艾灸關(guān)元、足三里穴對(duì)不同月齡大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響

王淑娟 王艷杰 石星業(yè) 宮 菲 趙 胤 (遼寧中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，遼寧 沈陽 0032)

記憶能力減退是機(jī)體早期衰老的臨床表現(xiàn)，也是腦老化的重要標(biāo)志。Morris水迷宮是研究大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的重要行為學(xué)方法。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用Morris水迷宮方法，從空間學(xué)習(xí)記憶能力方面入手，觀察保健灸法對(duì)不同月齡大鼠行為學(xué)的改善作用，為艾灸防治衰老提供科學(xué)的佐證。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 SD雌性大鼠70只，由北京維通利華有限公司提供，許可證號(hào):SCXK(京2006-0009)青年對(duì)照組14只，3 月齡，體重190 ～250 g，10月齡28 只，體重350～450 g，隨機(jī)分為2組，即10月齡灸治組及10月齡對(duì)照組。12齡28只，體重390～450 g，隨機(jī)分為12月齡灸治組及12月齡對(duì)照組。各組動(dòng)物在同等條件下常規(guī)喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)室光照充足，通風(fēng)良好，溫度保持在(24±2)℃，濕度保持在40% ～60%。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 10月齡灸治組及12月齡灸治組動(dòng)物每周灸關(guān)元、足三里4次，持續(xù)灸2個(gè)月，青年組及對(duì)照組每周相同時(shí)間同樣抓取，但不灸，亦不讓其聞到灸的味道。持續(xù)2個(gè)月。

1.3 灸治的部位和方法 大鼠關(guān)元、足三里穴定位，參照大鼠標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜。關(guān)元位于大鼠兩后肢根部連線的中點(diǎn)。足三里在大鼠膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，即脛骨粗隆下緣與腓骨小頭下緣連線之中點(diǎn)處。灸前將穴區(qū)直徑約1 cm左右的鼠毛剪干凈，暴露穴區(qū)皮膚。自制艾炷:底盤直徑0.7 cm，艾柱直徑0.1 cm，重1.0 g，放置于帶有小孔附雙面膠的橡皮墊上，將橡皮墊粘貼在穴區(qū)，小孔對(duì)準(zhǔn)穴位，點(diǎn)燃艾炷。灸后局部皮膚略紅，無發(fā)泡。

1.4 定位航行實(shí)驗(yàn)〔1，2〕水槽分東、南、西、北四個(gè)象限(NE、SE、SW、NW)，實(shí)驗(yàn)前將大鼠背部栓一紅繩做標(biāo)記物(計(jì)算機(jī)對(duì)紅色分辨率高)。實(shí)驗(yàn)開始2個(gè)月后，開始進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)第一天，水槽中不放置平臺(tái)，將大鼠放入水中180 s，自由游泳以適應(yīng)環(huán)境。正式訓(xùn)練時(shí)，在水槽北象限放一平臺(tái)，平臺(tái)直徑為10 cm，低于水面大約2 cm，迷宮上方安裝有顯示系統(tǒng)的攝像機(jī)，同步記錄大鼠運(yùn)動(dòng)軌跡。

第二天開始訓(xùn)練，連續(xù)6 d，每天1次。訓(xùn)練時(shí)隨機(jī)選擇一個(gè)入水點(diǎn)，將大鼠面向水槽壁放入水中，記錄大鼠找到平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)，每次計(jì)時(shí)120 s，若120 s未找到平臺(tái)，便把大鼠放到平臺(tái)上10 s讓其熟悉，逃避潛伏期記錄為120 s。連續(xù)訓(xùn)練第7天后正式測(cè)試。將大鼠背對(duì)平臺(tái)投入水槽中，記錄其尋找到平臺(tái)的潛伏期，評(píng)價(jià)動(dòng)物空間記憶的獲得能力。實(shí)驗(yàn)全過程要求保持安靜，水槽周圍物品固定，作為動(dòng)物的空間參照物。并應(yīng)及時(shí)清除水槽內(nèi)大鼠糞便，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.5 空間搜索實(shí)驗(yàn) 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日，撤出平臺(tái)，在隨意入水點(diǎn)將大鼠面向水槽壁放入水中，各組大鼠根據(jù)記憶尋找原平臺(tái)所在象限，監(jiān)測(cè)時(shí)間為120 s，由計(jì)算機(jī)自動(dòng)跟蹤并記錄下大鼠游泳軌跡，并計(jì)算出大鼠跨越原平臺(tái)的次數(shù)及在原平臺(tái)所在象限停留時(shí)間。評(píng)價(jià)大鼠的空間記憶保持能力。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示，組間均數(shù)比較用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況觀察 10月齡對(duì)照組大鼠游泳速度較快，但運(yùn)動(dòng)軌跡大多為環(huán)形，在平臺(tái)所在象限游動(dòng)時(shí)間短，而10月齡灸治組大鼠游泳速度快與青年組相似，運(yùn)動(dòng)軌跡多為直線，在平臺(tái)所在象限附近游動(dòng)時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)面象限游動(dòng)很少。12月齡對(duì)照組大鼠運(yùn)動(dòng)減少，反應(yīng)遲緩，運(yùn)動(dòng)軌跡大多沿著池壁進(jìn)行環(huán)繞且遠(yuǎn)離平臺(tái)所在象限游動(dòng)，12月齡灸治組大鼠游泳速度慢，運(yùn)動(dòng)軌跡大多沿著池壁進(jìn)行環(huán)繞。

