高效液相色譜法測定麻仁滋脾丸中橙皮苷含量

楊立志，姜雪敏，馮振來

(黑龍江省雞西市藥品檢驗(yàn)所，黑龍江 雞西 158100)

麻仁滋脾丸由大黃、火麻仁、當(dāng)歸、姜厚樸、炒苦杏仁、麩炒枳實(shí)、郁李仁等組方，具有潤腸通便、消食導(dǎo)滯的功效，用于腸胃積熱、腸燥津傷所致的大便秘結(jié)、胸腹脹滿、飲食無味、煩躁不寧、舌紅少津。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中無橙皮苷的含量控制，為更好地控制麻仁滋脾丸的質(zhì)量，筆者參考文獻(xiàn)[2－4]采用高效液相色譜 (HPLC)法測定了制劑中橙皮苷的含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－2010A型高效液相色譜儀;AG285型電子分析天平、KQ－400KDE型超聲波清洗器。橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為 100721－200512);麻仁滋脾丸(批號分別為20080101，080302，091007);水為純化水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Extend C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液(17 ∶83);流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL;檢測波長:283 nm。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算不低于2000。

2.2 溶液制備

精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含橙皮苷對照品0.0602 mg的溶液，即得對照品溶液。取本品10丸，精密稱定，研細(xì)，精密稱取0.5067 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量并以相同工藝制備不含枳實(shí)的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下3種溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果陰性對照品溶液色譜圖中，在橙皮苷色譜峰相應(yīng)位置無干擾峰出現(xiàn)，表明陰性樣品的其他組分對橙皮苷的測定無干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察: 精密吸取橙皮苷對照品溶液 2，5，10，15，20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以橙皮苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=1.799997×106X+2.714251 ×104，r=0.9996(n=5)。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣量在0.1204～1.204μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD=0.28%(n=6)，表明方法精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號為080302)，依法制備6份供試品溶液并測定含量。結(jié)果的 RSD=1.08%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一份供試品溶液，分別在配制后0，2，4，8，12，16，20，24 h 時(shí)依法測定。結(jié)果峰面積的 RSD=0.31%(n=8)，表明橙皮苷在供試品溶液中24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):稱取已知含量的同批樣品(批號為080302，含量為5.04 mg/g)6份，每份約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，以兩份為 1 組，共 3 組，每組分別精密加入 1.2550，2.5190，3.5125 mg橙皮苷，按供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按上述含量測定方法測定。結(jié)果批號為20080101，080302，091007的3批樣品中橙皮苷含量分別為5.08，5.05，5.42 mg/g。

3 討論

曾以甲醇、50%甲醇、稀乙醇為提取溶劑，結(jié)果以甲醇為提取溶劑時(shí)橙皮苷含量明顯高于50%甲醇、稀乙醇。對甲醇－水、甲醇－0.1%冰醋酸、乙腈－0.1%磷酸溶液等流動相進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈－0.1%磷酸溶液能很好地改善分離度和柱效，經(jīng)過條件優(yōu)化選擇，確定了乙腈－0.1%磷酸溶液(17∶83)為流動相，橙皮苷峰與其他組分能實(shí)現(xiàn)完全分離。該方法簡便準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，為控制麻仁滋脾丸質(zhì)量和深入研究其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了參考。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1094－1095.

[2]劉 源，沈好文.高效液相色譜法同時(shí)測定枳實(shí)導(dǎo)滯丸中柚皮苷與橙皮苷含量[J].中國藥業(yè)，2010，19(20):43－44.

[3]廖厚知，粟華生，梁山丹，等.HPLC測定銀芒止咳片中橙皮苷的含量[J].中成藥，2007，29(7):附 22－ 附 23.

[4]金 藝，張紅霞，許海燕，等.HPLC同時(shí)測定胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中南藥學(xué)，2008，6(3):317－319.