RP-HPLC法測定不同產地天山雪蓮藥材中去氫木香內酯

凱賽爾·阿不拉， 蘇來曼·哈力克

(新疆維吾爾自治區食品藥品檢驗所，新疆烏魯木齊830004)

天山雪蓮為菊科植物天山雪蓮Saussurea involucrate(Kar.et Kir.)Sch.﹣ Bip.的干燥地上部分，系維吾爾族習用藥材，具有補腎活血、強筋骨、溫腎助陽、祛風勝濕等功效，用于風濕性關節炎、肺寒咳嗽、月經不調、小腹冷痛等癥狀［1］。天山雪蓮化學成分有蘆丁等黃酮類;紫丁香苷等木脂素類;大苞雪蓮內酯、去氫木香內酯等內酯類;大苞雪蓮堿等生物堿類;多糖類等［2］。采用高效液相色譜法測定不同產地天山雪蓮藥材中綠原酸、蘆丁、紫丁香苷已有報道［3-6］，但未見測定天山雪蓮藥材中去氫木香內酯的文獻報道，本實驗首次采用高效液相色譜法測定了天山雪蓮藥材中去氫木香內酯，分離效果好，方法準確可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀，包括Waters 1525雙元高壓泵，Waters 2487雙通道紫外檢測器，Waters 717自動進樣器，Brezee色譜工作站;BP211D電子天平(賽多利斯公司);SK7210LHC數控超聲波清洗器(上海科導超聲儀器公司);KLZ-UP高端超純水機(臺灣艾柯成都康寧實驗專用純水設備廠)。

1.2 試藥 去氫木香內酯對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:1525-200001供定量測定用)。甲醇為色譜純(Fisher公司)，水為超純水，其他試劑均為分析純。天山雪蓮藥材產地分別為新疆阜康、鞏留、和靜、庫車、鞏乃斯、巴里坤、青河、可可托海、特克斯、尼勒克、水西溝、水西溝(栽培)，共收集12批樣品，經蘇來曼·哈力克主任藥師與中國科學院新疆生態地理研究所沈觀冕研究員鑒定均為Saussurea involucrate(Kar.et Kir.)Sch.-Bip。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Symmetry ShieldTMRP18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱(美國 Waters公司);流動相為甲醇-水(65∶35)，體積流量為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃;檢測波長為225 nm［1］;進樣10 μL測定。在以上色譜條件下，與其它組分分離度良好，見色譜圖1。

圖1 去氫木香內酯對照品(A)和樣品(B)HPLC色譜圖

2.2 對照品溶液制備 精密稱取去氫木香內酯對照品10.42 mg，置10 mL量瓶中，加適量甲醇-乙酸乙酯(9∶1)的混合溶液溶解并定容，制成對照品貯備液;再精密量取此貯備液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇-乙酸乙酯(9∶1)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻(使質量濃度為0.1042 mg/mL)。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取天山雪蓮藥材粉末(過3號篩)約0.5 g，置具塞錐型瓶中，精密加入乙酸乙酯溶液50 mL，超聲處理10 min，放冷，再稱定質量，用乙酸乙酯溶液補足減失質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，揮干，殘渣加適量甲醇-乙酸乙酯(9∶1)混合溶液，使溶解并轉移至5mL量瓶中，加甲醇-乙酸乙酯(9∶1)混合溶液定容至刻度，搖勻，即得。

2.4 標準曲線及線性關系考察 精密量取2.2項下的對照品貯備液(1.042 mg/mL)0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，置 10 mL量瓶中，加甲醇-乙酸乙酯(9∶1)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL 含去氫木香內酯 0.01042、0.0521、0.1042、0.1563、0.2084 mg 的系列質量濃度對照品溶液。分別進10 μL，測定峰面積，以對照品進樣量X(μg)為橫坐標，峰面積的積分值Y為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為Y=9955412 X-69784.8，r=0.9995。去氫木香內酯在0.1042μg～2.084 μg范圍內成良好的線性關系.

2.5 精密度試驗 精密量取0.1042 mg/mL的去氫木香內酯對照品溶液10 μL，連續進樣6次，測定峰面積，結果去氫木香內酯RSD為0.42%，精密度良好。

2.6 重復性試驗 取同一樣品(鞏留)，照2.3項方法制備5份供試品溶液，依法測定，結果質量分數為1.199%，RSD為1.02%。結果表明，該方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別放置0、4、8、12、24 h 后進樣，測定峰面積，RSD 為 1.41%。表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8 加樣回收試驗: 取已知質量分數(鞏留)的樣品9份0.25 g，每份按高、中、低分別加入對照品溶液，按 2.3項下操作，計算回收率，結果見表1。

2.9 樣品的測定 分別精密稱取12批不同產地天山雪蓮藥材粉末各0.5 g，每批平行2份，按2.3項操作，按2.1項色譜條件下測定，結果見表2。

3 討論

3.1 供試品溶液提取溶媒的選擇 在去氫木香內酯的提取溶媒中，曾用了甲醇-乙酸乙酯(9∶1)、二氯甲烷及乙酸乙酯、甲醇、60%乙醇，其中乙酸乙酯提取效果最好，故選用乙酸乙酯作為提取溶劑。

表2 樣品測定結果(n=2)

3.2 供試品溶液提取時間的選擇 取供試品適量，以乙酸乙酯為提取溶劑，并按10 min、20 min和30 min不同時間超聲處理，結果表明超聲處理10 min即能提取完全。

3.3 本研究測定了12批不同產地天山雪蓮藥材中去氫木香內酯，從測定結果來看，不同產地天山雪蓮藥材中去氫木香內酯的質量分數基本一致，不受產地影響。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:50.

［2］李君山，蔡少青.雪蓮花類藥材的化學和藥理研究進展［J］.中國藥學雜志，1998，33(8):449-452.

［3］俞敏倩，陳建民.高效液相色普法測定11種雪蓮花中蘆丁及紫丁香苷［J］.色譜，2001，19(3):243-244.

［4］薛秀峰，陳華山，熊志立，等.RP-HPLC法同時測定雪蓮注射液中3種成分的含量［J］.沈陽藥科大學學報，2005，22(5):363.

［5］凱賽爾·阿不拉，蘇來曼·哈力克.HPLC測定不同產地天山雪蓮藥材中紫丁香苷的含量［J］.中國藥學雜志，2007，42(16):1278-1279.

［6］蘇來曼·哈力克，凱賽爾·阿不拉，敏 德.RP-HPLC測定不同產地不同采集期天山雪蓮中綠原酸及蘆?。跩］.中草藥，2007，38(9):1412-1414.