非諾貝特酯防治大鼠非酒精性脂肪肝實驗研究

楊元十，岑國棟

(1.四川省資中縣人民醫院，四川 內江 641200; 2.成都地奧制藥集團藥物研究所，四川 成都 610041)

非諾貝特屬于第2代貝特酸類衍生物，可以降低血清甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇，升高高密度脂蛋白膽固醇，對酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝均有一定的治療作用[1－2]。但該類調脂藥物可能加重肝臟負擔，故筆者對非諾貝特的化學結構進行了修飾，旨在增效和減毒，并研制出一種新的化合物。本試驗中進行了該新化合物防治大鼠脂肪肝的初步藥效學研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

LD2－5型醫用離心機(北京醫用離心機廠);SHA－C恒溫振蕩器(常州國化電器有限公司);TMS－1024i型全自動生化分析儀(日本國東京醫療公司);BP221型電子天平(Sartoriou公司)。SD大鼠，雌雄各半，體重230～250 g，由北京維通利華試驗動物技術有限公司提供，試驗場地為成都地奧制藥集團有限公司新藥部藥理試驗室。

非諾貝特酯原料藥(成都地奧制藥集團有限公司，批號為081223，純度大于98%)，根據前期的體外篩選試驗，大鼠劑量設置為13.5mg/kg。陽性對照藥為多烯磷脂酰膽堿膠囊(商品名易善復，規格為228 mg/粒、24粒/盒，賽諾菲安萬特〈北京〉制藥有限公司，批號為D8139)，試驗時先用適量吐溫研磨，再用0.5%的羧甲基纖維素鈉(CMC)按設計濃度配制溶液。膽固醇(分析純，批號為20071229)，吐溫－80(化學純，批號為20050402)，均為成都科龍化工試劑廠產品;膽酸鈉(上海Solarbio公司，批號為20060826);丙硫氧嘧啶片(上海復星朝暉藥業有限公司，批號為071105，規格為50mg/片、100片/瓶;1，2丙二醇(分析純，天津市大茂化學試劑廠，批號為20051128);羧甲基纖維素鈉(上海三浦化工有限公司，批號為20010911)。

1.2 試驗方法

取SD大鼠64只，雌雄各半，體重230～250 g，隨機分為4組，每組16只。將各組大鼠適應性飼養3 d后，每天上午按10 mL/kg灌胃給藥1次，空白對照組(A組)給予95%羧甲基纖維素鈉混懸液，模型對照組(B組)給予生理鹽水，非諾貝特酯組(C組)給予13.5 mg/kg非諾貝特酯溶液，陽性對照組(D組)給予125 mg/kg易善復溶液(均相當于1倍成人臨床劑量。);除A組外，每天下午其余3組大鼠均按每100 g體重1 mL體積灌胃給予高脂乳液(20%豬油、8%膽固醇、1.2%膽酸鈉和0.6%丙硫氧嘧啶)。于第4周末次給藥后禁食16 h(不禁水)，眼眶取血，離心并分離血清，動態測定給藥4周后的血清生化指標。于第8周末次給藥后禁食16 h(不禁水)，稱取大鼠體重;股動脈取血，離心并分離血清，－30℃低溫保存，測定血清生化指標;另摘取肝臟并稱重，觀察大體外觀后，在每只大鼠相同部位切下2 g肝組織，置預冷的生理鹽水中制成10%肝勻漿，4℃靜置48 h后，以10000 r/min速度，離心20 min，取上清液，用全自動生化儀測定肝組織內甘油三酯的含量;另取肝左葉1塊，置10%中性福爾馬林溶液中，作肝組織病理學檢查(固定后，石蠟包埋，切片作HE染色)。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 常規觀察

試驗期間，A組動物活動、飲食正常，皮毛光亮、整潔，體重持續增長;其余各組動物在灌胃給予高脂乳液2周后逐漸出現不同程度的精神萎靡、活動減少、體重緩慢增加、無力、蜷縮、飲食減少、皮毛凌亂、萎黃等現象。

2.2 體重及肝臟器系數測定

結果見表1。可見，灌胃給予高脂乳液一定周期后，B組大鼠體重增加緩慢，與A組比較有顯著性差異(P＜0.01)，C組和D組大鼠體重增加緩慢但差異無統計學意義;B組大鼠的肝臟器系數較A組明顯升高(P＜0.01)，C組和D組脂肪肝模型大鼠肝臟器系數均有降低，但無統計學意義。

2.3 血清轉氨酶動態測定

血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬酸氨基轉移酶(AST)動態測定結果見表2。可見，在給予高脂乳液4周和8周后，B組大鼠血清中ALT的水平明顯較A組明顯升高(P＜0.01);與B組相比，C組和D組脂肪肝模型大鼠的ALT水平均明顯降低(P＜0.05)，表明非諾貝特酯具有一定的降轉氨酶作用。

