五子衍宗丸對少弱精癥模型大鼠精子質量及睪丸組織的影響

王秋萍， 王桐生， 龍子江， 劉向國， 饒玉松， 孫 鑫， 陳 花

(1．安徽省疾病預防控制中心毒理室，安徽合肥230031;2．安徽中醫學院藥理學教研室，安徽合肥230038;3．安徽中醫學院中西醫結合臨床學院，安徽合肥230038)

少精子癥、弱精子癥是男性不育最常見的病因之一。引起男性少、弱精癥的病因病機復雜，其治療方法還處在探索發展階段，中醫藥在“補腎”為其治療大法的基礎上進行辨證論治，對改善精子的數量和質量及運動功能方面顯示出獨特的優勢，本實驗以經典補腎方劑五子衍宗丸為研究對象，系統觀察該方劑對少弱精模型大鼠精子質量及睪丸組織病理改變的影響，以期探討“補腎法”的科學內涵。

1 材料

1．1 實驗動物 雄性 Wistar大鼠，體質量180～200 g，SPF級，由安徽省實驗動物中心提供，合格證號為:SCXK(皖)2005-001號。

1．2 實驗藥物 五子衍宗丸(枸杞子、覆盆子、菟絲子、五味子、車前子)，劑量參考《中華人民共和國藥典》2005年版中五子衍宗丸成分中各藥比例計算，每劑含枸杞子16 g、菟絲子16 g、覆盆子8 g、車前子4 g、五味子2 g，采用水煎濃縮成合適濃度備用。雷公藤多苷片，10 mg/片，上海復旦復華藥業有限公司生產，批號:100502;黃精贊育膠囊，上海新亞藥業邢江有限公司生產，0．31 g/粒，批號:100502。

1．3 實驗儀器 OLYMPUSBX60光學顯微鏡;恒溫水浴鍋箱，北京東霞科學儀器廠生產。病理組織包埋機、組織切片機等。

2 方法

2．1 動物分組及給藥［1］取體質量為180～200 g的雄性大鼠60只，隨機分成正常組，模型組，黃精贊育膠囊組(陽性組，3．01 g/kg)，五子衍宗丸小、中、大劑量組(分別為 3．83、7．67、15．33 g生藥/kg，按公斤體質量計算相當于人用量 46 g生藥/d的5、10、20倍)。除正常組外，其他各組動物灌胃給予雷公藤多苷30 mg/(kg·d)(用0．5%CMCNa制成混懸液)，連續30 d，造成少弱精子癥模型。造模結束后各組動物按劑量灌胃給藥，1 mL/100 g體質量，連續給藥30 d，末次給藥后30 min，處死動物，摘取睪丸、附睪，做相關檢測。

2．2 精子計數、活率測定［2］將盛有6 m L生理鹽水的試管置于恒溫水浴箱內預熱至37℃，然后將一側附睪剪碎放入試管中，搖勻，37℃保溫15 min，使精子充分游離。取1滴適當稀釋后滴入血細胞計數板上，200倍顯微鏡下計數5個中方格內精子數(n)，每毫升精子數為n×5×稀釋倍數×104。另取1滴涂片，觀察精子活率，至少觀察200個精子，分別計數有活動力及無活動力的精子數。精子活率=活動精子數/(活動精子數+不動精子數)×100%。

2．3 睪丸組織病理學檢查 取新鮮的睪丸組織，采用4%多聚甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，蘇木精-伊紅染色，光鏡下進行病理學檢查。

3 結果

3．1 五子衍宗丸對少弱精癥模型大鼠精子質量影響 結果見表1。

表1 五子衍宗丸對少弱精癥模型大鼠精子質量影響( ± s，n=10)

表1 五子衍宗丸對少弱精癥模型大鼠精子質量影響( ± s，n=10)

與正常組比，*P ＜0．05;與模型組比，ΔP ＜0．05。

組別 劑量/(g/kg)精子活力/%精子密度/(×106/mL)正常組 － 78．90±9．15Δ 26．40±3．63Δ模型組 － 33．50±13．39* 13．90±3．41*贊育膠囊組 3．01 58．10 ±13．96*Δ 18．90 ±8．91*五子衍宗丸組(小) 3．83 42．19 ±9．59* 17．40 ±6．19*五子衍宗丸組(中) 7．67 51．20 ±12．02*Δ 17．20 ±4．47*五子衍宗丸組(大) 15．34 58．90 ±16．73*Δ 22．20 ±8．50Δ

