高效液相色譜法測定通脈顆粒中阿魏酸含量

李軍山，白新濤，張 博

(神威藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 051430)

通脈顆粒是治療心腦血管疾病的口服制劑，由丹參、川芎、葛根3味藥材組方，具有活血通脈作用，用于治療缺血性心腦血管疾病、動脈硬化、腦血栓、腦缺血、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、心絞痛等[1]。1991年《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊)》中收錄的通脈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)暫無含量測定項(xiàng)。在2010年版《中國藥典(一部)》[2]中，川芎藥材增加了阿魏酸含量作為川芎的質(zhì)量控制點(diǎn)，阿魏酸(ferulic acid)化學(xué)名為4－羥基－3－甲氧基苯丙烯酸，是來自于多種植物的一種酚酸，在細(xì)胞壁中與多糖和蛋白質(zhì)結(jié)合成為細(xì)胞壁的骨架，在某些方面具有確切的藥理活性，且毒性很低[3]。為更有效地控制此制劑質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法檢測產(chǎn)品中阿魏酸含量?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Dionex Ultimate 3000型高效液相色譜系統(tǒng)(Ultimate 3000四元泵，Ultimate 3000自動進(jìn)樣器，Ultimate 3000二極管陣列檢測器，變色龍色譜工作站)。阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110773－200611);通脈顆粒(本公司自制，規(guī)格為10 g/袋，批號分別為 10011583，10011882，10012282，10020483，10020882，10021081，10021181，10031383，10031583，10032482);甲醇(ACI Labscan，色譜純)，冰醋酸(天津市化學(xué)試劑一廠，分析純)，純化水(本公司制備)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:Dionex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動相:甲醇 －1%醋酸溶液(30∶70);流速:1.0 mL/min;檢測波長:321 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

取本品細(xì)粉約2 g，精密稱定，加入70%甲醇溶液50 mL，水浴回流30 min，放冷，提取液轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿，用30 mL甲醇分多次洗滌容器，洗滌液與提取液合并蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶液多次溶解并轉(zhuǎn)移定容至10 mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密稱取阿魏酸對照品適量，用70%甲醇溶液制成每1 mL含2 μg的溶液，作為對照品溶液。取處方中缺川芎的其他藥味，按制法制成陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

空白干擾試驗(yàn):分別精密量取陰性對照品溶液、對照品溶液和供試品溶液10 μL進(jìn)樣，記錄高效液相色譜圖，見圖1。結(jié)果在阿魏酸對照品峰處未見其他干擾峰。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱取阿魏酸對照品0.01014 g，置100 mL容量瓶中，加入70%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密吸取該貯備液 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0 mL，分別置100 mL容量瓶中，用70%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10 μL。以對照品質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=0.9904 X －0.0357，r=1.0000(n=6)。結(jié)果表明，阿魏酸質(zhì)量濃度在 0.507 ～15.210 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取質(zhì)量濃度為2.028 μg/mL的阿魏酸對照品溶液 10μL，連續(xù)進(jìn)樣 6 次。結(jié)果峰面積分別為 1.9415，1.9413，1.9413，1.9414，1.9417，1.9411，RSD 為 0.01%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，室溫保存，于 2，4，6，8，10，24 h時測定1次。結(jié)果峰面積的 RSD=0.5%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號為10011583)，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果的 RSD為0.8%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):稱取樣品細(xì)粉約1.0 g(含量0.184 mg/袋)，精密稱定，平行做6份，分別精密加入質(zhì)量濃度為10.14 μg/mL的阿魏酸對照品溶液 1.6，1.6，2.0，2.0，2.4，2.4 mL，再精密加入 70%甲醇溶液50 mL，依法操作，測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 阿魏酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取本品10批，依法測定。結(jié)果批號為10011583，10011882，10012282，10020483，10020882，10021081，10021181，10031383，10031583，10032482 的樣品中，阿魏酸的含量分別為 0.184，0.182，0.189，0.190，0.190，0.192，0.189，0.193，0.191，0.190 mg/袋(n=2)。

3 討論

通過用乙醇、甲醇、50%乙醇、50%甲醇、70%乙醇、70%甲醇溶液分別回流30 min、1 h、2 h幾種前處理方法比較，結(jié)果70%甲醇溶液回流提取30 min最充分，故選擇加70%甲醇溶液水浴回流30 min的樣品處理方法。通過DAD檢測器對阿魏酸進(jìn)行色譜檢測，確定最大測定波長為321 nm。

[1]WS3－B－0824－91，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第四冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:38.

[3]胡益勇，徐曉玉.阿魏酸的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展[J].中成藥，2006，28(2):253.