苯丁錫反相高效液相色譜分析方法的研究

何 欣，唐敏然，何光耀

（1．廣州計量檢測技術研究院，廣東 廣州 510030；2.中山大學，廣東 廣州 510080）

0 引 言

苯丁錫（fenbutatin oxide）是高效的感溫型殺螨劑，殘效期長，在國內已經實現了工業化生產，并投入使用[1]，其化學結構式如圖1所示。GB 2763-2005《食品中農藥最大殘留限量》對梨果類和柑橘類中苯丁錫的最大殘留限量為5mg/kg[2]。苯丁錫常見的分析方法主要有比色法[3]、碘容量法[4]和氣相色譜法[5]。由于苯丁錫是有機錫的氧化物，沸點高，不能直接進行氣相色譜分析，所以對苯丁錫進行測定主要是通過化學反應將有機錫轉化成無機錫或氯化衍生物，再進行GC-FPD或GC-MSD測定[6-9]，也有采用正相高效液相色譜法對苯丁錫進行了定量分析研究的報道[10]。由于苯丁錫具有特殊的物理性質，它難溶于大多數的有機溶劑和水，易溶于氯代烷烴、苯、丙酮，所以給反相高效液相分析帶來了很大的困難，國內尚無苯丁錫反相高效液相分析方法的報道。反相高效液相色譜法（RP-HPLC）較正相高效液相色譜法（NP-HPLC）、氣相色譜法（GC）等其他分析方法，具有操作簡便、無需衍生化、回收率高等特點。

圖1 苯丁錫的化學結構式

1 實驗部分

1.1 儀器和設備

Agilent 1100高效液相色譜儀，配置VWD紫外檢測器和Chemstation工作站；Mettler Toledo公司的SevenEasy型pH計；超聲波振蕩器；微孔過濾器濾膜孔徑約0.45μm。

1.2 化學試劑

苯丁錫標樣由國家標準物質研究中心提供的農藥標準物質，純度為99.5%；乙腈和甲醇均為HPLC級，由Merck公司提供；二氯甲烷（色譜純），由天津市津科精細化工研究所提供；氯化鈉（分析純），由天津市塘沽化學試劑廠提供；鹽酸、磷酸、醋酸和醋酸銨均為分析純，由北京化工廠提供。全部水相均經過安譜公司的0.45μm水相濾膜過濾。

1.3 色譜條件

Agilent色譜柱ZORBAX SB-C18，150mm×4.6mm i.d.，5 μm，流動相為乙腈/水（0.6%NaCl，HCl調節pH=3.0）=90/10（ν/ν），柱溫為 30℃，流速為 1.0mL/min，進樣量為5 μL，檢測波長為220 nm，使用外標法定量（峰面積）。

上述色譜條件是典型參數，可根據不同儀器特點，對給定的色譜條件作適當調整，以期獲得最佳效果。典型的苯丁錫高效液相色譜圖見圖2。

2 結果和討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 溶劑的選擇

由于苯和丙酮具有較強的紫外吸收，三氯甲烷與水不能任意比例互溶，所以選擇二氯甲烷作為溶劑。

圖2 苯丁錫高效液相色譜圖

2.1.2 色譜柱的選擇

試用4種C18 色譜柱：（1）Diamonsil C18 150mm×4.6mm i.d.，5μm（Dikma）；（2）XTerra RP18，150mm×4.6mm i.d.，5 μm（Waters）；（3）ZORBAX XDB-C18，150 mm×4.6 mm i.d.，5 μm （Agilent）；（4）ZORBAX SB-C18，150 mm×4.6 mm i.d.，5 μm（Agilent）。結果表明Diamonsil C18保留時間最長，抗溶劑過載能力最強，進樣量達到20 μL也沒出現分峰現象，見圖3（a）。XTerra RP18保留時間最短，抗溶劑過載能力和峰形也較差，進樣量7μL就出現分峰現象，見圖3（b）。ZORBAX XDB-C18的峰形和抗溶劑過載能力稍優于XTerra RP18，但仍不理想，見圖3（c）。ZORBAX SB-C18在進樣量不大于5 μL時峰形最佳，抗溶劑過載能力僅次于Diamonsil C18，見圖3（d），而且使用的pH范圍比Diamonsil C18更寬。為方便下一步進行流動相的選擇，所以選擇了ZORBAX SB-C18柱。