由表1可見:雷公藤多苷連續造模30 d后，模型大鼠的精子活力與精子密度明顯下降，與正常組比差異有顯著性意義(P＜0．05)。連續給藥30 d后，五子衍宗丸各劑量組動物的精子活力和精子密度均明顯增加，其中五子衍宗丸中、高劑量組的精子活力、高劑量組的精子密度與相應模型組比差異顯著(P ＜0．05)。

3．2 五子衍宗丸對少弱精癥模型大鼠睪丸組織的影響 結果見圖1。

圖1 五子衍宗丸對少弱精癥模型大鼠睪丸組織形態學的影響

光鏡檢查可見:正常組大鼠睪丸生精小管呈圓形或卵圓形，生精小管內含大量精子。精原細胞圓而規則，緊貼在生精小管的基底膜。各期生精細胞排列整齊、緊密、有序，層次分明。支持細胞形態正常。模型組大鼠睪丸生精小管生精上皮明顯變薄，生精細胞脫落，細胞層次紊亂，精原細胞、精母細胞減少，精子細胞及精子減少更加明顯，睪丸間質細胞輕度水腫。其他給藥各組大鼠睪丸生精小管呈圓形或卵圓形，生精小管內含大量精子。生精細胞排列稍疏松，結構清楚，層次分明，細胞層次減少，精原細胞數量正常，形態圓而規則，緊貼在生精小管的基底膜，其他各期生精細胞數量略減少，部分區域見少量生精細胞脫落。

4 討論

有資料表明，雷公藤制劑對生殖系統的損傷部位在睪丸和附睪，以精子細胞和精子最為敏感，雷公藤多苷大劑量時精子細胞和精母細胞變性壞死，使睪丸組織造精功能喪失，失去生育能力［3-4］。本研究發現，雷公藤多苷連續給藥30 d后，雄性大鼠睪丸生精小管生精上皮明顯變薄，生精細胞脫落，細胞層次紊亂，精原細胞、精母細胞減少，精子細胞及精子減少明顯，睪丸間質細胞輕度水腫，說明模型制備成功，采用雷公藤多苷制備少弱精子癥方法可靠。

少弱精子癥屬于中醫“精冷”、“精清”、“精少”范疇，“腎藏精，主生殖”，腎臟的精氣盛衰直接影響人類的生殖健康，因此大多數醫家對男性不育癥多以“腎虛”立論，治療多從補腎著手［5-6］。五子衍宗丸為著名的補益方劑，全方由枸杞子、菟絲子、覆盆子、五味子、車前子五種中藥組成，方中枸杞子滋腎填精、菟絲子溫腎益精，共為君藥;覆盆子溫腎而不燥、固精而不凝，五味子益氣補虛、強陰澀精，共為臣藥;車前子清肝肺風熱，導膀胱水邪，利水而不動氣，用為佐藥。全方不涼不燥，共奏補腎填精、疏利腎氣、種嗣衍宗之功，被譽為古今“種子第一方”［7-8］。本研究發現，五子衍宗丸能明顯提高模型動物精子活力，改善精子密度，并對睪丸組織的損傷有一定的保護作用，說明“補腎”法對少弱精子癥的治療有明顯療效，但其治療機制及科學內涵有待進一步研究。

［1］李德忠，李曉明，周小煦，等．補腎毓麟湯對雷公藤多苷致傷大鼠睪丸生殖細胞的修復作用［J］．中國中醫基礎醫學雜志，2006，12(7):522-525．

［2］邵祥龍，羅 瓊，秦 芹，等．山茱萸多糖對雄性大鼠性功能損傷的影響［J］．中國中藥雜志，2010，35(6):772-775．

［3］姚青海，王知俠，劉潤霞，等．育生液治療大鼠少精癥、弱精癥的實驗研究［J］．西安交通大學學報:醫學版，2004，25(2):165-167．

［4］俞晶華，卞慧敏，張啟春，等．補天育麟顆粒對雷公藤多苷致大鼠不育癥模型的影響［J］．南京中醫藥大學學報，2007，23(5):313-315．

［5］劉 鐵，蘇家文．清熱利濕結合補益生精法治療不育癥的臨床觀察［J］．中國性科學，2010，19(9):18-20．

［6］徐 璐，熊國保，胥杜鵑，等．少弱精癥的中西醫治療現狀與進展［J］．現代診斷與治療，2009，20(2):82-85．

［7］王志強，梁 兵，黃耀全．五子衍宗丸治療男性不育少弱精子癥的療效觀察［J］．廣西醫科大學學報，2010，27(2)291-292．

［8］張長城，賈亮亮，許 佳，等．五子衍宗湯對環磷酰胺致小鼠生精障礙保護作用的研究［J］．中國中醫基礎醫學雜志，2010，16(7):570-572．