高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法測定仙芪眩寧顆粒中黃芪甲苷含量

龐興壽，牟曉

(廣西壯族自治區玉林食品藥品檢驗所，廣西 玉林 537000)

仙芪眩寧顆粒是由仙鶴草、黃芪、白術、澤瀉、生姜5味藥材制成的中藥復方制劑，具有健脾燥濕、升清降濁、利水除痰的功效，用于痰濕中阻型美尼爾氏病的輔助治療。現行質量標準采用薄層掃描法測定其中主要有效成分黃芪甲苷的含量。為了更準確、有效地控制該制劑的內在質量，確保用藥的安全有效，筆者采用高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法對君藥黃芪中的黃芪甲苷進行含量測定，報道如下。

1 儀器與試藥

美國Agillnet 1200型高效液相色譜儀(四元泵，脫氣裝置，自動進樣器)，Alltech ELSD 3300。黃芪甲苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為0781－200311);仙芪眩寧顆粒(廣西神通藥業有限公司，批號為 090901，090902，090903，090801，090802);自制陰性對照樣品1批;水為純凈水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Phenomenex Gemini C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:30℃;流動相:甲醇 － 水(80∶20);流速:1.0 mL/min;漂移管溫度:45 ℃ ;氣體流速:3.0 L/min;溫度:室溫;進樣量:10 μL。分離度大于1.5，理論板數按黃芪甲苷峰計算應不低于4000。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芪甲苷對照品0.01276 g，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成質量濃度為1.276 g/L的對照品溶液。取本品1袋，精密稱定，研細，精密稱取1 g，置索氏提取器中，加甲醇適量，加熱回流提取至無色，回收甲醇，殘渣加水50 mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次(每次40 mL)，合并正丁醇液，再用氨試液洗滌兩次(每次40 mL)，棄去氨試液，合并正丁醇，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取缺黃芪的陰性對照樣品1 g，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:取2.2項下3種溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定。結果見圖1，可見陰性對照樣品不干擾黃芪甲苷的測定。

線性關系考察:取質量濃度為1.276 g/L的對照品溶液，用自動進樣器分別精密吸取 20，40，60，80，100 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定。以黃芪甲苷進樣量(μg)的自然對數為縱坐標、峰面積值的自然對數為橫坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程 Y=0.8946X－7.1462，r=0.9993(n=5)。結果表明，黃芪甲苷進樣量在 25.52 ～127.6 μg范圍內的對數與峰面積的對數線性關系良好。

精密度試驗:取同一對照品溶液，依法連續進樣5次。結果的 RSD為 0.76%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品(批號為090902)，依法制備供試品溶液并測定含量。結果樣品中黃芪甲苷平均含量為0.0726 mg/g，RSD 為 0.48%(n=6)。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于配制后 0，2，4，6，8，24 h時依法測定含量。結果黃芪甲苷含量的 RSD為0.98%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為090902)共6份，每份約0.5 g。精密量取質量濃度為(1.276 g/L)的對照品貯備液 1.00 mL，加甲醇稀釋至 10.00 mL，即得質量濃度為 127.6 μg/mL的對照品溶液。精密量取對照品溶液 1.20，1.50，1.80 mL(每個質量濃度各2份)，依次加入6份樣品，按供試品溶液制備方法制備，進樣測定，記錄峰面積，計算回收率。結果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別取5批樣品，依法制備供試品溶液，注入液相色譜儀測定，以外標兩點法計算。結果批號為 090802，090801，090901，090902，090903 的樣品中，黃芪甲苷含量分別為 0.0591，0.0651，0.0828，0.0726，0.0689 mg/g。

3 討論

[1－4]試驗，結果以甲醇為溶劑，進行索氏加熱回流提取、水飽和正丁醇萃取、氨試液洗滌的方法，提取比較完全;對流動相進行選擇[5－7]時，分別比較乙腈－水(32∶68)、甲醇－水(70∶30)、甲醇－水(80∶20)等流動相，結果以乙腈－水(32∶68)和甲醇－水(80∶20)為流動相時，所測得黃芪甲苷峰形均良好，各項指標均達標，但由于乙腈毒性較甲醇強，故選用甲醇－水(80∶20)為流動相。由于本試驗中蒸發光散射檢測器的載氣采用壓縮機輸出空氣，因此對環境也有所要求。若實驗室濕度過大，壓縮出的空氣含水量過高，會影響基線噪聲[8－9]。采用高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法測定仙芪眩寧顆粒中黃芪甲苷的含量，方法學考察結果表明，方法靈敏度高、準確可靠，可用于仙芪眩寧顆粒的質量控制。

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