2.2 定位航行實(shí)驗(yàn) 各組大鼠在6 d的水迷宮定位航行訓(xùn)練中，尋找平臺(tái)的平均逃避潛伏期有明顯變化，隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，各組潛伏期均有不同程度的縮短。各組在訓(xùn)練第4天后逃避潛伏期基本趨于平穩(wěn)。訓(xùn)練后第7天各組大鼠逃避潛伏期時(shí)間見表1。大鼠逃避期代表認(rèn)知能力，逃避潛伏期越短，學(xué)習(xí)能力越強(qiáng)。青年組平均逃避潛伏期的時(shí)間最短，12月齡對(duì)照組平均逃避潛伏期的時(shí)間最長(zhǎng)，10月齡灸治組逃避潛伏期較對(duì)照組明顯縮短(P＜0.05)。而12月齡灸治組逃避潛伏期與對(duì)照組相比較無顯著性差異(P＞0.05)。

2.3 空間搜索實(shí)驗(yàn) 撤去平臺(tái)后，觀察各組大鼠的空間探索能力，即尋找原來平臺(tái)所在象限，青年組的游泳軌跡基本集中在平臺(tái)象限，高齡對(duì)照組大鼠的游泳軌跡集中趨勢(shì)不明顯，各組之間比較有顯著差異(P＜0.05)。說明隨著月齡的增加，大鼠的空間搜索記憶能力明顯下降。10月齡灸治與對(duì)照組比較，通過平臺(tái)的次數(shù)及在原平臺(tái)象限時(shí)間比率，有顯著差異。而12月齡灸治與對(duì)照組比較，通過平臺(tái)的次數(shù)及在原平臺(tái)象限時(shí)間比率，未見顯著差異。說明灸法可以提高大鼠的空間搜索能力，但對(duì)于高齡的大鼠效果并不明顯。各組大鼠通過平臺(tái)的次數(shù)及在原平臺(tái)象限停留時(shí)間見表1。

表1 各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的檢測(cè)(x ± s，n=14)

3 討論

《素問·陰陽應(yīng)象大論》載“年四十而陰氣自半也，起居衰矣，年五十體重耳目不聰矣。”即人類從四十歲開始，體內(nèi)陰精自耗過半，精力體力腦力開始呈現(xiàn)衰退趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)采用類似于人類年齡40歲(更年期前期)與50歲(更年期)相近似的10月齡及12月齡雌性自然老化大鼠為研究對(duì)象〔3，4〕。觀察評(píng)價(jià)保健灸對(duì)不同月齡大鼠在Morris水迷宮中定位航行及空間搜索試驗(yàn)中的學(xué)習(xí)記憶能力的影響。以其探求預(yù)防衰老的最佳保健灸治時(shí)機(jī)。

無病而灸，又稱“逆灸”、保健灸，是未老先灸。通過在具有保健功效作用的穴位上施灸，逐漸積累灸效，以達(dá)到防病保健的目的。關(guān)元，為任脈與足三陰經(jīng)的交會(huì)穴。《針灸穴名解》中稱此穴為“人身陰陽元?dú)饨魂P(guān)之處，為養(yǎng)生家聚氣凝神之所”，聯(lián)系命門真陽，為陰中之陽穴。艾灸關(guān)元穴可補(bǔ)攝下焦元?dú)猓鲋鷻C(jī)體元陰元陽，延年益壽。《醫(yī)學(xué)入門》載:“關(guān)元主諸虛損”。足三里，具有溫補(bǔ)脾胃，益氣養(yǎng)血，扶正培元的功效。《外臺(tái)秘要》云“三里養(yǎng)后天之氣，灸三里可使元?dú)獠凰ァ薄裳楸＝【姆ǖ某Ｓ醚ǎ舷孪嗯洌沧嘌a(bǔ)腎健脾、益氣活血、培元固本、延年益壽之功。

學(xué)習(xí)記憶是大腦的高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)，是認(rèn)知活動(dòng)的組成部分，學(xué)習(xí)是接受外界環(huán)境的信息而影響自身行為的過程，記憶是對(duì)獲得的信息在腦內(nèi)進(jìn)行儲(chǔ)存、加工和提取的過程〔5〕，可分為記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現(xiàn)。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)是20世紀(jì)80年代初建立起來的評(píng)估嚙齒動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶、空間定向及認(rèn)知功能的可靠試驗(yàn)方法。主要包括定位航行試驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩部分。是檢測(cè)大鼠在多次訓(xùn)練后，學(xué)會(huì)尋找固定位置隱蔽平臺(tái)，形成穩(wěn)定的空間位置認(rèn)知的能力。大鼠與人類一樣隨著年齡的增長(zhǎng)，會(huì)出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶能力的減退〔6〕，大鼠逃避潛伏期可反映大鼠尋找安全平臺(tái)的空間認(rèn)知能力，而大鼠在水迷宮中定位游泳尋找平臺(tái)所在象限及在平臺(tái)穿越的次數(shù)，可以反映大鼠的空間記憶能力。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀地證實(shí)了艾灸關(guān)元、足三里穴可以提高不同月齡大鼠的學(xué)習(xí)及記憶能力，以10月齡大鼠表現(xiàn)尤為明顯。提示灸法應(yīng)提早進(jìn)行。

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