一種金標法檢測人絨毛膜促性腺激素的線性范圍評價

劉 非， 楊紅玲， 郭彩嬌， 梁綺華

(廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心珠江新城院區(qū)檢驗科， 廣東 廣州 510623)

人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)是胎盤合體滋養(yǎng)細胞合成的糖蛋白激素，由α和β亞基組成，因β亞基羧基端最后的24個氨基酸為該亞基所特有，故臨床上通過檢測β－HCG來反映血清中HCG的水平［1］。由于β－HCG個體間差異很大，臨床上多通過動態(tài)檢測血清β－HCG水平對生理妊娠和病理妊娠進行診斷、監(jiān)測或治療，但多次采血限制了β－HCG臨床應用。有研究指出，晨尿β－HCG濃度略低于血清，且呈平行關(guān)系［2，3］。尿液 β－HCG檢測可能有助于對同一患者進行動態(tài)、無創(chuàng)的監(jiān)測，便于臨床醫(yī)師及時對患者做出臨床判斷，及時干預。我院引進了U2/HCG－DOT金標定量檢測儀，儀器標示其定量尿液 β－HCG具有較寬的線性范圍(25mIU/mL－15000mIU/mL)，為確保臨床應用的可靠性，對其線性范圍進行驗證。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本實驗所用到的標本均來自于廣州市婦女兒童醫(yī)療中心珠江新城院區(qū)患者新鮮晨尿標本，－20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 儀器和試劑：U2/HCG－DOT金標定量檢測儀(奧普生物)，與其配套的人絨毛膜促性腺激素(HCG)金標斑點法快速定量檢測試劑盒(HCG－DOT)。

1.3 方法：采用改良 Doumas方法［4］，根據(jù)儀器標示的線性范圍(25mIU/mL－15000mIU/mL)，以及儀器說明中“樣本中β－HCG含量大于100mIU/mL和小于100mIU/mL所用的標準曲線不同”，進行兩次獨立的線性范圍評價試驗。第一次評價的線性范圍為100mIU/mL－15000mIU/mL，選擇一個尿β－HCG定性為弱陽性的低值樣本(L1)，和一個尿β－HCG定量在15000－20000mIU/mL的之間的高值樣本(H1)進行試驗。將高、低值兩個樣本按等間距混合(L1、5L1+1H1、4L1+2H1、3L1+3H1、2L1+4H1、1L1+5H1、H1)［5］，形成 7個樣本，每個樣本重復測定4次，記錄分析結(jié)果，進行離群值檢驗后，使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行線性回歸分析［5］。第二次評價的線性范圍為 25mIU/mL－100mIU/mL，選擇一個尿β－HCG定性為陰性的低值樣本(L2)和一個尿β－HCG定量在100－200mIU/mL的之間的高值樣本進行試驗(H2)。將高、低值兩個樣本按等間距混合(L2、4L2+1H2、3L2+2H2、2L2+3H2、1L2+4H2、H2)，形成6個樣本，每個樣本重復測定4次，記錄分析結(jié)果。進行離群值檢驗后，使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行多項式回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 第一次線性范圍評價試驗，L1=80 mIU/mL，H1=17456 mIU/mL;結(jié)果如表1。

表1 第一次線性范圍評價試驗

每個濃度水平進行4次重復測定，求得CV%，均滿足不精密度可接受范圍(＜7%)，以預期值為橫坐標，檢測均值為縱坐標作散點圖，并進行線性回歸分析(圖1)，r2=0.9929 ＞0.95，b=0.9525，不在 0.97－1.03之間，觀察趨勢線發(fā)現(xiàn)，最高濃度點明顯偏離趨勢線，剔除后，重新進行回歸分析(圖2)。r2=0.9995＞0.95;b=1.0242 在 0.97－ 1.03 之間;a=42.649，作 a與0 差異的 t檢驗：ta=0.473，＜ta0.05，10=2.228。說明a與0在統(tǒng)計學上無顯著性差異。結(jié)論：方法在80－13228 mIU/mL濃度范圍內(nèi)成線性。

