血漿α-synuclein水平與帕金森病相關性的Meta分析

周 波 張春林 文 敏 焦 玲 (貴陽醫學院人體解剖學教研室，貴州 貴陽 550004)

我國帕金森病(PD)患病人數已超過200萬。目前臨床上對PD的診斷尚無準確、特異的生物診斷標記〔1，2〕。近年來研究發現α-synuclein的異常聚集與PD密切相關，以血漿α-synuclein表達水平作為PD診斷的生物標記已經成為當前研究的熱點，但國內外研究結果不盡相同，甚至出現了相反結果。因此，本研究擬通過對國內外公開發表的以及本課題組尚未發表的有關血漿α-synuclein表達水平與PD關系的研究文獻進行Meta分析，以期綜合評價兩者間的聯系。

1 資料與方法

1.1 資料來源 分別以“α-synuclein/α-突觸核蛋白”、“parkinson/PD/帕金森”與“blood/plasm/血漿”結合以“主題、關鍵詞、主題詞”途徑，聯合檢索中國生物醫學文獻數據庫(CMB)和中國學術期刊全文數據庫(CNKI)獲得全部相關的中文文獻，運用Endnote檢索Medline、Pubmed等外文數據庫，收集1990～2010年國內外公開發表的以及本課題組尚未發表的有關人血漿α-synuclein表達水平與PD關系的研究文獻。

1.2 文獻納入標準 ①1990～2010年以前國內外發表的一次文獻及本課題組尚未發表的數據;②獨立性研究，目的一致;③各文獻研究對象來源明確，病例診斷明確，病例和對照的例數明確;④原始數據提供了樣本量、均數、標準差;⑤資料收集方法科學、資料分析方法正確。

1.3 文獻排除標準 ①動物實驗;②α-synuclein在血漿外表達。③剔除重復報告、質量差、報道信息太少(未給出α-synuclein均數和標準差)及無法利用的文獻。

1.4 統計學分析 運用RevMan5.0分析軟件進行異質性檢驗，如果各研究結果之間差異無統計學意義則用固定效應模型，若有則采用隨機效應模型，計算合并效應指標值及95%CI，畫出森林圖，并進行敏感度分析和漏斗分析。

2 結果

2.1 研究資料基本情況表 共收集到符合納入標準的文獻4篇，累計病例共444人，累計對照共252人。各項研究結果差異較大，認為PD患者血漿α-synuclein表達水平與正常對照差異有統計學意義且高于對照的有兩篇(Lee〔3〕和焦玲)。認為PD患者血漿α-synuclein表達水平與正常對照差異有統計學意義且低于對照的有一篇(Neumayer〔4〕)，認為兩者差異無統計學意義的有一篇(Min Shi〔5〕)。見表1。

表1 納入Meta分析文獻的基本情況

2.2 資料的異質性分析 對納入分析的各研究結果進行異質性檢驗。結果顯示，χ2=86.47，P ＜ 0.00，I2=97%，因此，認為各獨立研究存在異質性，可能與患者年齡、性別、病程等不同有關，故采用隨機效應模型對效應指標值進行合并統計分析。RevMan軟件繪制森林圖(圖1)，結果顯示，總體效應檢驗Z=0.57，P=0.57，標準化均數差(S)為0.26，95%CI= －0.64～1.17，在森林圖中，其95%CI橫線與無效豎線相交，提示尚無充分證據說明血漿α-synuclein表達水平與PD相關。

2.3 敏感性分析 逐一剔除其中一組數據后，再行Meta分析，結果顯示，合并后95%CI橫線仍與無效豎線相交，與上述結果一致，說明敏感性低，研究結果較為穩定可信。

圖1 血漿α-synuclein表達水平與PD關系Meta分析森林圖

2.4 偏倚的評估 圖2，分布呈倒漏斗形，近似對稱，小樣本研究分布在漏斗底部，發表偏倚較小。

圖2 血漿α-synuclein表達水平與PD關系Meta分析漏斗圖

3 討論

在篩選文獻過程中發現，關于人血漿α-synuclein表達水平與PD關系國內尚無文獻發表，而國外發表的文獻中大部分研究并沒有提供均數、標準差等原始數據，使得很多研究難以用于分析和驗證，建議今后在病例對照研究的文章中盡可能提供基本的原始數據，增加納入分析的文獻數量，減少偏倚。

本研究利用Meta分析，對人血漿α-synuclein表達水平與PD的關系做綜合定量評價，通過聯合使用多種文獻檢索途徑，盡可能全的檢索到相關文獻，以減少偏倚。對4篇不同研究背景下人血漿α-synuclein表達水平與PD關系的分析結果表明，PD組與健康對照組血漿α-synuclein表達水平差異無統計學意義。排除權重較大或較小的文獻后，Meta分析結果合并效應量變化不大，說明敏感性低，結果較為穩定可信。

Shi等〔5，6〕研究發現，α-synuclein 廣泛存在于血液的各種成分之中，紅細胞中約占99%，血小板、白細胞和血漿中含量僅占1%，血漿中α-synuclein表達水平易受溶血及血小板污染等因素的影響，因此，檢測血漿中α-synuclein表達水平存在許多不穩定因素，這可能是各研究結果不一致的原因之一。

近年對α-synuclein蛋白纖維化過程的生理物理學研究發現，α-synuclein主要以單體、寡聚體和多聚體三種形式存在〔7〕，Wakabayashi等〔8〕進一步研究發現對神經細胞產生毒性作用的主要是可溶性的寡聚體，提示α-synuclein寡聚體可能是帕金森發病機制的關鍵。因此，檢測人血漿中α-synuclein寡聚體的表達水平在總α-synuclein中所占比例可能會更有意義〔9〕。本課題組檢測了貴州地區人血漿中α-synuclein寡聚體的表達水平在總α-synuclein中所占比例，證實了上述推斷。但要將這一結論推廣，尚需更多的研究數據支持。

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3 Lee PH，Lee G，Park HJ，et al.The plasma alpha-synuclein levels in patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy〔J〕.J Neural Transm，2006;113(10):1435-9.

4 蔣雨平.第11屆國際帕金森病和運動障礙大會簡訊〔J〕.中國臨床神經科學，2007;15(5):454.

5 Shi M，Zabetian CP，Hancock AM，et al.Significance and confounders of peripheral DJ-1 and alpha-synuclein in Parkinson's disease〔J〕.NeurosciLett，2010;480(1):78-82.

6 Barbour R，Kling K，Anderson JP，et al.Red blood cells are the major source of alpha-synuclein in blood〔J〕.Neurodegener Dis，2008;5(2):55-9.

7 Bosco DA，Fowler DM，Zhang Q，et al.Elevated levels of oxidized cholesterol metabolites in Lewy body disease brains accelerate alpha-synuclein fibrilization〔J〕.Nat Chem Biol，2006;2(5):249-53.

8 Wakabayashi K，Tanji K，Mori F，et al.The Lewy body in Parkinson's disease:molecules implicated in the formation and degradation of alpha-synuclein aggregates〔J〕.Neuropathology，2007;27(5):494-506.

9 El-Agnaf OM，Salem SA，Paleologou KE，et al.Detection of oligomeric forms of alpha-synuclein protein in human plasma as a potential biomarker for Parkinson's disease〔J〕.FASEB J，2006;20(3):419-25.