紫杉醇對(duì)乳腺癌大鼠圍手術(shù)期血兒茶酚胺及其他指標(biāo)的影響

李家峰 李 越

新輔助化療的廣泛應(yīng)用提高了腫瘤綜合治療的效果，尤其以乳腺癌最為顯著。但新輔助化療對(duì)腫瘤患者圍手術(shù)期及預(yù)后的影響尚無(wú)明確定論。筆者以前的研究結(jié)果表明，靜脈輸注環(huán)磷酰胺可導(dǎo)致正常大鼠圍手術(shù)期血漿兒茶酚胺濃度明顯升高，這種影響隨時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱[1]。為進(jìn)一步了解新輔助化療對(duì)乳腺癌大鼠模型應(yīng)激反應(yīng)的影響，本研究通過對(duì)術(shù)前接受靜脈輸注紫杉醇的乳腺癌大鼠的血漿兒茶酚胺（包括腎上腺素和去甲腎上腺素）濃度及部分免疫指標(biāo)進(jìn)行測(cè)量，以期為新輔助化療后擇期手術(shù)時(shí)機(jī)的選擇提供證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年健康二級(jí)SD大鼠70只，購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，雌雄各半，體質(zhì)量200 g左右，平衡飼養(yǎng)1周。

1.1.2 試劑與儀器 腎上腺素及去甲腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品（美國(guó)SIGMA公司），內(nèi)標(biāo)物（B）：98%的氫溴酸3，4-二羥基芐胺（DHBA）對(duì)照品（ALDRICH公司）；紫杉醇規(guī)格5 mL：30 mg（北京協(xié)和藥廠）。日本島津LC-10A高效液相色譜儀，L-ECD-10A電化學(xué)檢測(cè)器，分析之星色譜工作站。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 將walker-256腫瘤細(xì)胞接種于大鼠左側(cè)腋下，20只大鼠因死亡或未形成滿意腫瘤結(jié)節(jié)而淘汰，采用隨機(jī)數(shù)字表的方法將剩余的50只大鼠隨機(jī)分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組（分別為第1、2、3、4組）和1個(gè)對(duì)照組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組大鼠通過尾靜脈注射紫杉醇（25 μg/g）[2]，對(duì)照組大鼠輸注等量生理鹽水。4個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別于注藥后第1、2、3及4周末給予水合氯醛（300 μg/g）腹腔注射麻醉，通過內(nèi)眥靜脈取血2 mL備用，手術(shù)切除腫物造成外科應(yīng)激刺激，術(shù)后通過股動(dòng)脈取血5 mL備用，對(duì)照組于注藥后第1周末實(shí)施相同的處理。

1.2.2 指標(biāo)測(cè)定 血漿兒茶酚胺濃度測(cè)定采用高壓液相色譜法；采用流式細(xì)胞儀（Coulter EPICSXL，美國(guó)）測(cè)定自然殺傷（NK）細(xì)胞計(jì)數(shù)和CD4+/CD8+細(xì)胞比值。血腫瘤壞死因子（TNF）-α和白細(xì)胞介素（IL）-6測(cè)定采用放射免疫法。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料均以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 手術(shù)前后各組乳腺癌大鼠血腎上腺素和去甲腎上腺素濃度比較 各組術(shù)前和術(shù)后腎上腺素濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），第1、2組術(shù)前術(shù)后去甲腎上腺素濃度均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），第3、4組術(shù)前術(shù)后去甲腎上腺素濃度與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2 手術(shù)前后各組大鼠免疫指標(biāo)比較 各實(shí)驗(yàn)組術(shù)前和術(shù)后NK值與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；第1、2組術(shù)前和術(shù)后CD4+/CD8+均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，第3組術(shù)前CD4+/CD8+低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.011），見表2。

表1 各組手術(shù)前后大鼠腎上腺素和去甲腎上腺素濃度比較 （n=10，μg/L±s）

表1 各組手術(shù)前后大鼠腎上腺素和去甲腎上腺素濃度比較 （n=10，μg/L±s）

P值為各組與對(duì)照組相比所得；**P<0.01，表2、3同

對(duì)照組第1組第2組第3組第4組F術(shù)前55.78±14.69 47.03±23.49 65.01±21.85 56.25±9.18 64.80±12.46 1.881術(shù)后93.54±12.62 105.50±32.35 95.35±14.67 107.23±24.04 92.96±9.42 1.135術(shù)前14.69±2.22 34.21±5.02 58.51±13.14 16.51±6.81 15.51±4.45 66.672**P-<0.001<0.001 0.582 0.803術(shù)后30.11±4.12 54.63±16.82 67.84±11.26 24.08±9.05 31.92±4.59 32.832**P-<0.001 0.002 0.197 0.696腎上腺素 去甲腎上腺素組別

表2 各組手術(shù)前后大鼠免疫指標(biāo)比較 （n=10 ±s）

表2 各組手術(shù)前后大鼠免疫指標(biāo)比較 （n=10 ±s）

對(duì)照組第1組第2組第3組第4組F術(shù)前10.43±2.50 9.77±1.86 10.02±1.24 10.39±1.73 10.39±1.73 0.274術(shù)后9.33±0.86 9.64±1.29 9.74±1.09 10.09±1.26 9.91±1.74 0.496術(shù)前1.67±0.08 1.48±0.06 1.54±0.08 1.59±0.05 1.63±0.03 14.555**P-<0.001<0.001 0.011 0.275術(shù)后1.76±0.02 1.69±0.03 1.71±0.03 1.74±0.04 1.73±0.03 5.988**P-<0.001 0.002 0.154 0.076 NK（%） CD4+/CD8+組別

