高效液相色譜法測定瀉停封膠囊中苦參堿含量

2011-07-28 05:25:54楊芳

中國藥業 2011年24期

楊芳

(湖南省常德市藥品檢驗所，湖南常德 415000)

瀉停封膠囊主要由金果欖、苦參、地榆、功勞木4味中藥材組方，具有清熱解毒、燥濕止瀉等功效，用于腹瀉、傷食泄瀉、脘腹疼痛、口臭、噯氣、急慢性腸炎等。方中苦參為豆科植物苦參 Sophora flavescens Air.的干燥根，主要有效成分苦參堿具有抗腫瘤、抗心律失常、抗菌、正性肌力、鎮痛等作用[1]。原標準[2]中僅對功勞木中鹽酸小檗堿有定量指標。本試驗參考文獻[1－11]，建立測定瀉停封膠囊中苦參堿含量的反相高效液相色譜法，為完善該制劑質量標準提供依據，現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，包括Waters2489紫外檢測器、四元梯度泵、在線脫氣裝置、柱溫箱、EMPower色譜工作站，溶劑過濾系統;梅特勒－托利多AG135型電子天平(德國Sartorius公司);KQ2200E型超聲波清洗器。水為Ⅰ級水，甲醇、乙腈為色譜試劑，磷酸二氫鉀、三氯甲烷均為分析純;苦參堿對照品(批號為110805－200306，中國藥品生物制品檢定所);瀉停封膠囊(貴州百靈企業集團制藥有限公司，批號分別為090306，090902，091003)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Hypersil BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.05 mol/L的磷酸二氫鉀溶液－乙腈－甲醇 (94∶5∶1);流速:1.0 mL/min;檢測波長:205 nm;柱溫:30 ℃;進樣量為 10 μL。采用外標法定量。分離度均應大于1.5，理論板數按苦參堿峰計算應不低于5000[3]。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取苦參堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含苦參堿0.128 mg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項下的本品內容物，研細，取0.3 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加三氯甲烷25 mL和濃氨試液1 mL，密塞，稱定質量，時時振搖，放置過夜，再稱定質量，用三氯甲烷補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，減壓回收至干，殘渣加流動相使溶解，轉移置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取除苦參藥材外，將其他藥材按處方中藥味的比例，配制陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取對照品溶液 1，5，10，15，20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積積分值為縱坐標、對照品進樣量(μg)為橫坐標進行線性回歸。得回歸方程 Y=1.035×107X－1.066×105，r=0.9997(n=5)。結果苦參堿進樣量線性范圍為 0.128 ～2.56μg。

精密度試驗:分別精密吸取同一對照品溶液，按擬訂的色譜條件重復進樣6次測定。結果苦參堿峰面積的 RSD為1.0%(n=6)。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，按擬訂的色譜條件于0，4，8，12，24，48 h時進樣測定。結果苦參堿峰面積的 RSD為1.2%(n=6)，表明供試品溶液在48 h內穩定。

重現性試驗:取樣品6份，按2.2項下方法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件進行測定。結果苦參堿峰面積的 RSD為1.3%(n=6)，表明方法重復性好。

加樣回收試驗:取已知含量(5.51 mg/g)的樣品9份 (批號為091003)約 0.15 g，加入苦參堿對照品溶液(0.422 g/L)，按供試品溶液制備方法配制高、中、低3組質量濃度的溶液，每一質量濃度2份，按擬訂的色譜條件測定。結果見表1。