中成藥中未知濫用化學(xué)藥物的測試與鑒定方法

譚和平 ， 譚福元 ， 鄒 燕 ， 王彧婕 ， 趙愛平 ， 周黎黎

（1.中國測試技術(shù)研究院，四川 成都 610021；2.國家防災(zāi)減災(zāi)分析測試中心（成都），四川 成都 610021）

0 引 言

中成藥取材于天然的食材或者藥草，在治病的同時(shí)相比于西藥具有更低的副作用。但是，近年來，一些不法商家為了謀取暴利，竟通過非法添加有治療作用的化學(xué)藥品，來提高所謂的純中藥制劑的療效。如在降糖類中成藥中添加羅格列酮、苯乙雙胍、瑞格列奈等化學(xué)降糖藥；在鎮(zhèn)靜安神類中成藥中添加地西泮、三唑侖、巴比妥、苯巴比妥等鎮(zhèn)靜催眠藥；在降壓類中成藥中添加可樂定、非洛地平、尼莫地平等[1-4]。長期服用這類偽劣藥品會攝入大量化學(xué)藥物，且其化學(xué)類藥物的攝入量無法控制，對人體造成極大危害，如服用添加化學(xué)降糖藥的中成藥極易引起低血糖等癥狀[5]，同時(shí)也給整個(gè)中成藥行業(yè)和國家形象造成極壞的影響。

HPLC-MS MS法具有選擇性好、抗干擾能力強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)勢，目前在我國濫用藥物的篩查中已逐步得到應(yīng)用[6-9]。但它是一種“目標(biāo)分析”方法，分析人員只能對該方法預(yù)設(shè)的化合物進(jìn)行分析。而化學(xué)藥品種類繁多、數(shù)量巨大，不法分子完全還可以尋找限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定之外的其他替代品以逃避法律的監(jiān)管，這也是當(dāng)前食品、藥品安全事故屢禁不止的關(guān)鍵原因之一。隨著現(xiàn)代分析儀器的發(fā)展，飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（TOF）已有能力獲得＜1×10-6精確質(zhì)量的全掃描質(zhì)譜圖，且具有較高的選擇性和靈敏度，這使得分析工作者可以通過精確質(zhì)量數(shù)的檢索匹配，快速且方便地對未知化合物實(shí)現(xiàn)快速篩查與鑒定。該文在自建藥物數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)上，采用LC-DAD-TOF MS對某品牌的降糖中成藥的未知成分進(jìn)行了定性分析，從中發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)了多種化學(xué)降糖藥的大量存在。

1 試驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

1200 HPLC-6210 TOFMS（美國 Agilent）；超純水機(jī)（美國 Millipore）；乙腈（色譜純，Sigma-Aldrich）；其余試劑為分析純；樣品為某品牌的降糖類中成藥（客戶送檢樣品，說明書上標(biāo)明其來源于苦瓜與人參的提取物，主要成分為苦瓜皂甙和人參皂甙）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 儀器分析條件

色譜柱為AgilentZorbaxSB-Aq（2.1mm×150mm，3.5 μm）；流動相A為0.1%的甲酸水溶液，流動相B為乙腈；梯度洗脫為0～5 min，1%的流動相B，5～20min，流動相B從1%線性升至95%，保持5min；流速0.3mL/min；柱溫40℃；DAD檢測波長為203nm和254nm。

電噴霧離子源（+ESI），離子源溫度350℃，干燥氣流速10L/min,霧化器壓力40psi，掃描方式為全掃描。

1.2.2 樣品的前處理

取膠囊劑1粒，加入4.0 mL甲醇，渦旋30 s后超聲10 min，高速離心后取上層清液過濾后直接進(jìn)樣分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品測試

從樣品DAD色譜圖（圖1）中可以看出，樣品成分復(fù)雜。圖2為樣品稀釋10倍后得到的總離子流質(zhì)譜圖（TIC質(zhì)譜圖），圖3為空白TIC質(zhì)譜圖。對比圖2和圖3發(fā)現(xiàn)除了保留時(shí)間為20.78 min處的質(zhì)譜峰外，1.41，14.74和19.75min處的3個(gè)峰均為樣品內(nèi)含物質(zhì)。用MassHunter Qualitative Analysis軟件對質(zhì)譜圖（圖2）進(jìn)行分子特征提取（MFE）分析后，將所得精確分子質(zhì)量列表在自建的藥物數(shù)據(jù)庫（收集了目前文獻(xiàn)、臨床中使用的各種藥物信息）中進(jìn)行檢索，分子質(zhì)量誤差及同位素得分都表明這3種物質(zhì)均可能為人為添加的化學(xué)降糖藥，分別為二甲雙胍、羅格列酮和格列美脲（表1）。這3種化學(xué)藥物也是降糖類中成藥中常見的非法添加藥物[6-9]。

