Ad-Egr-hTrail聯(lián)合放射線對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞殺傷作用的實驗性研究

劉桂紅 章龍珍 唐天友 劉美艷 趙麗

腦膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性腦腫瘤，約占全部顱內(nèi)腦腫瘤的35% ～40%。目前，膠質(zhì)瘤的治療仍以手術(shù)、放療為主。由于大多數(shù)膠質(zhì)瘤呈浸潤性生長，手術(shù)難以徹底切除，而且某些腫瘤生長于重要的腦功能區(qū)，多為手術(shù)禁區(qū)，使得放射治療成為腦膠質(zhì)瘤綜合治療中一個重要的輔助方法。但膠質(zhì)瘤對射線較抗拒，加上正常腦組織耐受劑量的限制，導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤放射治療的總體療效不理想。

腫瘤基因-放射治療目的就是試圖通過提高腫瘤的輻射敏感性的同時降低正常組織的輻射損傷開辟新的治療途徑與方法。研究發(fā)現(xiàn)Egr-1啟動子可誘導(dǎo)輻射敏感性，而TNF相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL)能選擇性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而對正常組織無損傷，因此若將兩者共同構(gòu)建表達調(diào)控體，就能很好地達到腫瘤基因-放射治療的目的。因此本實驗在以CMV作為啟動子的腺病毒重組載體Ad-CMV-hTrail作為對照的基礎(chǔ)上，研究Ad-Egr-hTrail單獨及聯(lián)合放射線對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷作用，為臨床腦膠質(zhì)瘤基因-放射治療進一步研究提供實驗基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 攜帶人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒重組載體Ad-Egr-hTrail及Ad-CMV-hTrail為上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室葛盛芳博士惠贈，U251腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株購自中科院生物細(xì)胞學(xué)研究所。MTS檢測試劑盒(Promega);DMEM培養(yǎng)基(GIBCO)。PCR反應(yīng)試劑盒(Fermentas公司);100bp Marker(天為時代公司);引物序列由上海生物工程公司合成：

上游引物(P1)：5＇-GCTGCCTGGCTGACTTACA-3＇，下游引物 (P2)：5 ＇-TGGCTGGTCTAGACAGATTGC-3 ＇，擴 增 片 斷為1037bp。

1.2 實驗方法

1.2.1 重組腺病毒的擴增 、純化和滴度測定 將攜帶Ad-Egr-hTrail的293包裝細(xì)胞從-70℃冰箱取出，-70℃/37℃反復(fù)凍融3次，以裂解細(xì)胞，釋放重組病毒。……