廣西境內不同產區土茯苓中落新婦苷的含量測定

陳章源 ，李 戰，董青松，阮 群 ，白隆華

(1.廣西玉林制藥有限責任公司，廣西 玉林 537001; 2.廣西壯族自治區藥用植物園，廣西 南寧 530023)

土茯苓為百合科植物光葉菝葜的干燥根莖，具有解毒、除濕、通利關節之功效，臨床主要用于梅毒及汞中毒所致肢體拘攣、筋骨疼痛、濕熱淋濁、帶下、癰腫、瘰疬、疥癬等。2010年版《中國藥典(一部)》規定了土茯苓中落新婦苷的含量要求。為全面了解廣西地區產土茯苓中落新婦苷的變化差異，筆者采用高效液相色譜法測定了廣西區域內不同產區土茯苓中落新婦苷的含量，為有效開發利用廣西地區的土茯苓資源和栽培選種提供科學依據，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀，包括四元泵在線脫氣、VWD檢測器、Aiglent 1200型化學工作站;GR－202型電子分析天平(精確度為十萬分之一)。廣西境內不同產區土茯苓藥材(廣西藥用植物園提供，并經董青松教授鑒定);落新婦苷對照品(上海中藥標準化研究中心，純度不低于98.0%);甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Zorbax SB－C18柱(250 mm × 4.6 mm，5μm);流動相:甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66);柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min;檢測波長:291 nm;進樣量:10 μL。在上述色譜條件下，落新婦苷保留時間約為20.6 min，分離良好，分離度達到2.02，且不受藥材其他組分干擾，理論板數以落新婦苷計算均不小于5000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取落新婦苷對照品適量，加甲醇制成質量濃度為0.30 g/L的溶液，作為對照品溶液。取土茯苓粉末(過50目篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲提取30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:分別精密吸取對照品溶液 0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述各系列溶液各10 μL，按上述色譜條件進樣分析，以進樣量(μg)為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=2580.4 X －5.464，r=0.9998(n=6)。結果表明落新婦苷進樣量在0.15～2.40 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液(0.12 g/L)10 μL，分別連續進樣6次。結果落新婦苷峰面積的平均值為 3045.8，RSD為0.82%(n=6)，表明方法精密度良好。

穩定性試驗:取同一土茯苓(樣品號為5，東興)制備的供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，10 h 時進樣測定。結果落新婦苷峰面積的平均值為3073.2，RSD為1.01%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內基本穩定。

重復性試驗:精密稱取同一土茯苓粉末(樣品號為5，東興)，依法制備供試品溶液并測定含量。結果落新婦苷含量平均值為1.22%，RSD 為 1.24%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的同一土茯苓粉末(樣品號為5，東興，含量為1.21%)約0.25 g，精密稱取6份，分別精密加入落新婦苷對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率。結果見表1。

表1 落新婦苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別取不同來源的土茯苓藥材粉末(過50目篩)樣品約0.5 g，精密稱定，依法制成供試品溶液，按上述色譜條件，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定，以外標法計算樣品中落新婦苷的含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

試驗中參考有關文獻[1－2]，針對含量測定配制供試品溶液的不同提取方法(超聲、回流)、不同提取溶劑(甲醇、60%甲醇溶液)、不同溶劑體積(25，50，75，100 mL)以及不同提取時間(30，45，60 min)分別考察。結果以50 mL甲醇超聲提取和60%甲醇回流提取所得含量最大，且兩者差別不大，僅相差0.05%左右，且超聲提取30 min和回流提取30 min已基本可以把落新婦苷提取完全，故選擇操作較簡便的文中提取方法。

測定波長的選擇是參考2010年版《中國藥典(一部)》土茯苓中落新婦苷測定項下的波長，選291 nm。在選擇流動相時，考察了乙腈－0.05%磷酸溶液(25∶75)、甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66)或(39∶61)、甲醇－水、甲醇－0.05%磷酸溶液。結果表明，以甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66)為流動相，所得色譜峰峰形較好，分離度能達到2.0以上。

土茯苓為野生藥材資源，生長周期較長，隨著臨床用途的不斷增加，其資源匱乏更加嚴重，故進一步開發利用和引種栽培，顯得尤為重要。本試驗結果表明，本區域內所有檢測樣品中落新婦苷含量范圍為0.62% ～2.28%，均符合 2010年版《中國藥典(一部)》要求，為有效開發利用土茯苓資源和引種栽培提供了科學依據。

[1]李 磊，張宏桂，喬延江.HPLC法測定土茯苓藥材中落新婦苷和白蘆藜醇的含量[J].藥物分析雜志，2007，27(5):654 －656.

[2]陳 幸，李 彬，黎萬壽.HPLC法測定土茯苓中落新婦苷的含量[J].藥物分析雜志，2004，24(4):437 －438.