SLE患者骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性的研究

葉艷芬 譚國珍 曾凡欽

骨髓間充質(zhì)干細胞(Marrow Mesenchymal Stem Cells，MSC)具有高度自我更新和多向分化的潛能，并具有支持造血和免疫負調(diào)節(jié)作用［1］。大量的體外細胞培養(yǎng)實驗［2，3］證明它具有誘導(dǎo)免疫耐受和免疫抑制的特性。MSC移植在SLE治療中具有較廣闊的應(yīng)用前景。了解SLE患者自身MSC是否異常是判斷選擇自體或異體MSC移植治療SLE的重要依據(jù)。SLE患者MSC的體外擴增及其生物學(xué)特性是協(xié)助我們評價SLE患者MSC是否存在缺陷的重要方面。

1 資料與方法

1.1 一般資料 9例SLE患者均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的SLE分類診斷標準，SLE疾病活動評分(SLEDAI)判斷疾病的活動程度。9例患者的資料見表1。另選5例性別、年齡匹配的健康者作為對照組。

表1 SLE患者臨床資料及BM-MSC體外擴增的基本情況

1.2 骨髓MSC分離培養(yǎng) 采用羥基淀粉沉淀聯(lián)合Ficoll密度梯度離心法和貼壁篩選法分離培養(yǎng)MSC。具體方法無菌操作下抽取骨髓液10 ml，以5×105U/ml肝素鈉抗凝，先用羥基淀粉按1∶4體積加入，靜置20 min，通過自然沉降去除下沉的大量紅細胞，剩余的含大量紅細胞的下層液體，再用淋巴細胞分離Ficoll-Hypaque常規(guī)分離單個核細胞。將上述兩步分離所得的骨髓單個核細胞充分混勻，懸浮于體積分數(shù)為10%的胎牛血清DMEM-LG培養(yǎng)液中，按約1×106/ml密度接種于25 cm2培養(yǎng)瓶，置37℃、體積分數(shù)為5%的 CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中。當(dāng)顯微鏡下觀察細胞已達90%融合時，則可傳代。用0.5%胰酶/乙二胺四乙酸(EDTA)(Gibco，美國)消化貼壁細胞，收集細胞并懸浮于完全培養(yǎng)液中，按104/cm2的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，置37℃、5%CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3～4天更換1次培養(yǎng)液，約1周待細胞生長密度達90%左右時，進行再次傳代。……