表1 非諾貝特酯對脂肪肝大鼠體重及肝臟器系數的影響()

表1 非諾貝特酯對脂肪肝大鼠體重及肝臟器系數的影響()

注:與 B 組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01(下表同)。

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表2 各組大鼠血清轉氨酶和組織內甘油三酯測定結果()

表2 各組大鼠血清轉氨酶和組織內甘油三酯測定結果()

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2.4 肝臟肉眼大體外觀變化

A組大鼠肝臟肉眼觀呈鮮紅色，邊緣銳利，表面光滑;B組大鼠肝臟肉眼觀體積增大，邊緣變鈍，顏色呈奶黃色，切面油膩狀，有明顯脂肪顆粒，提示病變基礎是肝細胞脂肪積聚;C組和D組大鼠肝臟肉眼觀有部分呈鮮紅色。

2.5 肝組織內甘油三酯的含量測定

脂肪肝主要是甘油三酯大量堆積于肝臟所致的一種病理改變，因此測定肝組織中甘油三酯的含量尤為重要。結果見表2。可見B組大鼠肝細胞內甘油三酯含量明顯升高，與A組比較，差異有高度顯著性(P＜0.01);C組和D組大鼠肝組織內甘油三酯含量均顯著降低(P＜0.05)，表明非諾貝特酯具有減輕大鼠肝脂肪變性的作用。

2.6 肝組織病理學分析

結果見表3至表5。可見，與A組比較，B組大鼠出現了明顯的肝細胞脂肪變性(P＜0.01)，表明造模成功;與B組比較，C組和D組大鼠肝細胞脂肪變性程度均顯著降低(P＜0.05)，表明非諾貝特酯具有一定的減輕大鼠肝脂肪變性的作用。

表3 肝組織病理損傷判斷標準(HE染色，100×)

表4 各組大鼠肝臟病理分級統計結果(動物只數)

表5 各組大鼠肝臟病理學改變(平均記分值)

3 討論

脂肪肝系指肝內脂肪含量超過肝濕重的5%，或肝活檢1/3以上肝細胞有脂肪變性且彌漫分布于全肝。其對應的臨床概念是脂肪性肝病，系指病變主體在肝小葉，以彌漫性肝細胞脂肪變(多為大泡性脂肪變)為病理特征的臨床綜合征。目前，根據相關專業委員會的疾病診斷標準及有關共識，可以明確的是:脂肪性肝病在臨床上根據患者有無過量飲酒史，分為酒精性脂肪性肝病(酒精性脂肪肝)和非酒精性脂肪性肝病;酒精性肝病臨床診斷通常分為輕癥酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化;非酒精性脂肪性肝病一般在病理上分為單純性脂肪肝以及由其演變的脂肪性肝炎和肝硬化3種類型。

本研究旨在通過高脂乳液灌胃大鼠，造成大鼠非酒精性單純性脂肪肝模型，考察非諾貝特酯藥對大鼠非酒精性單純性脂肪肝的防治作用。結果表明，與空白對照組比較，模型對照組大鼠肝臟器系數、ALT活性、肝組織內甘油三酯含量均顯著升高，同時肝病理也顯示出現了一定的脂肪變性，說明造模成功;與模型對照組比較，非諾貝特酯組大鼠ALT活性及肝組織甘油三酯含量顯著降低，且肝脂肪變性程度也顯著減輕。

ALT主要存在于肝細胞漿內，在肝內的活性比血清高100倍，是最敏感的肝功能指標之一。AST在心肌中含量最高，肝臟其次，主要分布于肝細胞的線粒體中，在發生肝損傷時漏出量較ALT低。對于急性肝炎、慢性肝炎和輕型肝炎，雖有肝細胞損傷，但線粒體仍保持完整，釋放入血的只有存在于肝細胞漿內的ALT，故ALT升高明顯;對于重型肝炎和慢性肝炎的中型和重型，肝細胞的線粒體也遭到了嚴重破壞，AST從線粒體和胞漿內釋出，故AST也明顯升高。但本試驗中，脂肪肝模型大鼠血清中AST未明顯升高，原因可能為與通過高脂乳液造成的非酒精性脂肪肝模型有關，該模型病變程度較輕，肝細胞的線粒體未遭到嚴重破壞。

綜上所述，非諾貝特酯(試制品)具有一定的抗非酒精性單純性大鼠脂肪肝的作用。但因樣品量較少，僅做了一個劑量的試驗，下一步應加強對量效關系及其使用機制的研究。

[1]賈晨光，宋建亭.脂肪肝及其藥物治療[J].中國醫藥，2007，2(6):382－384.

[2]鐘 嵐，范建高，王國良.非酒精性脂肪性肝炎動物模型的建立[J].中華實用醫學，2000，2(1):3－6.