乳腺癌的發生。另外,E-cadherin的甲基化、糖基化、NF的影響、雌孕激素及E-cadherin介導的黏附復合體功能異常等均可導致乳腺組織中E-cadherin的異常表達,從而導致乳腺癌的發生。

BCA-225是乳腺癌細胞株T47D分泌的一種糖蛋白,分子量為225KDa,通常乳腺腺癌表達此種蛋白。目前,關于BCA-225的研究主要集中在該蛋白對各個系統轉移或異位腫瘤的鑒別診斷上[5～6]。但關于BCA-225與乳腺癌臨床病理特征的關系目前國內外少有報道。

實驗結果顯示BCA-225蛋白表達隨著病理分級級別的增高而增加,在癌基因Her-2陽性組中BCA-225表達高于其陰性組,病理分級代表著腫瘤的分化程度,是傳統的預后指標,又因為癌基因Her-2是乳腺癌患者可靠的預后指標[7],推測BCA-225對判斷患者的預后可能有一定的參考價值。但單因素和多因素分析顯示BCA-225表達與乳腺癌患者術后生存狀況均無相關性。

上述結果表明,E-cadherin在乳腺癌發生發展、浸潤和轉移過程中起重要作用,檢測E-cadherin的表達對乳腺癌患者預后的評估有重要意義,并且可為乳腺癌患者的鑒別診斷和基因治療提供理論根據。BCA-225作為乳腺癌患者獨立的預后評價指標還尚待進一步深入探討。

[1]翁密霞,吳翠環,楊秀萍.E-cadherin,CD44v6和PCNA在非小細胞肺癌組織中的表達及意義[J].癌癥Chinese Journal of Cancer,2008,27(2):191～195.

[2]Park,Daehoon,Karesen,et al.Expression pattern of adhesion molecules (E-cadherin,[alpha]-,[beta]-,[gamma]-catenin and claudin-7),their influence on survival in primary breast carcinoma,and their corresponding axillary lymph node metastasis[J].APMIS,2007,115(1):52～65.

[3]Masciari S,Larsson N,et al.Germline E-cadherin mutations in familial lobular breast cancer[J].Journal of Medical Genetics,2007,44(11):726～731.

[4]Vesuna F,van Diest P,Chen JH,et al.Twist is a transcriptional repressor of E-cadherin gene expression in breast cancer[J].Biochem Biophys Res Commun,2008,367(2):235～241.

[5]Williams SS, Zimmerman RL, et al. BCA-225 immunostain: is it of value in liver fine needle aspiration[J].Anal Quant Cytol Histol,2002,24(5):245～248.

[6]Yin C, Chapman J.Invasive mucinous (colloid)adenocarcinoma of ectopic breast tissue in the vulva: a case report[J].Breast J,2003 Mar-Apr,9(2):113～115.

[7]Linderholm B,Andereson J,Lindh B,et al.Overexpression of C-erbB-2 is related to a higher expression of vascular endothelial growth factor (VEGF)and constitutes an independent prognostic factor in primary node-positive breast cancer after adjuvant systemic treatment[J].Eur J Cancer,2004,40(1):33～42.