高效液相色譜法測定抗心絞痛新藥雷諾嗪的含量

劉愛芹，邢來全，于勝海

(1.山東省醫學科學院藥物研究所，山東 濟南 250062; 2.山東創新藥物研發有限公司，山東 濟南 250101)

雷諾嗪(ranolazine)是一種部分脂肪酸氧化抑制劑，可在不改變血液動力學參數的條件下發揮抗心絞痛作用，還可防止乳酸堆積導致的酸中毒，大大增強了使用安全性，為有效治療心絞痛、心肌梗死以及其他疾病提供了新的策略。筆者建立了測定雷諾嗪含量的高效液相色譜法[1]，現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜系統(包括四元輸液泵，二極管陣列檢測器，自動進樣器)，數據采集Millenium32軟件(美國Waters公司);AG245型電子天平(Mettler Toledo，瑞士)。乙腈(天津市四友生物醫學技術有限公司，色譜純);磷酸二氫鉀(天津市化學試劑六廠，分析純);三乙胺(天津市博迪化工有限公司，分析純);雷諾嗪對照品(由供試品精制而得，含量為99.86%);雷諾嗪(批號為20080601，20080602，20080603)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:江蘇漢邦科技有限公司Lichrospher C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);檢測器:Waters檢測器，在線過濾器(美國 Agilent公司);流動相:乙腈－加0.1 mL三乙胺的0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(50 ∶50);流速:1.0 mL/min;進樣量:10 μL;柱溫:室溫。在該色譜條件下，雷諾嗪色譜峰的理論板數為2907，色譜圖見圖1。

2.2 檢測波長確定

取雷諾嗪原料藥對照品約12 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加流動相適量，振蕩使溶解并稀釋至刻度，精密吸取5 mL，置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，置紫外分光光度計記錄紫外吸收曲線圖。結果最大吸收波長為272 nm，故選擇272 nm為檢測波長。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密稱取雷諾嗪對照品11.8 mg，置50 mL量瓶中，加流動相適量振蕩使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液 1，3，5，7，10 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成標準系列溶液。分別取該溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積(A)為縱坐標、質量濃度(C)為橫坐標進行線性回歸，線性回歸方程為A=2.28 ×107C －1.63×105，r=0.9993(n=5)。結果表明，雷諾嗪質量濃度在0.0492～0.492 g/L范圍內與峰面積線性關系良好。

穩定性考察:取含量測定項下的同一份供試品溶液，于0，2，4，6，8 h時分別取10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。結果的 RSD為0.3%(n=5)，表明供試品溶液在室溫(25℃)下8 h內穩定。

精密度試驗:取系列對照品溶液中的同一份溶液，在上述色譜條件下，取10 μL注入液相色譜儀，連續進樣5次，記錄峰面積。結果的 RSD為0.3%(n=5)，表明方法精密度良好。

回收率試驗:取雷諾嗪約10，12，14 mg，精密稱定，分別置50 mL量瓶中，按處方量加入輔料，加流動相適量使溶解并稀釋至刻度，制得模擬樣品，每個濃度各配2份。精密量取5 mL，分別置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別取上述溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。同法，另取雷諾嗪對照品適量，加流動相適量制成每1 mL約含0.12 mg的溶液，同法測定。結果3個濃度的回收率分別為 100.2% 和 99.9% ，100.1% 和 100.3% ，99.8%和100.0%，平均回收率為 100.1%，RSD 為 0.19%(n=6)，表明本法的準確度良好。

2.4 樣品含量測定

取雷諾嗪供試品約12 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相適量，振蕩使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，進樣10μL，記錄色譜圖。另取105℃干燥至恒重的雷諾嗪對照品約12 mg，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。依法檢查3批樣品，結果批號為20080601，20080602，20080603的樣品中雷諾嗪含量分別為標示量的 99.41% ，99.27%，99.50%(n=3)。

3 討論

通過對乙腈和0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液不同體積配比進行篩選，結果表明，兩者同體積配比再加少量三乙胺，系統的靈敏度高、分離度良好、理論板數高，因此采用乙腈和0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(50∶50，加0.1 mL三乙胺)作流動相。方法學考察結果表明，該方法準確、靈敏、簡便，可用于雷諾嗪原料藥含量測定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2010:附錄ⅤD.