大黃酚固體分散體的制備及體外溶出研究

韓 剛， 劉 莉， 康 欣， 王彥雪， 趙 媛， 肖 倩， 郭肖菲

(華北煤炭醫學院藥學系，河北省煤礦衛生與安全重點實驗室，河北唐山063000)

大黃酚(chrysophanol)是中藥大黃的主要活性成分之一，具有抗菌、止咳、止血、抗脂質過氧化、抗衰老等多種藥理作用［1-2］。但大黃酚不溶于水，微溶于乙醇等有機溶劑，體內吸收差，生物利用度低［3］。改進難溶性藥物溶出度的方法較多，其中利用固體分散技術較為常用［4-5］。本實驗以聚乙二醇6000為載體，制備了大黃酚固體分散體，考察了大黃酚固體分散體在體外的溶出性質。

1 儀器與材料

D/max-rc型X-射線分析儀器(日本Rigaku公司);DSC-60差示掃描量熱儀(日本Shimadzu公司);1100高效液相色譜儀(美國 Agilent公司);BT-125D電子天平(Sartorius公司);氣浴恒溫振蕩器(江蘇金壇市榮華儀器公司);RCZ-8A藥物溶出儀(天津大學精密儀器廠)。

大黃酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，供定量測定用，批號:110796-200716);大黃酚原料藥(南京澤朗有限公司，純度＞97%);聚乙二醇6000(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(北京化學試劑廠);甲醇為色譜純(Fisher公司);其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 供試品的制備

2.1.1 大黃酚-PEG固體分散體的制備 將大黃酚溶解于適量四氫呋喃中，再加入適量95%乙醇制成大黃酚溶液，將PEG6000加熱熔融，將大黃酚溶液倒入熔融的PEG6000中攪拌均勻，室溫冷卻。按上述方法制備大黃酚與PEG6000質量比為1∶2、1∶4、1∶6的固體分散體備用。

2.1.2 大黃酚-PVP固體分散體的制備 將大黃酚與載體PVP分別按質量比1∶2、1∶4、1∶6的比例，加入適量的無水乙醇使其完全溶解，溶液轉入旋轉蒸發儀中，60℃將溶劑蒸干，得大黃酚-PVP固體分散體，備用。

2.1.3 物理混合物的制備 將大黃酚與載體PVP、PEG分別按質量比1∶2、1∶4、1∶6的比例研細，過60目篩即得不同載體，不同比例的大黃酚與載體的物理混合物。

2.2 大黃酚測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent extend-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水-冰醋酸(77 ∶22 ∶1);體積流量 1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:428 nm［5］;進樣量:20 μL。

2.2.2 標準曲線的繪制 準確稱取干燥后的大黃酚對照品約3 mg于25 mL量瓶中，甲醇定容即為大黃酚對照品溶液。取對照品溶液適量，分別稀釋成 0.1、1.0、2.5、4.0、8.0、10.0、15.0、20μg/mL，20μL 進樣，測定大黃酚的峰面積 A，以大黃酚質量濃度C對峰面積A進行回歸，得回歸方程:A=35.76C-6.58，r=0.9994，線性范圍 1 ～20 μg/mL。

2.2.3 精密度實驗 分別準確稱取干燥后的大黃酚-PVP固體分散體、大黃酚-PEG固體分散體各約4 mg，分別置于25 mL量瓶中，甲醇溶解，即為供試品溶液。取供試品溶液于同日內連續進樣6次測定 (時間間隔為2 h)，測得大黃酚-PVP固體分散體的RSD為1.44%，大黃酚-PEG固體分散體RSD為1.78%，表明所建立的大黃酚測定方法重復性良好。

2.2.4 回收率實驗 分別準確稱取大黃酚-PVP固體分散體、大黃酚-PEG固體分散體約4 mg，各9份，分別置于25 mL量瓶中，分別精密加入大黃酚對照品溶液適量，制成低、中、高3種質量濃度的供試品溶液，20 μL進樣，測定大黃酚的峰面積，計算大黃酚-PVP固體分散體低、中、高3種質量濃度的回收率分別為 97.52%、98.60%、98.75%;大黃酚-PEG固體分散體低、中、高3種濃度的回收率分別為99.11%、101.4%、99.73%，表明建立的大黃酚測定方法回收率良好。

2.3 樣品溶解度測定 在具塞三角燒瓶中分別加入10 mL人工腸液，分別加入過量的大黃酚、大黃酚固體分散體、大黃酚與不同載體的物理混合物，置于氣浴振蕩器中，37℃振蕩72 h，0.45μm微孔濾膜過濾，進樣測定大黃酚的峰面積，根據標準曲線計算溶解度。見表1。

