金蓮花中葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰小鼠體內抗氧化作用的影響

王書華 楊國棟 饒 娜 田嘉銘 安 芳 (河北北方學院藥學系，河北 張家口 075000)

金蓮花是毛茛科植物金蓮花(Trollius chinensis Bunge)的干燥花及花蕾，有清熱解毒，消腫明目的功效，臨床上主要用于上呼吸道感染、扁桃體炎等。金蓮花中主要藥效成分是葒草苷和牡荊苷，具有抗氧化〔1〕、抗腫瘤〔2〕、降壓等作用，金蓮花藥材和其制劑多以測定牡荊苷和葒草苷的含量控制其質量〔3〕。藥代動力學對金蓮花有效成分單體葒草苷與牡荊苷研究指出，在動物體內吸收快，分布也快，藥物起效迅速，主要以消除為主，廣泛分布于動物體內的各組織，腎臟中濃度最高，腦中濃度最低，腎對牡荊苷具有很高的攝取率〔4〕。本文對金蓮花有效成分單體葒草苷與牡荊苷的藥代動力學以及藥理學進行研究，從中醫學角度證明其提高機體的抗衰老抗氧化能力。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要藥品和試劑 葒草苷和牡荊苷(河北北方學院實驗中心，經1H-NMR和HPLC鑒定純度98.9%);D-半乳糖;鄰苯三酚;T-AOC測試盒(南京建成生物有限公司)。

1.1.2 動物 昆明種小鼠(河北北方學院動物中心提供)。

1.1.3 儀器 U-3900紫外可見分光光度計(日本);ME235S十萬分之一電子天平(日本);DK-8型電熱恒溫水槽(上海精密實驗設備有限公司);低溫高速離心機(賽多利斯公司);HQ-60型旋渦混合器(北方同正生物技術發展公司)。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用D-半乳糖致亞急性衰老法〔5〕，將D-半乳糖 10 000 mg溶于 500 ml生理鹽水中，按注射劑量200 mg·kg－1·d－1(即每克體重0.01 ml)給小鼠腹腔注射，正常對照組注射等體積生理鹽水，造模時間為8 w，每天稱重一次，依據末次稱重的克數調整給藥劑量。

1.2.2 模型驗證 造模第6周和第8周分別選取正常組和造模組大鼠(備用)8只，摘眼球采血，分離血清，測定總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)含量，以驗證小鼠衰老情況。第8周末，造模組小鼠指標與正常組相比具有統計學意義，顯示模型復制成功。

1.2.3 給藥方法 各治療組從第9周始每日上午分別灌胃給藥，正常對照組和模型組給等體積的生理鹽水。根據實驗小鼠與人的體表面積比例系數換算，維生素E組給藥劑量20 mg/kg，葒草苷、牡荊苷高、中、低劑量組 40、20、10 mg/kg，每天稱重一次，依據小鼠末次體重調整給藥劑量。給藥時間8 w。

1.2.4 檢測指標 末次給藥后，每組取10只小鼠血清進行檢測T-AOC、CAT、SOD水平，方法按試劑盒說明。

2 結果

2.1 金蓮花葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰小鼠T-AOC的影響 與模型組相比，正常對照組中小鼠血清T-AOC明顯降低(P＜0.01)，各治療組小鼠血清T-AOC與模型組相比均有所提高(P＜0.01或P＜0.05)，表明金蓮花葒草苷和牡荊苷具有提高D-半乳糖致衰小鼠血清中T-AOC的能力;與維生素E組相比，葒草苷和牡荊苷高劑量組無顯著性差異，表明葒草苷和牡荊苷提高小鼠血清T-AOC的作用相當;葒草苷和牡荊苷中、低劑量組具有顯著性差異(P＜0.05)，提示葒草苷和牡荊苷中、低劑量的作用弱于維生素E。與葒草苷中低劑量組相比，牡荊苷中低劑量組具有顯著性差異(P＜0.05)，表明葒草苷中低劑量組的作用高于牡荊苷中低劑量。見表1。

2.2 金蓮花葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰小鼠血清SOD的影響 見表1。與模型組比較，葒草苷和牡荊苷均能提高小鼠血清SOD的含量(P＜0.05，P＜0.01)。葒草苷和牡荊苷中、低劑量組作用弱于維生素E(P＜0.05)，而高劑量組無顯著差異，葒草苷中、低劑量組提高小鼠血清SOD活性高于同劑量牡荊苷(P＜0.05)，高劑量組間無差異。

