LC-MS/MS法同時檢查烏蛇白芷膠囊中非法添加的醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬

李中娥， 趙培敬

(南陽市食品藥品檢驗所，河南南陽473061)

風濕痹癥是臨床醫學一大頑癥，其病程長，難于根治，給患者帶來終身痛苦。民間出現一些中藥制劑，隨意夸大療效，宣稱可以治愈風濕，無不良反應，實際上卻加入化學藥物提高其療效［1-12］，且添加化學藥的手段也從大量添加單一成分到少量、多成分同時添加［11］，一些患者大量服用，結果造成身體上的嚴重損害。市售烏蛇白芷膠囊，產品說明書中稱全部采用中藥材加工而成，適用于關節炎、風濕性類風濕性關節炎、肩周炎、頸椎病、骨質增生等癥，服用量較小，疑其加入了止痛類化學成分。結合工作經驗，擬篩選醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬3種成分，經過試驗，結果3種成分均檢出。本實驗所建立的LC-MS/MS法可快速、準確地對該制劑中是否摻有醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬3種成分作出判斷。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200-6310液質聯用儀，紫外檢測器，BP-211D電子天平。

1.2 試藥 3種對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供，批號分別為:醋酸潑尼松(100012-200105)、雙氯芬酸鈉(100334-200302)、布洛芬 (100179-200303)，樣品烏蛇白芷膠囊由河南某藥業公司生產。乙腈(色譜純，天津市登科化學試劑有限公司)，冰醋酸(分析純，開封市化學試劑二廠)，乙酸銨(分析純，上海試劑四廠)，水為純化水。

2 實驗方法

2.1 色譜條件 色譜柱:SHIMADZU shim-pack VP-ODS(250 mm ×4.6 mm);以0.02 mol/L 乙酸銨(含0.1%乙酸水溶液)--乙腈(53 ∶47)為流動相;體積流量:1.0 mL/min，檢測波長分段設置:0～7.7 min 為240 nm;7.7～10.0 min為280 nm;10.0 ～15.0 min 為263 nm［1］。柱溫:30 ℃，進樣量:10 μL 。

2.2 質譜條件 電噴霧離子源(ESI)，霧化氣壓力40 psi，干燥氣溫度:350℃，體積流量:9 mL/min，掃描范圍:150～500 m/z，毛細管電壓:3500 V。檢測方式分段設置:6.5～8.5 min目標離子400 m/z正模式一級、二級同時掃描;8.5～12.5 min目標離子296 m/z負模式一級、二級同時掃描;12.5～15.0 min目標離子206 m/z負模式一級、二級同時掃描［8，11］。

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取醋酸潑尼松、雙氯芬酸鈉、布洛芬對照品各5 mg，分別置50 mL量瓶中，加流動相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取上述3種溶液各5 mL，置同一50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4供試品溶液的制備 取本品10粒的內容物，精密稱定，混合均勻后稱取約相當于1粒的質量，置50 mL量瓶中，加流動相適量，超聲使溶解，放至室溫，加流動相至刻度，搖勻，濾過;精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

3 實驗結果

3.1 檢出限 取對照品溶液，稀釋成不同濃度的溶液后測定，結果醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬的HPLC最低檢出限分別為 2 μg、1.8 μg 及 7 μg;MS 最低檢出限均為 25 ng(S/N=3)，可滿足試驗要求。

3.2 對照品及樣品的色譜和質譜行為 按2.1項及2.2項下條件進樣，對照品液相色譜圖中分別在保留時間 7.08 min、8.37 min 和13.42 min 處出現色譜峰，見圖1，3 個峰的塔板數及分離度均符合中國藥典要求;醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬的一級、二級質譜分別見圖3、圖4及圖5。樣品的液相色譜圖見圖2，其峰1、峰2及峰3的質譜圖見圖6、圖7及圖8。

圖1 對照品HPLC圖譜

圖2 供試品HPLC圖譜

圖3 醋酸潑尼松一級(A)、二級質譜

圖4 雙氯芬酸一級(A)、二級(B)質譜

圖5 布洛芬一級(A)、二級(B)質譜

圖6 供試品峰1一級(1)、二級(B)質譜

圖7 供試品峰2一級(A)、二級(B)質譜

圖8 供試品峰3一級(A)、二級(B)質譜

3.3 實驗結果分析 由以上圖譜可以看出，樣品液相色譜圖中在與醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬對照品保留時間相應處均出現色譜峰，再與對照品的質譜圖比較，樣品中峰1、峰2及峰3的一級、二級質譜分別與醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬對照品質譜圖相吻合，故此可以證實樣品中含有醋酸潑尼松、雙氯芬酸及布洛芬這3種成分。

4 討論

此類非法添加的中藥制劑，干擾成分很多，因此在測定時對分析方法的選擇性提出了更高的要求。本文所采用的LC-MS/MS法，通過得到的一級質譜準分子離子峰及二級質譜碎片離子峰，為更進一步的判定此類藥物的性質提供了有力的依據，可有效避免假陽性結果，對打擊中藥制劑的非法添加問題具有重大意義。

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