miR-196a2單核苷酸多態(tài)與乳腺癌易感性關(guān)系

王 新,何寶江,周 昱

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

miRN A是一類長約21-24bp、內(nèi)源性、非編碼、單鏈RN As,進(jìn)化上高度保守,廣泛存在于動、植物細(xì)胞中。可以調(diào)節(jié)基因表達(dá)[1]。miRN As可以與靶 mRN As互補(bǔ)序列配對結(jié)合,有效并且穩(wěn)定地降低 mRN As的翻譯活性。哺乳動物成熟 miRN As大多通過不完全互補(bǔ)配對與靶 mRNA3′-UTRs結(jié)合,調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá),有時也可以直接將靶mRN As切斷。生物信息學(xué)數(shù)據(jù)表明一條單鏈 miRN A可以結(jié)合多達(dá) 200條靶基因 ,并且這些基因的功能不盡相同[2]。所以 miRN As可能參與幾乎每一項(xiàng)生命過程的調(diào)節(jié)和人體疾病的發(fā)病機(jī)制,包括胚胎發(fā)育、染色體結(jié)構(gòu)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、抗藥性、脂肪代謝和干細(xì)胞維護(hù)。

1 材料方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

收集乳腺癌患者外周血160例,正常對照組外周血200例。乳腺癌患者由佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院鑒定。實(shí)驗(yàn)參與者均獲得知情同意書。所有受試人員均為無遺傳關(guān)系的漢族人,來自佳木斯市和周邊地區(qū)。患者沒有年齡和組織類型限制。沒有癌癥的婦女作為對照組,年齡和居住區(qū)域和患者組匹配。每個人抽取5mL靜脈血。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

提取全基因組 DNA,合成 miR-196a2 rs11614913的引物,PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物寄往上海生物工程有限公司測序,而后對結(jié)果進(jìn)行 SN P分型,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析乳腺癌組和正常對照組各型 SN P比例是否有顯著差異。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用 SPSS18.0軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn),P＜0.05表示差異具有顯著性意義。

2 結(jié)果

見表1～ 2,圖 1。

表1 乳腺癌組與正常對照組 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)(Rs11614913)

表2 乳腺癌組和對照組 Rs11614913位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

圖1 Rs11614913PCR產(chǎn)物測序圖及 SNP分型

3 討論

本次研究中,我們發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組與對照組的 hsa-mir-196a2rs11614913差異顯著 (P ＜ 0.05),表明 rs11614913與乳腺癌的易感性相關(guān)。hsa-mir-196a2 rs11614913位于其成熟 miRN A序列內(nèi),可能影響 pre-miRN A的成熟或者通過SNP影響 miRNA與 mRN As的結(jié)合,因?yàn)?miRNA是通過堿基互補(bǔ)配對原則結(jié)合 mRN As,從而調(diào)節(jié)其表達(dá)狀況的。與正常組織相比,乳腺癌中 hsa-miR-196a2的表達(dá)顯著增加。hsa-miR-196a可以結(jié)合多種癌癥相關(guān)途徑的基因轉(zhuǎn)錄物,HOX基因簇 mRNAs的斷裂由 hsa-miR-196a介導(dǎo),近來發(fā)現(xiàn) HOXD10是乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的靶基因。還有,LSP1和 TOX3mRNAs也是 hsa-miR-196a2的靶基因 ,這兩個基因也是乳腺癌易感性的生物標(biāo)記物[3,4]。rs11614913作為一個位于 hsa-mir-196a2成熟 miRNA區(qū)的多態(tài)位點(diǎn),與乳腺癌易感性增加相關(guān)這一發(fā)現(xiàn)意義重大,hsa-mir-196a2 rs11614913很有可能成為乳腺癌易感性的候選生物標(biāo)志物。據(jù)估計(jì),人類 miRN As約為1,000至 10000種左右[5],而研究者只是剛剛了解 miRNA表達(dá)模式和功能。因此,深入研究miRNAs SNPs將有利于理解 miRN A的生物發(fā)生和對于癌癥病因和進(jìn)展的理解。即使同一種 miRN A的 SN Ps研究,結(jié)果經(jīng)常不一致,甚至剛好相反。分析原因有以下幾點(diǎn):①人種及其地域分布因素的影響;②樣本量大小的影響;③不同實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的影響。所以大樣本、多區(qū)域、不同人種的綜合性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對于證實(shí)這些發(fā)現(xiàn)是必需的。再有遺傳因素與環(huán)境暴露綜合分析也是值得思考的。

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