圖3 不同的色譜柱和進樣量對峰形的影響

2.1.3 流動相的選擇

因為苯丁錫不溶于甲醇，所以有機相選擇溶解度相對較高的乙腈。分別試驗了乙腈+醋酸胺+醋酸，乙腈+醋酸，乙腈+磷酸，乙腈+氯化鈉+鹽酸作為流動相，乙腈+醋酸胺+醋酸和乙腈+醋酸體系均出現拖尾，乙腈+醋酸更為嚴重，隨著pH的降低而有所改善，乙腈+磷酸體系峰形較差，乙腈+氯化鈉+鹽酸體系峰形較好。分別試驗 pH=2.0，2.5，3.0（見圖 4），結果表明pH≤3時，pH對峰形影響不大。分別試驗了乙腈+水（0.6%NaCl，HCl調 pH=3.0）不同的體積配比 85+15，90+10，95+5，結果表明 90+10 的比例比較適合。

圖4 乙腈+6%NaCl-HCl=90+10（pH=2.0，2.5，3.0）

2.1.4 柱溫的選擇

測試了柱溫在20～40℃范圍內對保留時間的影響，結果表明柱溫對苯丁錫的保留時間影響不大，隨著溫度的升高，保留時間提前，抗溶劑過載能力稍微增強，大于30℃時峰形開始變差。考慮色譜柱的耐用性，選擇了柱溫為30℃。

2.1.5 進樣量的選擇

分別進樣 3，5，7，10μL（1mg/mL 苯丁錫-二氯甲烷溶液），3μL和5μL時峰形良好，7μL和10μL時峰形變差，10μL時前傾較嚴重，見圖3（d）。該現象與樣品質量濃度無直接關系，與溶劑二氯甲烷有關，試驗了質量濃度為0.6 mg/mL和0.2 mg/mL苯丁錫溶液，也出現類似情況。最終選擇了進樣量為5μL。

2.1.6 檢測波長的選擇

苯丁錫的紫外光譜圖如圖5所示，最大吸收波長為 205nm，所以分別試驗了 205，210，220，254nm 時的峰高和噪聲，結果表明220nm時信噪比最高（見表1）。

圖5 苯丁錫的紫外光譜圖

表1 波長與信噪比

圖6 苯丁錫的標準曲線

2.2 線性關系的測定

配制苯丁錫質量濃度分別為0.01，0.03，0.07，0.10，0.30，0.70，1.00，3.00，7.00，10.00 mg/mL 一系列標準溶液，各進樣 1 μL，以峰面積（mAU·s）對組分質量濃度（mg/mL）求得回歸方程和相關系數，結果見圖6?；貧w方程為Y=1364.84X-2.99，相關系數r=0.99999，按進樣1～5μL計算，該方法的線性范圍為 2μg/mL～10mg/mL。

2.3 方法的精密度試驗

在上述色譜操作條件下，對同1批試樣進行5次平行測定，測得苯丁錫的標準偏差s為0.18，變異系數為0.36%，結果見表2。

表2 測定方法的精密度試驗

2.4 方法的準確度試驗

在已知含量的試樣中加入一定量的苯丁錫標樣，在相同色譜操作條件進行測定，苯丁錫的平均回收率為99.47%，結果見表3。

表3 測定方法的準確度試驗

2.5 方法的檢出限

以3倍信噪比計算檢出限，該方法的檢出限為0.13ng。

3 結束語

經驗證，采用反相高效液相色譜法測定苯丁錫含量，具有操作簡便、準確度高、重現性好等特點，是苯丁錫原藥和制劑較為理想的分析方法。

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