老年性瘙癢癥小鼠模型的研制

李文露 黃妍麗 張文軍 周永紅 (暨南大學醫學院中醫系，廣東 廣州 510632)

老年性皮膚瘙癢癥，中醫稱為“癢風”或“風瘙癢”，是困擾老年人的常見瘙癢性疾病，發病率約占40.7%。目前和瘙癢有關的分子學基礎和病理生理學機制尚未清楚，直接影響到臨床治療藥物的開發和研究〔1，2〕。本文擬以中醫傳統理論為指導，中醫整體觀為原則，結合風瘙癢形成的內因和外因，采用綜合因素造模的方法來進行老年性瘙癢癥實驗動物模型的研制，為探討該病的發病機制和臨床療效評價提供一種可靠的實驗工具〔3〕。

1 資料與方法

1.1 實驗動物 普通級昆明種小鼠22只，7月齡，SPF級，雌雄不限，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供〔許可證號:SCXK(粵)2008-0020〕。

1.2 動物飼料、藥品及試劑 低鐵飼料，由廣州市花都區花東信華實驗動物養殖場配制(配方:玉米淀粉54%，奶粉40%，豆油5%，食鹽1%〔1〕)。變色硅膠，由青島森威化工有限公司生產，規格:HG/T2765.4-2005，500 g/瓶。Na2CO3固體，由北京化工廠生產，批號:900401，500 g/瓶。

1.3 儀器設備 OLYMPUS倒置顯微鏡(日本OLYMPUS公司，型號CKX41);冷凍切片機(北京中西泰安技術服務有限公司，型號M288815);蘇木素伊紅染色試劑盒(北京中西遠大科技有限公司，型號m179794)。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗前 取小鼠22只，稱量體重后隨機抽取4只小鼠，取尾靜脈血，測全血RBC、HGB、HCT、WBC、嗜酸性粒細胞;將2只小鼠脫頸椎致死，剪下腹部、前腿皮膚制成皮膚組織切片在顯微鏡下觀察其皮脂腺并記錄。剩余20只小鼠第1天實驗前采用錄像記錄10 min并記錄其搔抓次數，以小鼠前爪搔抓頭部，后爪搔抓軀干，嘴咬全身各部位作為瘙癢指征。

1.4.2 低鐵飼料〔4，5〕喂養 第1天記錄搔抓次數后，開始飼喂小鼠低鐵飼料，每天飼料量控制約8 g/只，飲水量每天約8 ml/只。從第3天開始隔天定時繼續對各組小鼠錄像，觀察和記錄10 min內小鼠搔抓次數。

1.4.3 綜合刺激 在飼喂低鐵飼料的同時，從實驗第11天開始對小鼠進行綜合的物理刺激。具體步驟為:①錄像記錄后將小鼠放入事先置入冰袋的人工氣候箱內的鐵籠中，電吹風吹冷風檔對著冰塊吹風30 min;②應用60℃、pH=9的400 ml Na2CO3溶液從氣候箱兩側持續噴灑小鼠;③將小鼠置于鼠籠內，籠內事前鋪置細碎化纖布料，厚度約為0.5～1 cm;1個裝有36 g變色硅膠的鏤空小瓶。以上步驟隔天進行一次。實驗開始第3周后對所有小鼠稱量體重，隨機抽取小鼠樣本進行血液取樣和皮膚取樣，檢測方法同上。

1.5 統計學方法 采用SPSS統計軟件進行統計學處理，小鼠所有參數均以表示，組間差異采用方差分析。

2 結果

2.1 瘙癢次數 由圖1可見，第13天至第25天小鼠瘙癢次數恒定保持在較高水平，瘙癢程度較為明顯且穩定。

圖1 小鼠瘙癢次數時間變化曲線

2.2 血樣結果 由表1可見，血液凝滯度增加，小鼠出現了一定程度的陰傷化燥癥狀。

表1 小鼠血液中相關指標的變化()

表1 小鼠血液中相關指標的變化()

血液檢測項目 第1天 第27天RBC(104/μl)855.0±157.19 1 034.0±306.29 HGB(g/L) 125.5±21.30 150.7±54.28 HCT(10－3) 416.0±70.43 490.0±150.70 EO#(10/μl)25.25±6.85 42.3±10.69

2.3 皮膚組織切片 對比實驗前后的皮膚組織切片，皮脂腺出現明顯聚集現象、皮脂腺腺泡細胞內出現脂質空泡顯著增加。見圖2。

圖2 實驗前后小鼠的皮脂腺(HE，×100)

