一種金標法檢測人絨毛膜促性腺激素的線性范圍評價

劉 非， 楊紅玲， 郭彩嬌， 梁綺華

(廣東省廣州市婦女兒童醫療中心珠江新城院區檢驗科， 廣東 廣州 510623)

人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)是胎盤合體滋養細胞合成的糖蛋白激素，由α和β亞基組成，因β亞基羧基端最后的24個氨基酸為該亞基所特有，故臨床上通過檢測β－HCG來反映血清中HCG的水平［1］。由于β－HCG個體間差異很大，臨床上多通過動態檢測血清β－HCG水平對生理妊娠和病理妊娠進行診斷、監測或治療，但多次采血限制了β－HCG臨床應用。有研究指出，晨尿β－HCG濃度略低于血清，且呈平行關系［2，3］。尿液 β－HCG檢測可能有助于對同一患者進行動態、無創的監測，便于臨床醫師及時對患者做出臨床判斷，及時干預。我院引進了U2/HCG－DOT金標定量檢測儀，儀器標示其定量尿液 β－HCG具有較寬的線性范圍(25mIU/mL－15000mIU/mL)，為確保臨床應用的可靠性，對其線性范圍進行驗證。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本實驗所用到的標本均來自于廣州市婦女兒童醫療中心珠江新城院區患者新鮮晨尿標本，－20℃冷凍保存備用。

1.2 儀器和試劑：U2/HCG－DOT金標定量檢測儀(奧普生物)，與其配套的人絨毛膜促性腺激素(HCG)金標斑點法快速定量檢測試劑盒(HCG－DOT)。

1.3 方法：采用改良 Doumas方法［4］，根據儀器標示的線性范圍(25mIU/mL－15000mIU/mL)，以及儀器說明中“樣本中β－HCG含量大于100mIU/mL和小于100mIU/mL所用的標準曲線不同”，進行兩次獨立的線性范圍評價試驗。第一次評價的線性范圍為100mIU/mL－15000mIU/mL，選擇一個尿β－HCG定性為弱陽性的低值樣本(L1)，和一個尿β－HCG定量在15000－20000mIU/mL的之間的高值樣本(H1)進行試驗。將高、低值兩個樣本按等間距混合(L1、5L1+1H1、4L1+2H1、3L1+3H1、2L1+4H1、1L1+5H1、H1)［5］，形成 7個樣本，每個樣本重復測定4次，記錄分析結果，進行離群值檢驗后，使用SPSS13.0統計軟件進行線性回歸分析［5］。第二次評價的線性范圍為 25mIU/mL－100mIU/mL，選擇一個尿β－HCG定性為陰性的低值樣本(L2)和一個尿β－HCG定量在100－200mIU/mL的之間的高值樣本進行試驗(H2)。將高、低值兩個樣本按等間距混合(L2、4L2+1H2、3L2+2H2、2L2+3H2、1L2+4H2、H2)，形成6個樣本，每個樣本重復測定4次，記錄分析結果。進行離群值檢驗后，使用SPSS13.0統計軟件進行多項式回歸分析。

2 結果

2.1 第一次線性范圍評價試驗，L1=80 mIU/mL，H1=17456 mIU/mL;結果如表1。

表1 第一次線性范圍評價試驗

每個濃度水平進行4次重復測定，求得CV%，均滿足不精密度可接受范圍(＜7%)，以預期值為橫坐標，檢測均值為縱坐標作散點圖，并進行線性回歸分析(圖1)，r2=0.9929 ＞0.95，b=0.9525，不在 0.97－1.03之間，觀察趨勢線發現，最高濃度點明顯偏離趨勢線，剔除后，重新進行回歸分析(圖2)。r2=0.9995＞0.95;b=1.0242 在 0.97－ 1.03 之間;a=42.649，作 a與0 差異的 t檢驗：ta=0.473，＜ta0.05，10=2.228。說明a與0在統計學上無顯著性差異。結論：方法在80－13228 mIU/mL濃度范圍內成線性。

