黃虎膠囊質量標準研究

馮建安 ，謝守德，李 希，易曉霞 ，唐曉瑩

(1.四川省中醫藥科學院中醫研究所，四川 成都 610031; 2.成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 610075)

黃虎膠囊由虎杖、黃連、山豆根、龍膽草、甘草等組方，具有清利濕熱、解毒止痛、散瘀保肝的功效，主治病毒性乙型肝炎中肝膽濕熱夾瘀型。筆者對該制劑進行了質量標準研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀，VWD紫外檢測器(美國Agilent公司);超聲波提取器(中船七院七二六所);BP211D型十萬分子一電子天平(德國Sartorius公司);艾科蒲實驗室分析型純化水機(頤洋企業發展有限公司);玻璃點樣毛細管(華西醫科大學儀器制造廠);層析缸100 mm×200 mm(上海信宜儀器廠);939薄層自動鋪板器(重慶貝可得公司)。硅膠G(青島海洋化工集團);大黃素對照品(含量測定用，批號為110756－200110)、大黃素甲醚對照品(含量測定用，批號為110758－200408)、氧化苦參堿對照品(含量測定用，批號為110780－200506)、苦參堿對照品(含量測定用，批號為 110805－200507)、鹽酸小檗堿(含量測定用，批號為110713－200208)、龍膽苦苷對照品(批號為 110770－200510)、虎杖對照藥材(批號為120980－200002)、山豆根對照藥材(批號為120913－200407)，黃連對照藥材(批號為120913－200407)均由中國藥品生物制品檢定所提供。試劑均為分析純或色譜純，超純水。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

虎杖:取膠囊內容物2 g，加甲醇50 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5 moL/L硫酸溶液10 mL，水浴加熱30 min，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次10 mL，全并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。另取虎杖對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品、大黃素甲醚對照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。吸取上述5種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏后，日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的紅色斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖1)。

山豆根:取膠囊內容物2 g，加三氯甲烷30 mL，濃氨試液1 mL，振搖30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5 mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。另取山豆根對照藥材0.5 g，加三氯甲烷 10 mL，濃氨試液 0.2 mL，振搖 15 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5 mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取氧化苦參堿對照品、苦參堿對照品，分別加三氯甲烷制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL、對照藥材溶液和對照品溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－濃氨試液(4∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對照藥材和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖2)。

圖1 虎杖薄層色譜圖

圖2 山豆根薄層色譜圖

黃連:取膠囊內容物2 g，加甲醇50 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液濃縮至干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。另取黃連對照藥材50 mg，同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL、對照藥材溶液和對照品溶液各1 μL分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯－醋酸乙酯－異丙醇－甲醇－ 水(6∶3 ∶1.5∶1.5∶0.3)為展開劑，置氨蒸氣預平衡 20 min的展開缸內，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖3)。

龍膽草[1]:取膠囊內容物2 g，加甲醇50 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液濃縮至干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性對照品溶液。另取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水(20∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖4)。

圖3 黃連薄層色譜圖

圖4 龍膽草薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件[2－4]

色譜柱:Agilent Eclipse XDB－C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);保護柱:Agilent Zorbax xdb－C18柱(4 mm ×4 mm，5 μm);流動相:甲醇－0.1% 磷酸(80 ∶20);流速:1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;檢測波長:254 nm。

2.2.2 溶液制備

精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24 h的大黃素對照品10.92 mg，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得質量濃度為0.2184 g/L的對照品溶液。取膠囊內容物約0.5 g，精密稱定，精密加入三氯甲烷50 mL和2.5 moL/L硫酸溶液20 mL，稱定質量，置80℃水浴中分別加熱回流2 h，冷卻至室溫。再稱定質量，加三氯甲烷補足減失的質量，搖勻。分取三氯甲烷液，精密量取4 mL，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，作為供試品溶液。取陰性樣品0.5 g，按供試品溶液的制備項下方法同法制成陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

系統適用性試驗:分別精密吸取2.2.2項下3種溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀測定。結果大黃素保留時間為4.7 min，陰性對照品溶液無干擾(見圖5)。

圖5 高效液相色譜圖

線性關系考察:分別精密量取對照品溶液1，2，3，4，5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀測定。以峰面積 A對質量濃度 C(μg/mL)進行線性回歸，得回歸方程 A=4076.08 X－125.5481(r=0.9999)。結果表明，大黃素質量濃度在21.84～109.20μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:精密量取對照品溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，連續進樣10 μL，測定6次，記錄色譜圖，結果大黃素平均峰面積為2123.644，RSD為0.54%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重現性試驗:取同一批膠囊(批號為080301)內容物0.5 g，共6份，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，進樣10 μL，測定大黃素峰面積。結果的 RSD為2.44%(n=6)，表明方法重現性良好。

穩定性試驗:精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0，2，4，8，24 h時進樣。結果峰面積的 RSD為 0.74%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為080301)9份，分別加入大黃素對照品溶液(0.2184 g/L)適量，按成品供試品溶液的制備方法及色譜條件進行測定，結果見表1。

表1 大黃素加樣回收試驗結果(n=9)

2.3 樣品含量測定

取3個批號的樣品各2份，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL進樣，測定峰面積，計算大黃素的含量。結果批號為080801、080802、080803的樣品中，大黃素平均含分量別為 5.93，5.87，6.16 mg/粒(n=2)。

3 討論

虎杖、黃連、山豆根、龍膽草的薄層色譜鑒別試驗中曾分別用正己烷－乙酸乙脂－甲酸(30∶10∶0.5)[5]、正丁醇－冰醋酸－水(7∶1∶2)、甲苯－丙酮－甲醇－濃氨試液(5∶5∶3∶0.2)、三氯甲烷－乙醇－水(10∶3∶1)下層溶液[1]為展開劑展開，結果也能對虎杖、黃連、山豆根、龍膽草進行鑒別，但正文中展開劑效果更好，因此選用正文中展開劑對黃虎膠囊進行質量控制。

含量測定中供試品溶液的制備對水解時間進行了考察，最終確定了水解時間2 h。此外還使用不同品牌色譜柱進行了測定方法的耐用性試驗，結果含量測定結果相近，表明所建立的含量測定方法具有較好的耐用性。

[1]劉訓紅，王玉璽，房克慧，等.中藥材薄層色譜鑒別[M].天津:天津科學技術出版社，1990:162.

[2]莫可豐，覃潔萍.HPLC法測定清火片中大黃素和大黃酚的含量[J].中國中醫藥信息雜志，2004，11(1):51.

[3]唐小波，吳健兒，趙緒元.高效液相色譜法測定虎杖中大黃素的含量[J].基層中藥雜志，2000，14(4):17.

[4]劉光喜.復方虎杖驅毒膠囊中大黃素的含量測定研究[J].湖南中醫雜志，2003，19(3):57.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典中藥薄層彩色圖譜集[M].廣州:廣東科學技術出版社，1993:22.