高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法測(cè)定仙芪眩寧顆粒中黃芪甲苷含量

龐興壽，牟曉

(廣西壯族自治區(qū)玉林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 玉林 537000)

仙芪眩寧顆粒是由仙鶴草、黃芪、白術(shù)、澤瀉、生姜5味藥材制成的中藥復(fù)方制劑，具有健脾燥濕、升清降濁、利水除痰的功效，用于痰濕中阻型美尼爾氏病的輔助治療。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法測(cè)定其中主要有效成分黃芪甲苷的含量。為了更準(zhǔn)確、有效地控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，確保用藥的安全有效，筆者采用高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法對(duì)君藥黃芪中的黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

美國Agillnet 1200型高效液相色譜儀(四元泵，脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣器)，Alltech ELSD 3300。黃芪甲苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為0781－200311);仙芪眩寧顆粒(廣西神通藥業(yè)有限公司，批號(hào)為 090901，090902，090903，090801，090802);自制陰性對(duì)照樣品1批;水為純凈水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Phenomenex Gemini C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:30℃;流動(dòng)相:甲醇 － 水(80∶20);流速:1.0 mL/min;漂移管溫度:45 ℃ ;氣體流速:3.0 L/min;溫度:室溫;進(jìn)樣量:10 μL。分離度大于1.5，理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品0.01276 g，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成質(zhì)量濃度為1.276 g/L的對(duì)照品溶液。取本品1袋，精密稱定，研細(xì)，精密稱取1 g，置索氏提取器中，加甲醇適量，加熱回流提取至無色，回收甲醇，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次(每次40 mL)，合并正丁醇液，再用氨試液洗滌兩次(每次40 mL)，棄去氨試液，合并正丁醇，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取缺黃芪的陰性對(duì)照樣品1 g，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下3種溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見圖1，可見陰性對(duì)照樣品不干擾黃芪甲苷的測(cè)定。

線性關(guān)系考察:取質(zhì)量濃度為1.276 g/L的對(duì)照品溶液，用自動(dòng)進(jìn)樣器分別精密吸取 20，40，60，80，100 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以黃芪甲苷進(jìn)樣量(μg)的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)、峰面積值的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程 Y=0.8946X－7.1462，r=0.9993(n=5)。結(jié)果表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在 25.52 ～127.6 μg范圍內(nèi)的對(duì)數(shù)與峰面積的對(duì)數(shù)線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果的 RSD為 0.76%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號(hào)為090902)，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果樣品中黃芪甲苷平均含量為0.0726 mg/g，RSD 為 0.48%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于配制后 0，2，4，6，8，24 h時(shí)依法測(cè)定含量。結(jié)果黃芪甲苷含量的 RSD為0.98%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為090902)共6份，每份約0.5 g。精密量取質(zhì)量濃度為(1.276 g/L)的對(duì)照品貯備液 1.00 mL，加甲醇稀釋至 10.00 mL，即得質(zhì)量濃度為 127.6 μg/mL的對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液 1.20，1.50，1.80 mL(每個(gè)質(zhì)量濃度各2份)，依次加入6份樣品，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

分別取5批樣品，依法制備供試品溶液，注入液相色譜儀測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算。結(jié)果批號(hào)為 090802，090801，090901，090902，090903 的樣品中，黃芪甲苷含量分別為 0.0591，0.0651，0.0828，0.0726，0.0689 mg/g。

3 討論

[1－4]試驗(yàn)，結(jié)果以甲醇為溶劑，進(jìn)行索氏加熱回流提取、水飽和正丁醇萃取、氨試液洗滌的方法，提取比較完全;對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行選擇[5－7]時(shí)，分別比較乙腈－水(32∶68)、甲醇－水(70∶30)、甲醇－水(80∶20)等流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈－水(32∶68)和甲醇－水(80∶20)為流動(dòng)相時(shí)，所測(cè)得黃芪甲苷峰形均良好，各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)標(biāo)，但由于乙腈毒性較甲醇強(qiáng)，故選用甲醇－水(80∶20)為流動(dòng)相。由于本試驗(yàn)中蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的載氣采用壓縮機(jī)輸出空氣，因此對(duì)環(huán)境也有所要求。若實(shí)驗(yàn)室濕度過大，壓縮出的空氣含水量過高，會(huì)影響基線噪聲[8－9]。采用高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法測(cè)定仙芪眩寧顆粒中黃芪甲苷的含量，方法學(xué)考察結(jié)果表明，方法靈敏度高、準(zhǔn)確可靠，可用于仙芪眩寧顆粒的質(zhì)量控制。

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