反相高效液相色譜法測定硫酸阿托品注射液的含量

劉海燕，蔣紅霞

(河南省周口市食品藥品檢驗所，河南 周口 466000)

硫酸阿托品(AtropineSulfate)屬莨菪堿類生物堿，是一種常用的抗膽堿藥，其注射劑的含量測定采用經典的酸性染料比色法[1]。該法操作比較煩瑣，影響因素多[2]。參照有關文獻[3－4]，筆者建立了測定其含量的高效液相色譜(HPLC)法，可以消除輔料的干擾，簡化分析步驟，結果比較滿意。現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010CHT型全自動高效液相色譜儀(日本島津);UV Detector紫外檢測器;92SM－202A－DR型電子分析天平;V－530型紫外－可見分光光度計。硫酸阿托品對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100040－200510);硫酸阿托品注射液(鄭州羚銳制藥股份有限公司，批號分別為0910072，1001081，1006162，規格為2∶1 mg);乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、庚烷磺酸鈉、氫氧化鈉、三氯甲烷、溴甲酚綠和鄰苯二甲酸氫鉀均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:30 ℃;流動相:0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.0025 mol/L庚烷磺酸鈉，用氫氧化鈉試液調節 pH至 5.0)－乙腈(82∶18);流速:0.8 mL/min;進樣量:20 μL;檢測波長:225 nm。外標法計算峰面積。

2.2 溶液制備

精密稱取于120℃干燥的硫酸阿托品對照品50.12 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液25 mL置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取供試品25 mL，置50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:按處方比例及制備工藝制備不含硫酸阿托品的陰性樣品。按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液，并按上述色譜條件進行檢測。結果陰性對照品溶液在硫酸阿托品對照品出峰位置未見干擾峰，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密量取對照品貯備液 0.5，1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加水至刻度，搖勻，各精密量取20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積 A為縱坐標、進樣量 C(μg)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 A=389800 C+11262，r=0.99975(n=7)。結果表明，硫酸阿托品進樣量在1.0024～10.024μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一份對照品溶液，重復進樣6次，依法測定。結果峰面積積分值的 RSD為0.56%(n=6)，表明儀器進樣精密度良好。

穩定性試驗:精密量取同一供試品溶液，在室溫下分別于0，1，3，5，8，12 h時進樣，依法測定。結果峰面積積分值的 RSD為0.93%(n=6)，表明硫酸阿托品在12 h內基本穩定。

重復性試驗:取供試品，按供試品溶液制備方法制備6份溶液，并按上述色譜條件測定。結果硫酸阿托品平均含量為標示含量的 99.1%，RSD 為 1.05%(n=6)。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的樣品(批號為0910072，含量為0.4955 g/L)10 mL，共6份，置50 mL量瓶中，每2份為1組，分別精密加入對照品貯備液 2.5，5.0，7.5 mL，加水稀釋至刻度，搖勻。照擬訂的色譜條件進樣，測定峰面積，計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批供試品，按擬訂的方法制備供試品溶液并測定含量，同時以藥典中的含量測定方法測定含量。結果見表2。

3 討論

取對照品溶液，在200～400 nm波長范圍內掃描，結果在225 nm波長處有最大吸收，故選用225 nm作為測定波長。本試驗比較了幾種不同流動相體系，如0.025 mol/L磷酸(以三乙胺調 pH為 3.0)－乙腈 (82 ∶18)，甲醇 (加0.05%三乙胺，用磷酸調 pH=5.8)－水(50∶50)0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.0025 mol/L庚烷磺酸鈉)－(82∶18)－乙腈(用氫氧化鈉試液調節pH至5.0)，發現最后1種流動相體系所得色譜圖峰形較好、保留時間適中，且峰面積和出峰時間較穩定，故采用此種流動相。

表1 硫酸阿托品加樣回收試驗結果(n=6)

表2 樣品含量測定結果(標示量%，n=3)

原標準中硫酸阿托品含量測定方法為酸性染料提取后紫外分光法[1]，此方法操作較復雜，其中用三氯甲烷提取易造成誤差，而且三氯甲烷對人體危害較大。采用高效液相色譜法，方法專屬性較強，操作簡便，重復性好，可更有效地控制本品的質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:982－983.

[2]安登魁.現代藥物分析選論[M].北京:中國醫藥科技出版社，2001:276－277.

[3]刑利平，歐世強.高效液相色譜法測定硫酸阿托品片的含量[J].華夏醫藥，1999，12(4):24－25.

[4]林慧青，李 潔.高效液相色譜法測定硫酸阿托品滴眼液的含量[D].上海:中國科學院上海冶金研究所，2000.