2.2 未知化合物碎片與質(zhì)譜裂解方式分析

為了進(jìn)一步確證這3種物質(zhì)，采取調(diào)整源內(nèi)碎裂電壓（Fragmentor）的方法，以分別得到化合物準(zhǔn)分子離子峰及其子離子信息。圖4為碎裂電壓為175V時(shí)，RT=1.41min的化合物準(zhǔn)分子離子峰m/z130.109 44；圖5為碎裂電壓升至250 V時(shí)，得到的子離子碎片質(zhì)譜圖。對比發(fā)現(xiàn)，m/z 71.06106和m/z 85.05133等應(yīng)為m/z 130.10944的子離子碎片。經(jīng)MFG計(jì)算得m/z 71.061 06和m/z 85.051 33可能的離子式分別為C3H7N2+和C2H5N4+。圖6給出了可疑化合物二甲雙胍的可能質(zhì)譜碎裂方式。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在該碎裂方式下得到的碎片離子式與表1中MFG計(jì)算所得離子式一致，因此進(jìn)一步確證了樣品在RT=1.41 min的峰為二甲雙胍的峰。

圖1 樣品DAD色譜圖

圖2 樣品稀釋10倍后的TIC質(zhì)譜圖

圖3 空白TIC質(zhì)譜圖

表1 化合物檢索結(jié)果

圖4 碎裂電壓175V時(shí)，樣品在RT=1.41min質(zhì)譜圖

圖5 碎裂電壓250V時(shí)，樣品在RT=1.41min質(zhì)譜圖

圖6 二甲雙胍質(zhì)譜碎裂方式示意圖

同理，圖7和圖8分別給出了樣品在RT=14.74 min處對應(yīng)化合物的碎裂電壓為175V時(shí)得到的準(zhǔn)分子離子峰m/z 358.12293，和碎裂電壓升至325V時(shí)的子離子質(zhì)譜圖。經(jīng)MFG計(jì)算，m/z 358.12293可能的離子式為C18H20N3O3S+，對應(yīng)子離子m/z 135.091 40和m/z107.06148的離子式可能為C8H11N2+和C6H7N2+。數(shù)據(jù)庫檢索發(fā)現(xiàn)，該化合物可能為羅格列酮。圖9給出了羅格列酮的質(zhì)譜碎裂方式，從示意圖得知，在該碎裂方式下得到了離子碎片與實(shí)驗(yàn)推斷一致（表1），因此確證了該化合物為羅格列酮。

圖7 碎裂電壓175V時(shí)，樣品在RT=14.74min質(zhì)譜圖

圖8 碎裂電壓325V時(shí)，樣品在RT=14.74min質(zhì)譜圖

圖9 羅格列酮質(zhì)譜碎裂方式示意圖

圖10 和圖11分別為RT=19.75 min的峰在碎裂電壓為175V時(shí)的準(zhǔn)分子離子峰m/z 491.23220和250V時(shí)得到的子離子質(zhì)譜圖m/z 126.09353和m/z 352.13545（圖11）。經(jīng)MFG計(jì)算得碎片m/z 126.09353和m/z 352.135 45可能的離子分子式分別為C7H12NO+和C16H22N3O4S+。通過數(shù)據(jù)庫檢索發(fā)現(xiàn)，該化合物可能為格列美脲。由格列美脲的質(zhì)譜碎裂方式示意圖（圖12）可知，子離子的精確相對分子質(zhì)量與離子式和實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（表1），因此該化合物確為格列美脲。

圖10 碎裂電壓175V時(shí)，樣品在RT=19.75min質(zhì)譜圖

圖11 碎裂電壓175V時(shí)，樣品在RT=19.75min質(zhì)譜圖

圖12 格列美脲質(zhì)譜碎裂方式示意圖

3 結(jié) 論

該文在自建濫用藥物數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)上，采用單級飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（TOF）成功篩查出了某品牌降糖藥中的未知人為添加組分。通過調(diào)整源內(nèi)碎裂電壓的方式，獲得了對應(yīng)化合物的子離子碎片信息，從而確證了化學(xué)類降糖藥的存在。該方法簡單、快速，取得了與串聯(lián)質(zhì)譜儀（Q-TOF）相媲美的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。同時(shí)，該方法為“非目標(biāo)”檢測分析，篩查范圍廣，在不使用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌返那闆r下即可得到準(zhǔn)確可靠的結(jié)論，是一種經(jīng)濟(jì)有效的有害物質(zhì)篩查與確認(rèn)方式，尤其適用于食品、藥品中未知有害有機(jī)物的快速發(fā)現(xiàn)與鑒定。

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