2.3 金蓮花葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰小鼠CAT的影響 模型組CAT的活力明顯低于正常對照組(P＜0.05)，與模型組相比各治療組的含量明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)。與維生素E組相比，葒草苷和牡荊苷的中、低劑量組具有顯著性差異(P＜0.05)，葒草苷和牡荊苷的高劑量組無顯著性差異。葒草苷中、低劑量組分別與牡荊苷的中、低劑量組相比，具有顯著性差異(P＜0.05)，表明葒草苷中、低劑量組提高小鼠血清CAT的活力的作用強于牡荊苷的中、低劑量組。見表1。

表1 金蓮花葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰小鼠T-AOC、SOD、CAT水平的影響(± s，n=10)

表1 金蓮花葒草苷和牡荊苷對D-半乳糖致衰小鼠T-AOC、SOD、CAT水平的影響(± s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與維生素E組比較:3)P＜0.05;與葒草苷相應劑量組比較:4)P＜0.05

組別 T-AOC(ml) SOD(U/ml) CAT(U/ml)正常對照組 16.702±3.8242) 53.32±8.12) 72.15±16.421)模型組 8.913±1.126 29.65±9.0 36.38±10.54維生素E組15.064±1.3961) 44.56±8.01)3) 60.20±12.482)葒草苷高劑量組 15.913±1.2581) 46.81±6.71)3) 61.28±13.562)3)中劑量組 14.232±1.7092)3) 41.10±6.42)3) 57.47±11.242)3)低劑量組 11.810±2.1581)3) 39.92±6.21)3) 48.39±12.751)3)牡荊苷高劑量組 14.765±1.1422) 42.37±7.01)3) 56.20±13.911)中劑量組12.042±1.6741)3)4)36.84±5.01)3)4) 48.34±10.272)3)4低劑量組10.620±2.6741)3)4) 33.26±96.11)3) 42.15±11.201)3)4

3 討論

正常情況下，機體既可產生自由基，也有一套清除自由基的機制。在異常情況下，防御自由基機制失衡，導致自由基的大量產生，對機體產生毒害，從而導致機體的衰老和死亡。機體防御體系中T-AOC的作用主要是維持內環境活性氧的動態平衡，清除過高的活性氧，使機體處于氧化還原相對穩定的狀態。本實驗結果顯示金蓮花葒草苷、牡荊苷在提高機體內T-AOC的活性方面發揮較好的作用，金蓮花葒草苷在提高機體內T-AOC的活性方面要高于牡荊苷。

SOD作為生物機體抗氧化酶系統中重要的抗氧化酶之一，是清除機體內超氧陰離子自由基的重要生物酶，它可以減少過氧化脂質的產生，從而保護細胞膜免受氧自由基的損傷，起到抗氧化毒性的作用。若SOD減少會導致體內自由基濃度增加，過氧化反應加強，組織細胞被破壞，組織功能下降，引起機體衰老。本實驗結果提示，金蓮花中葒草苷和牡荊苷都能較好的提高機體內SOD的活力，從而能發揮較好的抗氧化作用。CAT能將機體代謝過程中不間斷產生的大量過氧化氫分解成水和分子氧，減輕和阻斷脂質過氧化作用的一級引發作用，保護機體免受有機氫過氧化物的侵害，延緩細胞的衰老，從而預防自由基引發疾病的發生。本實驗結果表明，金蓮花葒草苷、牡荊苷提高機體內CAT的活性，消除體內過多的自由基，從而阻斷自由基對機體的破壞，延緩和預防衰老。

1 楊國棟，饒 娜，田嘉銘，等.金蓮花中葒草苷和牡荊苷體外抗氧化作用研究〔J〕.時珍國醫國藥，2011;22(9):2172.

2 孫 黎，劉 芳，劉 華，等.金蓮花黃酮對人乳腺癌細胞作用的研究〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(9):1098.

3 曲彩紅，顏 娟，田嘉銘，等.HPLC測定金蓮花中三種黃酮苷含量〔J〕.中成藥，2010;32(3):162.

4 曲彩紅.金蓮花中葒草苷的提取分離及其在兔體內藥代動力學研究〔D〕.河北北方學院碩士論文，2010.

5 顏 娟.金蓮花中牡荊苷兔體內藥代動力學研究〔D〕.河北北方學院碩士論文，2010.