2.3 手術(shù)前后各組大鼠細(xì)胞因子水平比較 各實(shí)驗(yàn)組術(shù)前和術(shù)后TNF-α值與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），第1～3組術(shù)前和術(shù)后IL-6值均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），第4組與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表3。

表3 各組手術(shù)前后大鼠細(xì)胞因子水平比較（n=10，μg/L ±s）

表3 各組手術(shù)前后大鼠細(xì)胞因子水平比較（n=10，μg/L ±s）

對(duì)照組第1組第2組第3組第4組F術(shù)前0.806±0.016 0.797±0.015 0.804±0.008 0.804±0.012 0.806±0.010 0.896術(shù)后0.815±0.018 0.805±0.009 0.812±0.029 0.808±0.005 0.807±0.009 0.565術(shù)前20.57±2.85 13.15±3.37 15.26±2.88 15.67±2.17 19.32±2.09 12.746**P-<0.001<0.001<0.001 0.313術(shù)后27.77±2.47 18.86±2.76 19.60±2.97 24.27±2.78 27.68±2.27 25.709**P-<0.001<0.001 0.005 0.935 TNF-α IL-6組別

3 討論

靜脈注射紫杉醇同靜脈注射環(huán)磷酰胺一樣對(duì)大鼠是一個(gè)強(qiáng)烈而持久的應(yīng)激性刺激，紫杉醇使血漿去甲腎上腺素濃度升高的時(shí)限為2周；由于大鼠受到傷害性刺激時(shí)腎上腺素濃度升高的時(shí)限較短，在測(cè)定時(shí)已經(jīng)恢復(fù)至正常水平，因此各組腎上腺素濃度和NK細(xì)胞計(jì)數(shù)沒有差異。有研究證實(shí)，在創(chuàng)傷性刺激和大量失血導(dǎo)致休克時(shí)，內(nèi)源性兒茶酚胺分泌明顯增加；或同時(shí)給予外源性腎上腺素或去甲腎上腺素時(shí)，血漿兒茶酚胺水平明顯升高，全系淋巴細(xì)胞下降，其中CD8＋下降明顯，因此CD4+/CD8+比值加大；脾淋巴細(xì)胞的凋亡加速、細(xì)胞因子的分泌及脾淋巴細(xì)胞的增殖受到抑制，致使NK細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加[3-4]。本研究術(shù)前CD4+/CD8+在輸注紫杉醇后的3周內(nèi)均低于對(duì)照組，術(shù)后第1、2周也低于對(duì)照組，且NK細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)明顯變化，提示紫杉醇對(duì)大鼠免疫系統(tǒng)的抑制依然存在。各組間TNF-α無(wú)差異，而各組間IL-6的變化趨勢(shì)與CD4+/CD8+相近，可能與T細(xì)胞受化療抑制有關(guān)。

近年來，免疫系統(tǒng)在應(yīng)激反應(yīng)中的作用逐漸被重視。研究表明，免疫系統(tǒng)主要通過IL-1、IL-6及TNF-α等細(xì)胞因子和促腎上腺皮質(zhì)激素等調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的活動(dòng)[5]。外科損傷以及傷害性刺激均可導(dǎo)致機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，其中交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)尤為活躍，是創(chuàng)傷首先發(fā)生的反應(yīng)。血漿兒茶酚胺水平的變化是機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)的重要指標(biāo)之一。研究證實(shí)兒茶酚胺是重要的機(jī)體免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，減少兒茶酚胺的分泌能夠減少血管外科術(shù)后血栓形成、改善胸外科手術(shù)后肺功能、增強(qiáng)圍手術(shù)期患者的抗感染能力[6]。同時(shí)有報(bào)道認(rèn)為組織兒茶酚胺含量長(zhǎng)期升高可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[7]。因此，新輔助化療后選擇合適的手術(shù)時(shí)機(jī)，使機(jī)體處于較佳的免疫狀態(tài)，避免過度的應(yīng)激反應(yīng)，對(duì)于保證圍手術(shù)期安全及改善腫瘤預(yù)后有重要意義。本研究結(jié)果提示紫杉醇作用2周后機(jī)體的免疫狀態(tài)未完全恢復(fù)正常，但與外科應(yīng)激密切相關(guān)的兒茶酚胺系統(tǒng)基本恢復(fù)正常，因此，此時(shí)期為擇期手術(shù)的較佳時(shí)機(jī)。

[1]李越，李家峰，查振起，等.靜脈輸注環(huán)磷酰胺對(duì)大鼠圍手術(shù)期血漿兒茶酚胺濃度的影響[J].中華外科雜志,2007,45(16):1136-1138.

[2]黃繼漢，黃曉暉，陳志揚(yáng)，等.藥理實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物間和動(dòng)物與人間的等效劑量換算[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2004，9（9）：1069-1072.

[3]Estévez LG,Gradishar WJ.Evidence-based use of neoadjuvant tax?ane in operable and inoperable breast cancer[J].Clin Cancer Res,2004,10(10):3249-3261.

[4]Straub RH.Complexity of the bi-directional neuroimmune junction in the spleen[J].Trends Pharmacol Sci,2004，25(12):640-646.

[5]Solomon GF.Psychoneroimmunology:Interactions between central nervous system and immune system[J].J Neurosci Res,1987,18（1）：1-9.

[6]Yang EV,Sood AK,Chen M,et al.Norepinephrine up-regulates the expression of vascular endothelial growth factor,matrix metallopro?teinase(MMP)-2,and MMP-9 in nasopharyngeal carcinoma tumor cells[J].Cancer Res,2006,66(21):10357-10364.

[7]Thaker PH,Han LY,Kamat AA,et al.Chronic stress promotes tu?mor growth and angiogenesis in a mouse model of ovarian carcinoma[J].Nat Med,2006,12(8):939-944.