2.2 第二次線性范圍評價試驗，L2=5.25 mIU/mL，H2=186 mIU/mL結(jié)果如表2。

因U2/HCG－DOT金標法檢測尿β－HCG時，靈敏度不及化學發(fā)光，當樣本中β－HCG含量小于25mIU/mL時，不能報告具體濃度，僅報告為小于25mIU/mL，所以第一點不能進行評價，剔除第一點后以預期值為橫坐標，檢測均值為縱坐標做散點圖，并進行線性回歸分析(圖3)r2=0.9979 ＞ 0.95，b=1.029，在 0.97－1.03之間，a=4.7975，作 a與 0差異的 t檢驗：ta=1.511，＜ta0.05，8=2.306，說明 a 與 0 在統(tǒng)計學上無顯著性差異。結(jié)論：方法在41－186 mIU/mL濃度范圍內(nèi)成線性。

表2 第二次線性范圍評價試驗

3 討論

β－HCG水平檢測已經(jīng)成為監(jiān)測和評價妊娠非常重要的指標。臨床上通過檢測血清β－HCG水平可以對生理妊娠和病理妊娠進行診斷和監(jiān)測，提示妊娠是否正常，預測先兆流產(chǎn)和評價保胎效果;可以判斷產(chǎn)后和人工流產(chǎn)后有無胎盤殘留;可以對IVF妊娠進行評價;可以用于異位妊娠的早期診斷和治療手段選擇及療效評價，還可以用于滋養(yǎng)細胞腫瘤的診斷和療效評價［6］。目前，臨床實驗室通常采用化學發(fā)光法對血清β－HCG進行定量檢測，其具有精密度好，靈敏度高的優(yōu)點。但是，需要購買昂貴的化學發(fā)光分析儀和試劑，檢測成本高，加重患者負擔。

U2/HCG－DOT金標定量檢測儀使用金標斑點法快速定量檢測試劑盒(HCG－DOT)，利用固相夾心免疫法，形成固相抗α－HCG單克隆抗體 －樣本β－HCG－標記的β－HCG單克隆抗體的復合物，呈紅色斑點，將斑點紅色強度與儀器內(nèi)存標準曲線比較，實現(xiàn)對樣本中β－HCG的快速定量。其具有操作簡單，可單個樣本獨立檢驗，隨到隨測，檢測時間短，能在3－5min完成對血清和尿β－HCG的定量，儀器試劑成本低，適合床邊檢驗(POCT)等優(yōu)點。

U2/HCG－DOT金標法定量尿β－HCG可以實現(xiàn)對妊娠進行連續(xù)、高效、無創(chuàng)的評價，在臨床應用時，其檢測性能成為值得關(guān)注也必須評價的方面。儀器標示的定量范圍為25－15000mIU/mL，當樣本中β－HCG濃度小于100時無法讀出，顯示為“＜100 mIU HCG/mL”，此時可用肉眼判斷，凡反應板無肉眼可見紅色斑點，報告為“＜25mIU/mL”;凡有顯色斑點，改變標準曲線，在大于25mIU/mL小于100mIU/mL范圍內(nèi)定量。據(jù)此，設(shè)計了兩次線性范圍評價試驗，分別覆蓋高低兩個標準曲線適用范圍。實驗結(jié)果顯示該方法在80－13228 mIU/mL和41－186 mIU/mL兩個試驗濃度范圍成線性。這表明該方法具有較寬的線性范圍，基本能夠滿足產(chǎn)科β－HCG定量需要，當遇到濃度超過13228mIU/mL的標本時，需一定比例稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)后報告。

值得注意的是，U2/HCG－DOT金標法定量檢測儀的標準曲線是存儲在儀器內(nèi)部的，而并非每一批號的配套試劑盒有自帶的標準曲線數(shù)據(jù)，如何能夠保證不同批號的試劑對相同的標準曲線均適用，這就需要在新舊批號試劑盒交替時，進行不同批號試劑間的比對試驗來確保檢測的準確度。

［1］樂杰.婦產(chǎn)科學［M］.第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.29－32.

［2］鴻麟，肖玢，金瑋.靜脈血β－人絨毛膜促性腺激素相關(guān)性的探討［J］.生殖醫(yī)學雜志，2006，(4)：268－269.

［3］Benjapibal M，Wataganara T，Senawong S，et al.The correlation of beta－subunit human chorionic gonadotropin level in the serum and first morning urine of patients with gestational trophoblastic disease［J］.Med Assoc Thai，2001，84(7)：1000－1005.

［4］馮仁豐.臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)［M］.上海：上海科學技術(shù)文獻出版社，2007.66－136.

［5］王治國.臨床檢驗方法確認與性能難證［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.

［6］Cole LA.New discoveries on the bioloy and detection of human chorionic gonadotropin［J］.Reprod Biol Endocrinol，2009，26(7)：8.