3 討論

早在隋代《諸病源候論》中就曾提到“風瘙癢者，是體虛受風，風入腠理，與血氣相搏，而俱往來與皮膚之間。邪氣微，不能沖擊為痛，故但瘙癢也。”老年性瘙癢癥在中醫的病癥分型中多屬“血虛風燥型”〔6，7〕，《圣濟總錄》“論曰風瘙癢者，表虛衛氣不足，風邪乘之，血脈留滯。中外鼓作，變而生熱。熱則瘙癢，久不差，淫邪散溢，搔之成瘡。”本實驗獨創性提出以中醫傳統理論為指導，以中醫整體觀為原則，結合風瘙癢形成的內因和外因采用綜合因素造模，實驗注重環境因素對疾病的影響的同時，亦重視老年人的生理病理特點，尤其是模擬中醫臨床證候的發病特點，避免了以往建立瘙癢癥模型時的缺陷。值得一提的是，實驗中依據老年性瘙癢癥的常見病因選擇三個較具參考意義的物理因素(冷風吹、熱堿性噴霧、化纖布料)刺激〔8，9〕并結合血虛風燥內因進行綜合因素造模。

本實驗數據顯示小鼠的HCT值末次較前次出現升高，表明實驗中控制飲水及物理刺激具有一定成效，小鼠出現了一定程度的陰傷化燥癥狀。但實驗中RBC和HGB值出現了不同程度的增高，考慮可能與HCT升高，小鼠的血清容量相對下降，血液濃縮后造成RBC和HGB值出現了暫時性的升高〔10〕有關。

模擬血虛風燥的外因造模時我們主要采用了觀察小鼠搔抓次數來評價瘙癢癥狀〔11〕和皮脂腺病理切片的方法。實驗之初動物搔抓次數明顯增加，物理刺激開始后搔抓次數出現較大幅度提升，嗜酸性粒細胞數值隨之升高〔10〕，表明實驗選取的外因刺激確能誘導小鼠出現瘙癢癥狀。但由于小鼠對物理刺激具有一定的耐受性，后期一度出現了小鼠搔抓次數的下跌，這也提示我們最佳的造模時間是第13～25天。在整個實驗過程中，通過病理切片可以看到小鼠的皮脂腺在實驗前后發生明顯改變，實驗后皮脂腺出現明顯聚集現象、皮脂腺腺泡細胞內出現脂質空泡顯著增加。綜上所述，多種指證均提示采用物理因素結合血虛風燥內因進行綜合因素造模的方法具有一定的可行性。

由于本科生從事實驗研究的局限性，初步建立的老年性瘙癢癥實驗動物模型還需要進一步完善:如應積極尋找與人體發病特點更為相近的實驗動物，以及對于造模后的細胞形態及結構進行更為深入的觀察等等。雖然最終適用于臨床藥物研究和療效評價的建模方法尚有待進一步探索，但課題研究中積累的寶貴經驗將使我們受益終身。

1 畢曉東，曹 煌，魏羽佳，等.皮膚瘙癢病的研究進展〔J〕.貴州醫學雜志，2004;28(4):381.

2 高留泉，王 巖，高向陽，等.老年性皮膚瘙癢癥中醫治療研究概況〔J〕.內蒙古中醫藥2002;6(1):47-8.

3 肖 蕓，方肇勤.中醫證候動物模型的研究進展〔J〕.內蒙古中醫藥，2008;10(55):64-5.

4 錢曉飛.特殊配方飼料引起實驗動物體重增長緩慢的原因探討〔J〕.中國比較醫學雜志，2007;17(12):752-4.

5 苗明三，方曉艷，孫艷紅.血虛動物模型復制的思考〔J〕.光明中醫，2003;18(103):8-9.

6 宋兆友.中醫皮膚科臨床手冊〔M〕.北京:人民衛生出版社，1996:59.

7 李建生，劉讀文.中醫老年醫學:基礎與實踐〔M〕.北京:中國中醫藥出版社，2005:38.

8 王樹椿.老年皮膚病學〔M〕.北京:中國醫藥科技出版社，1991:172.

9 王慶坦，羅 莉.老年人皮膚瘙癢的臨床分析〔J〕.醫學信息，2009;(22)6:1028.

10 王鴻利.實驗診斷學〔M〕.北京:人民衛生出版社，2005:67-77.

11 沈非沉，王 暉，薛漫清.瘙癢動物模型的研究進展〔J〕.中國比較醫學雜志，2007;17(3):182-5.