血管緊張素轉(zhuǎn)移酶基因插入/缺失多態(tài)性與胃癌的相關(guān)性

史美龍 邵 紅 魯海宏 張景斌 (吉林省人民醫(yī)院普外科，吉林 長(zhǎng)春 300)

血管緊張素轉(zhuǎn)移酶(ACE)是腎素-血管緊張素系統(tǒng)中的重要成員之一，其不僅在維持微循環(huán)穩(wěn)態(tài)而且在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用〔1，2〕。ACE基因位于人類(lèi)第17號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)3帶(17q23)，ACE基因第16內(nèi)含子存在一個(gè)287堿基的插入(I)、缺失(D)多態(tài)性，該多態(tài)性與血清ACE表達(dá)水平有關(guān)，即缺失型等位基因(D)ACE水平明顯增高。以往大量研究調(diào)查了ACE基因I/D多態(tài)性與多種腫瘤的相關(guān)性〔3～7〕，然而，其與中國(guó)人群胃癌的相關(guān)性尚不清楚。為此，本研究采用PCR技術(shù)檢測(cè)了中國(guó)人群胃癌患者的ACE基因I/D多態(tài)性，旨在探索其與胃癌的關(guān)系，為胃癌的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 根據(jù)臨床癥狀和組織病理學(xué)結(jié)果臨床確診為胃癌的我院普外科患者181例，男109例，女72例;平均年齡(56.5±11.2)歲。其中高中分化117例，低分化64例;臨床Ⅰ～Ⅱ期104例，臨床Ⅲ～Ⅳ期77例;無(wú)轉(zhuǎn)移107例，有轉(zhuǎn)移74例。對(duì)照組198例選自體檢健康人群，男129例，女69例，平均年齡(54.2±10.5)歲，無(wú)腫瘤家族史及胃腸道炎癥性疾病，研究對(duì)象均為非血緣關(guān)系漢族個(gè)體。

1.2 DNA提取及引物合成 采集研究對(duì)象外周靜脈血2 ml，采用北京百泰克公司全血基因組DNA提取試劑盒提取DNA。參照文獻(xiàn)〔8〕設(shè)計(jì)引物。上游引物:5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'，下游引物:5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'。引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。

1.3 PCR法檢測(cè) PCR反應(yīng)體系為10 μl，其中包括基因組DNA 0.8 μl，上、下游引物各 0.1 μl，TaqDNA 聚合酶 0.3 U，10 × 反應(yīng)緩沖液 1.2 μl，Mg2+0.6 μl，dNTPs 1.2 μl，不足體積用無(wú)菌去離子水補(bǔ)充至10 μl。PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)均為:94℃預(yù)變性4 min;94℃變性30 s，64 ℃退火90 s，72℃延伸90 s，35個(gè)循環(huán)。以上反應(yīng)均在Eppendorf熱循環(huán)儀完成。擴(kuò)增產(chǎn)物用6%聚丙烯酰胺凝膠電泳，硝酸銀染色，分析判斷結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 基因型和等位基因頻率采用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算，胃癌組和對(duì)照組基因型及等位基因頻率比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組ACE I/D多態(tài)性比較 兩組間基因型和等位基因頻率差異不顯著(P＞0.05)(表1)。

表1 胃癌組與對(duì)照組ACE I/D多態(tài)性比較〔n(%)〕

表2 胃癌組臨床特征與ACE I/D多態(tài)性比較〔n(%)〕

2.2 胃癌組臨床特征與ACE I/D多態(tài)性比較 根據(jù)臨床特征進(jìn)行亞組分析，發(fā)現(xiàn)低分化胃癌患者中DD基因型頻率明顯高于高中分化者(P=0.002);有轉(zhuǎn)移的胃癌患者中DD基因型頻率明顯高于未轉(zhuǎn)移者(P=0.012)(表2)。