2.2 第二次線性范圍評價試驗，L2=5.25 mIU/mL，H2=186 mIU/mL結果如表2。

因U2/HCG－DOT金標法檢測尿β－HCG時，靈敏度不及化學發光，當樣本中β－HCG含量小于25mIU/mL時，不能報告具體濃度，僅報告為小于25mIU/mL，所以第一點不能進行評價，剔除第一點后以預期值為橫坐標，檢測均值為縱坐標做散點圖，并進行線性回歸分析(圖3)r2=0.9979 ＞ 0.95，b=1.029，在 0.97－1.03之間，a=4.7975，作 a與 0差異的 t檢驗：ta=1.511，＜ta0.05，8=2.306，說明 a 與 0 在統計學上無顯著性差異。結論：方法在41－186 mIU/mL濃度范圍內成線性。

表2 第二次線性范圍評價試驗

3 討論

β－HCG水平檢測已經成為監測和評價妊娠非常重要的指標。臨床上通過檢測血清β－HCG水平可以對生理妊娠和病理妊娠進行診斷和監測，提示妊娠是否正常，預測先兆流產和評價保胎效果;可以判斷產后和人工流產后有無胎盤殘留;可以對IVF妊娠進行評價;可以用于異位妊娠的早期診斷和治療手段選擇及療效評價，還可以用于滋養細胞腫瘤的診斷和療效評價［6］。目前，臨床實驗室通常采用化學發光法對血清β－HCG進行定量檢測，其具有精密度好，靈敏度高的優點。但是，需要購買昂貴的化學發光分析儀和試劑，檢測成本高，加重患者負擔。

U2/HCG－DOT金標定量檢測儀使用金標斑點法快速定量檢測試劑盒(HCG－DOT)，利用固相夾心免疫法，形成固相抗α－HCG單克隆抗體 －樣本β－HCG－標記的β－HCG單克隆抗體的復合物，呈紅色斑點，將斑點紅色強度與儀器內存標準曲線比較，實現對樣本中β－HCG的快速定量。其具有操作簡單，可單個樣本獨立檢驗，隨到隨測，檢測時間短，能在3－5min完成對血清和尿β－HCG的定量，儀器試劑成本低，適合床邊檢驗(POCT)等優點。

U2/HCG－DOT金標法定量尿β－HCG可以實現對妊娠進行連續、高效、無創的評價，在臨床應用時，其檢測性能成為值得關注也必須評價的方面。儀器標示的定量范圍為25－15000mIU/mL，當樣本中β－HCG濃度小于100時無法讀出，顯示為“＜100 mIU HCG/mL”，此時可用肉眼判斷，凡反應板無肉眼可見紅色斑點，報告為“＜25mIU/mL”;凡有顯色斑點，改變標準曲線，在大于25mIU/mL小于100mIU/mL范圍內定量。據此，設計了兩次線性范圍評價試驗，分別覆蓋高低兩個標準曲線適用范圍。實驗結果顯示該方法在80－13228 mIU/mL和41－186 mIU/mL兩個試驗濃度范圍成線性。這表明該方法具有較寬的線性范圍，基本能夠滿足產科β－HCG定量需要，當遇到濃度超過13228mIU/mL的標本時，需一定比例稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數后報告。

值得注意的是，U2/HCG－DOT金標法定量檢測儀的標準曲線是存儲在儀器內部的，而并非每一批號的配套試劑盒有自帶的標準曲線數據，如何能夠保證不同批號的試劑對相同的標準曲線均適用，這就需要在新舊批號試劑盒交替時，進行不同批號試劑間的比對試驗來確保檢測的準確度。

［1］樂杰.婦產科學［M］.第7版.北京：人民衛生出版社，2008.29－32.

［2］鴻麟，肖玢，金瑋.靜脈血β－人絨毛膜促性腺激素相關性的探討［J］.生殖醫學雜志，2006，(4)：268－269.

［3］Benjapibal M，Wataganara T，Senawong S，et al.The correlation of beta－subunit human chorionic gonadotropin level in the serum and first morning urine of patients with gestational trophoblastic disease［J］.Med Assoc Thai，2001，84(7)：1000－1005.

［4］馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎［M］.上海：上海科學技術文獻出版社，2007.66－136.

［5］王治國.臨床檢驗方法確認與性能難證［M］.北京：人民衛生出版社，2009.

［6］Cole LA.New discoveries on the bioloy and detection of human chorionic gonadotropin［J］.Reprod Biol Endocrinol，2009，26(7)：8.