龍爪槐角與槐角對照藥材中蘆丁和槐角苷的比較研究

劉景東， 王志玲， 勾凌燕， 王 憬， 劉惠敏， 王秀卿

(第四軍醫大學白求恩軍醫學院，河北石家莊050081)

槐角Sophorae Fructus，冬季采摘自槐Sophorae L.的成熟果實，《神家本草經》列為上品，是我國傳統的中藥材，也是《中華人民共和國藥典》歷版收載品種［1］。槐角主產于我國北部，華南及西南地區亦產，以河南豫西山區品質最佳。槐樹生長緩慢，木材經濟價值低，農民從不把槐樹作為藥用經濟樹種，廣大農村地區槐資源接近枯竭。目前有限的槐資源主要集中在城鄉道路兩旁。2010年元月后槐角價格節節攀升，從年初至8月價格上漲70%以上且供不應求［2］。龍爪槐Sophora japonica var.pendula Loud.是槐在自然界中受到雷擊、動物的啃食、病蟲傷害等外部因素刺激突然變異而形成的新品種［3］，北京已有幾百年的種植歷史。文獻［4］對龍爪槐角與槐角對照藥材中主要的黃酮苷元槲皮素、山柰酚與染料木素進行的比較研究，初步探索了龍爪槐角替代槐角使用的可行性。本實驗參照王志玲等的方法［5］，考察了未水解的龍爪槐角主要黃酮苷和異黃酮苷成分，繪制了龍爪槐角與槐角對照藥材在260nm HPLC色譜圖，測定了龍爪槐角中的蘆丁與槐角苷，進一步為龍爪槐角替代槐角使用提供理論依據，也為開發新的槐資源提供參考。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀(美國 Waters，1525高壓雙泵系統，2487雙波長紫外檢測器，Breeze色譜數據工作站);AG135電子分析天平(d=0.01 mg/0.1 mg，瑞士);索氏提取器(天津玻璃儀器廠)。

龍爪槐角采自石家莊市不同地點(每處選10棵槐樹，每樹向陽面采摘一枝，去除枝葉后，混勻，常水洗凈，80℃烘干備用。采摘日期:2008-12-15)。經本院藥學教研室張書峰博士鑒定為龍爪槐的果實。蘆丁、槐角苷對照品及槐角對照藥材(中國藥品生物制品檢定所，批號:100080-200606、11695-200501、121214-0101);甲醇和乙腈為色譜純級，高純水由Millipore純水器制備。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -1%冰醋酸-乙腈(57 ∶38 ∶5，v/v);體積流量1.0 mL/min;檢測波長260 nm;柱溫為室溫。

2.2 對照品溶液的制備 準確稱取減壓干燥至恒質量的蘆丁和槐角苷對照品各10 mg，分別置于50 mL量瓶中，甲醇溶解后定容即為標準貯備液。取上述溶液，配成蘆丁和槐角苷質量濃度均為2 μg/mL的混合溶液，作為對照品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 分別精密稱取0.5 g干燥恒質量的龍爪槐角及槐角對照藥材細粉，濾紙包成小包，置150 mL索氏提取器中，加甲醇90 mL，100℃水浴連續提取10 h，冷卻后用甲醇定容至100 mL，0.45 μm濾膜過濾，作為樣品溶液。

2.4 蘆丁和槐角苷保留時間的確定 取蘆丁和槐角苷對照品溶液，按2.1項條件，進樣10 μL，進行色譜分析，計算蘆丁與槐角苷的保留時間分別為12.540、14.881(n=3)。

2.5 方法學考察

2.5.1 回歸方程的計算及線性關系考察 分別精密吸取貯備液適量，用甲醇配制成蘆丁和槐角苷質量濃度分為0.08、0.1、0.125、0.25、0.50、1.0、1.5、2.0 μg/mL 的混合溶液，按2.1項下條件進樣10 μL，每個質量濃度重復3次，記錄色譜圖。以峰面積(A)與質量濃度(C)進行線性回歸，蘆丁質量濃度在0.08 ～1.0 μg/mL 線性關系良好，A=144 ×102C+195，r=0.9996，槐角苷在 0.125 ～ 2.0 μg/mL 線性關系良好，A=500 ×102C+105，r=0.9999。

2.5.2 儀器精密度考察 取蘆丁、槐角苷分別為0.5、1.0 μg/mL的混合溶液，按2.1項中色譜條件，在一天內不同時間分別測定5次，計算日內誤差;連續5 d每天測定1次，計算日間誤差，蘆丁的日內和日間誤差RSD分別為0.74%和1.23%，槐角苷的日內和日間誤差 RSD分別為0.75%和1.65%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 加樣回收率試驗 取已測定蘆丁與槐角苷的龍爪槐角樣品粉末(龍爪槐角-1)6份，每份0.5 g，精密稱定，分別精密加入不同質量的蘆丁與槐角苷對照品，按2.3項方法制備供試品溶液，按2.1項色譜條件進樣測定，測定峰面積代入回歸方程計算加樣平均回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果(n=6)

2.6 龍爪槐角、槐角對照藥材HPLC色譜圖的繪制及蘆丁、槐角苷的測定 精密量取樣品溶液適量，用甲醇稀釋，使其濃度在線性范圍內，按2.1項中所述條件，進樣量為10 μL作HPLC分析，每個樣品重復3次，HPLC色譜圖結果見圖1和圖2。將蘆丁和槐角苷峰面積的平均值代入回歸方程分別計算，結果見表2。

圖1 龍爪槐角樣品色譜圖

圖2 槐角標準藥材樣品色譜圖

3 討論

3.1 研究證實，槐角中的主要活性成分為黃酮與異黃酮類化合物［6］。黃酮類化合物的藥理學作用涵蓋抗氧化、抗輻射、抗腫瘤、抗炎、抗疲勞和免疫調節等諸多方面［7-10］。槐角中的黃酮類化合物多達27種［11］，種類及含量多于銀杏葉［12］，異黃酮的量遠遠高于大豆［13］。劉景東等以往的研究結果顯示龍爪槐角中主要的黃酮苷元，槲皮素、染料木素和山柰酚分別為其干質量的 0.3%、3.04% 和 2.74%［4］。本實驗結果顯示龍爪槐角中主要的黃酮苷，蘆丁與槐角苷的平均質量分數分別為0.45%和4.44%。兩者含有量均高于銀杏葉和大豆。槐角中豐富的黃酮類化合物種類以及多方面的藥理學活性極大促進了槐資源的研究、開發和利用，使其具有廣闊的應用前景。

表2 龍爪槐角與槐角對照藥材樣品中蘆丁與槐角苷的測定結果

3.2 以往的研究結果［4］和本實驗的研究結果均顯示龍爪槐角與槐角對照藥材總黃酮提取物水解前后的HPLC色譜圖峰型基本一致，主要有效成分的量接近，提示兩者具有極為相似的黃酮類化合物譜型，有一定的可替代性。此外，龍爪槐多種植于機關大院、大專院校、公園綠地，生態環境好，污染少，植物資源品質優于種植于道路兩旁的國槐，且龍爪槐樹冠低，極易采摘，資源極為豐富，具有開發利用的價值。本實驗為龍爪槐角替代槐角應用提供了實驗依據。龍爪槐角如能與槐角通用，將會極大豐富現有槐資源，提高槐角的質量，從根本上解決槐角資源緊張的問題。龍爪槐角能否完全替代槐角還需進一步藥理學實驗證實。

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