3 討論

胃癌由多種因素共同作用而致，流行病學(xué)研究表明，遺傳因素在其發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。然而，胃癌發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明，對(duì)其易感基因的研究是近年來(lái)胃癌分子機(jī)制研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。多種腫瘤ACE表達(dá)水平均升高，參與血管生成、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和轉(zhuǎn)移〔2〕。使用ACE抑制劑能夠減緩腫瘤生長(zhǎng)和血管生成。由此認(rèn)為，ACE抑制劑有望成為新的抗腫瘤藥物，用于腫瘤防治。

關(guān)于ACE基因I/D多態(tài)性與胃癌的關(guān)系，目前文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果尚不一致。Ebert等〔6〕報(bào)道在德國(guó)人群中，該位點(diǎn)DD基因型在胃癌病人中的分布明顯高于對(duì)照組(P=0.003 4)。ACE基因型與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量和腫瘤分級(jí)有關(guān)，II基因型胃癌患者，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量更少(P＜0.001)，并且其腫瘤分級(jí)更低(P=0.01)〔5〕。相反，在日本人群中，未發(fā)現(xiàn)ACE基因I/D多態(tài)性與胃癌存在明顯相關(guān)性〔3〕。然而，攜帶I/D雜合子基因型的幽門(mén)螺旋桿菌陽(yáng)性的胃萎縮患者胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)明顯增高〔7〕。本研究與日本人群的研究結(jié)果類(lèi)似，未發(fā)現(xiàn)在中國(guó)人群中ACE基因I/D多態(tài)性與胃癌存在明顯相關(guān)性。引起這種差異的原因可能是:①人群不同，不同的遺傳背景造成不同個(gè)體對(duì)胃癌的易感性不同;②環(huán)境因素的影響。

為明確ACE基因I/D多態(tài)性與胃癌臨床病理特征的關(guān)系，本研究進(jìn)一步分析了其與胃癌的分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，本結(jié)果提示攜帶DD基因型的胃癌患者惡性程度更高，并且更容易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移。

本研究結(jié)果表明，盡管ACE基因I/D多態(tài)性與中國(guó)人群胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，但是其與胃癌的分化程度和轉(zhuǎn)移狀態(tài)等影響胃癌預(yù)后的臨床病理特征密切相關(guān)。然而，本研究樣本量有限，因此，有必要進(jìn)行大樣本、多民族的病例-對(duì)照研究以證實(shí)ACE在胃癌發(fā)病中的作用。

1 Murphey LJ，Gainer JV，Vaughan DE，et al.Angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism modulates the human in vivo metabolism of bradykinin〔J〕.Circulation，2000;102(8):829-32.

2 Deshayes F，Nahmias C.Angiotensin receptors:a new role in cancer〔J〕?Trends Endocrinol Metab，2005;16(7):293-9.

3 Sugimoto M，F(xiàn)uruta T，Shirai N，et al.Influences of chymase and angiotensinⅠ-converting enzyme gene polymorphisms on gastric cancer risks in Japan〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2006;15(10):1929-34.

4 Rocken C，Rohl FW，Diebler E，et al.The angiotensin Ⅱ/angiotensin Ⅱreceptor system correlates with nodal spread in intestinal type gastric cancer〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2007;16(6):1206-12.

5 Rocken C，Lendeckel U，Dierkes J，et al.The number of lymph node metastases in gastric cancer correlates with the angiotensin I-converting enzyme gene insertion/deletion polymorphism〔J〕.Clin Cancer Res，2005;11(7):2526-30.

6 Ebert MP，Lendeckel U，Westphal S，et al.The angiotensin Ⅰ-converting enzyme gene insertion/deletion polymorphism is linked to early gastric cancer〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2005;14(12):2987-9.

7 Goto Y，Ando T，Nishio K，et al.The ACE gene polymorphism is associated with the incidence of gastric cancer among H.pylori seropositive subjects with atrophic gastritis〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev，2005;6(4):464-7.

8 Ruggenenti P，Perna A，Zoccali C，et al.Chronic proteinuric nephropathies.Ⅱ.Outcomes and response to treatment in a prospective cohort of 352 patients:differences between women and men in relation to the ACE gene polymorphism.Gruppo Italiano di Studi Epidemologici in Nefrologia(Gisen)〔J〕.J Am Soc Nephrol，2000;11(1):88-96.