表1 樣品的溶解度(37℃)

2.4 樣品溶出度測定 照2010年版《中國藥典》二部附錄XC第一法測定溶出度［7］，以900 mL含0.2%十二烷基硫酸鈉人工腸液為溶出介質，溫度(37±0.5)℃，轉速100 r/min。取各處方固體分散體適量，取大黃酚、大黃酚與載體的物理混合物適量(相當于含大黃酚 3.5 mg)，分別于 3、6、10、15、20、30、40、60 min 取樣 2 mL，立即用 0.45μm 微孔濾膜過濾，同時補充等溫度等體積溶出介質。20μL進樣測定，將測定換算成累積溶出百分率。

2.5 載體的選擇 以聚乙二醇6000為載體制備的大黃酚固體分散體其溶出速率較大黃酚原料藥均提高，其中以PEG 6000為載體制得的固體分散體效果最好，40 min內累積溶出百分率達70%，明顯高于PVP固體分散體，故選用聚乙二醇6000為載體。見圖1。

圖1 不同載體制備固體分散體溶出度曲線

2.6 載體比例的選擇 分別取1∶2、1∶4、1∶6大黃酚-PEG固體分散體，測定大黃酚固體分散體的體外溶出度，如圖2所示，大黃酚與載體質量比為1∶4時，40 min內大黃酚累積溶出百分率達70%。從溶出度曲線可知，大黃酚與PEG載體以1∶4比例形成的固體分散體最好，故選用大黃酚-PEG固體分散體(1∶4)的樣品進行X射線衍射和差熱分析。

圖2 不同比例大黃酚-PEG固體分散體的溶出曲線

2.7 樣品差示掃描量熱(DSC)分析［8］取 PEG6000、大黃酚、大黃酚-PEG固體分散體(1∶4)、大黃酚與PEG物理混合物(1∶4)分別進行差示掃描量熱(DSC)分析。測定條件:空鋁坩堝為參比，氣氛為N2，升溫范圍20℃ ～250℃，升溫速率10℃/min。結果見圖3。

圖3 大黃酚(a)，大黃酚-PEG固體分散體(b)，大黃酚與PEG物理混合物(c)，PEG(d)的DSC圖

2.8 樣品的X射線衍射分析 取大黃酚PEG固體分散體進行X射線衍射分析，測試條件為CuKa石墨單色器衍射，管流:20 mA，高壓:30 kV，掠角 θ為5 ～35°。見圖4、5。

圖4 大黃酚

圖5 大黃酚固體分散體

3 討論

差示掃描量熱(DSC)分析結果顯示，大黃酚在196℃有一吸熱峰，為大黃酚的熔點峰，與文獻報道一致［9］。PEG6000在75℃有一吸熱峰［10］。在大黃酚與PEG 6000的物理混合物中大黃酚的吸熱峰仍存在，說明載體與大黃酚的機械混合雖然可以使藥物的結晶有所減少但是藥物依然以原來的晶型存在，在大黃酚與PEG 6000形成的固體分散體中大黃酚196℃處的吸熱峰完全消失，說明大黃酚與載體發生相互作用，使藥物結晶結構發生改變，大黃酚在固體分散體中以無定形形式存在，從而增加了大黃酚的分散程度，提高了大黃酚的體外溶出度。由圖4可見，大黃酚的晶體衍射峰清晰可辨。而固體分散體的衍射圖僅為一寬帶，說明在固體分散體中，大黃酚的晶體已完全消失，而以無定形狀態分散于非晶體的PEG中，從而達到高度分散狀態(見圖5)。

體外溶出實驗顯示，大黃酚固體分散體的溶出度大于物理混合物，大于大黃酚，并且大黃酚與PEG 6000的比例為1∶4時大黃酚固體分散體溶出度最大。

以聚乙二醇6000為載體將大黃酚制成固體分散體可增加大黃酚的溶解度，改善大黃酚的溶出度。

［1］Lu C C，Yang J S，Huanq A C，et al.Chrysophanol induces necrosis through the production of ROS and alteration of ATP levels in human liver cancer cells［J］.Mol Nutr Food Res，2010，18(12):264-269.

［2］張丹參，張 力，薛貴平，等.大黃酚的抗衰老作用［J］.中國醫院藥學雜志，2005，25(1):15-17.

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［9］張黎明，王玲玲，趙 希.大黃酚和大黃素甲醚的熱分析與X-射線衍射圖譜特征［J］.藥物分析雜志，2009，29(2):257-260.

［10］嚴瑞暄.水溶性高分子［M］.北京:化學工業出版社，2001:633-642.