烏頭類中藥化學成分及其生物堿含量測定方法的研究概況

周 玲

烏頭類中藥化學成分及其生物堿含量測定方法的研究概況

周 玲

烏頭類中藥；生物堿；測定方法；中藥鑒定；綜述

烏頭類中藥材具有悠久的臨床運用歷史，包括附子、川烏、草烏等。中醫認為烏頭類藥材有大熱、大毒的藥性。其中附子具有回陽救逆的功效，臨床上多用于治療陽虛陰盛；烏頭具有祛風濕止痛的功效，臨床多用于治療風濕性關節炎。現代研究表明烏頭類生物堿既是其有效成分，也是毒性成分[1]。因此不少學者對烏頭類生物堿的種類和含量測定的方法進行了研究。

1 烏頭類中藥化學成分的研究概況

附子來源于毛茛科烏頭屬植物烏頭 Aconrtum carmichaelii Debx.的側生子根及加工品[1]，是眾多烏頭類中藥中最常用的一類；川烏為毛茛科植物烏頭Aconrtum carmichaelii Debx.的干燥母根；草烏為毛茛科植物北烏頭Aconitum kusnezoffii Reichb.的干燥塊根[2]。

附子、川烏及草烏中共同的化學成分有：雙酯型生物堿，如烏頭堿（Aconitine）、新烏頭堿（Mesaconitine）、次烏頭堿(Hypaconitine)；胺醇類生物堿，如尼奧靈(新烏寧堿，Neoline)、塔拉烏頭胺（Talatizamine）；二萜類生物堿，如北烏堿（Beiwutine）、去氧烏頭堿（Deoxyaconitine）。

從毒性角度來看，烏頭類中藥中的主要毒性成分為雙酯型生物堿，單酯型生物堿和胺基醇型生物堿。其中雙酯型生物堿的毒性最大，主要有烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿三種，屬于難溶于水的脂溶性成分；單酯型生物堿是雙酯型生物堿C8位上的乙酰基水解失去一分子乙酸后的產物。屬于親水性成分，毒性較小，為雙酯型生物堿的 1/2 000；胺基醇型生物堿是酯型生物堿 C14位上苯甲酯酰基水解失去一分子苯甲酸后的產物，屬強親水性成分，毒性甚微，僅是雙酯型生物堿的1/2 000～1/4 000。通常認為這三類生物堿既是烏頭類中藥的有效成分，也是它們的毒性成分[9]。

2 烏頭總生物堿含量測定方法的研究概況

2.1 酸堿中和法 原理：利用生物堿的堿性，用酸直接滴定或加入定量酸液及指示劑，用氫氧化鈉液回滴定，根據消耗堿液的體積計算出烏頭類總生物堿的含量。1990年版、1995年版、2000年版、2005年版、2010年版《中國藥典》一部中對制川烏、制草烏中烏頭類總生物堿的含量測定均采用此方法。

方法：取本品中粉10g，精密稱定，加乙醚-三氯甲烷（3:1）的混合液50ml與氨試液4ml，密塞，搖勻，放置過夜，濾過，藥渣加乙醚-三氯甲烷 50ml，連續振搖1h，濾過，藥渣用乙醚-三氯甲烷洗滌3～4次，每次15ml，濾過，洗液與濾液合并，低溫蒸干。殘渣加乙醇 50ml使溶解，精密加入硫酸滴定液（0.01mol/L）15ml，水15ml與甲基紅指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定至黃色。每 1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當于12.9mg的烏頭堿[1]。

有學者采用此方法測定了川烏、附子及炮制品中生物堿的含量[9]，還測定了制劑三七傷藥片[10]、小活絡丸[11]中的總生物堿的含量。此方法的優點是簡單易行，不需要很昂貴的儀器設備，容易普及；缺點是操作方法比較麻煩，如果操作的平行性不好，會使誤差較大。

2.2 分光光度法

2.2.1 酸性染料比色法 原理：利用生物堿和酸性染料（如溴甲酚氯）反應生成的絡合物在紫外光下有吸收，用烏頭堿的標準液繪制標準曲線后，根據標準曲線法計算烏頭類生物堿的含量。利用酸性染料比色法測定生物堿總量時，要注意符合比爾定律的含量范圍，水相 pH的選擇要與文獻中的一致。

方法：精密量取烏頭堿標準液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別置于分液漏斗中，加入三氯甲烷20ml，以第一份為空白對照，然后各加入10mlpH=6.0的溴甲酚綠染料，充分振搖，靜置1h，三氯甲烷層置于25ml量瓶中并用三氯甲烷稀釋至刻度。于415nm波長處，測定吸光度。以生物堿量與吸光度為橫縱坐標，繪制標準曲線。再用同樣方法在同樣條件下測定樣品溶液的吸光度，最后根據標準曲線法計算出烏頭堿的含量[12]。

烏蘭娜日等選擇溴甲酚綠為酸性染料，以烏頭堿（10mg/100ml，氯仿）作對照，于波長（415±1）nm 處測定附子理中丸中烏頭總堿含量。平均回收率為99.5%，RSD為1.43%。王海孫等[13]選擇文獻的條件測定風濕骨痛酒中烏頭總生物堿含量,平均回收率為 98.58%，RSD為1.83%。此方法的優點是靈敏度高、簡便、準確快速。缺點是干擾因素多，水相 pH值或指示劑配制、處理均影響呈色穩定性，顏色穩定時間較短，需用對照品繪制標準曲線，且專屬性差。

2.2.2 導數分光光度法 原理：利用設定不同的求導階數以清除干擾組分的吸收，直接進行測定生物堿的含量。根據導數分光光度法，樣品經乙醇提取后，不經分離即可直接測定，測定結果與藥典法比較,無顯著差別。

龍沛霞等[14]將制草烏，制川烏，附子在堿性條件下用乙醇提取生物堿，不經分離，直接采用一階導數紫外分光光度法測定總生物堿的含量，操作簡便。徐思文采用二階導數光譜法測定三七傷藥片中總生物堿含量，樣品和標準品溶液在波長（238±2）nm 和（246±2）nm 處有相應的吸收谷和吸收峰，而陰性對照光譜呈近平行線，不干擾樣品中烏頭總生物堿的定量分析。所以選擇此兩波長谷峰之間的導數振幅值作為三七傷藥片中總生物堿的定量依據。此法的優點是靈敏度很高、準確、簡便，且提取溶劑乙醇比氯仿對人體更安全。缺點是選擇性差，達不到對雙酯型烏頭堿限量控制的要求。

2.3 薄層掃描法

2.3.1 高效硅膠 G 板-薄層色譜 李煥榮等選擇高效硅膠 G板，以氯仿-醋酸乙酯-氨水（15:20:1）為展開劑展開，噴以碘化鉍鉀顯色后，雙波長鋸齒形反射掃描測定鎮痛寧注射液中烏頭總堿含量，平均回收率為97.85%，RSD為1.98%。

2.3.2 硅膠G板-薄層色譜 王浴銘等選擇硅膠G板，以正己烷（氨水飽和）-乙酸乙酯-95%乙醇（64:36:10）為展開劑展開，碘蒸氣顯色后，雙波長鋸齒形反射掃描測定活血壯筋丹中烏頭總堿含量。平均回收率為95.75%，RSD為0.824%。

薄層掃描法準確度高，專屬性強，重現性好，適用于不能用酸堿中和法進行含量測定的復方制劑。

2.4 高效液相色譜法（HPLC） 鄒恩濟等采用反高效液相色譜法，以甲萘基為內標，分離測定兩種蒙成藥那如-3、嘎日迪-5中草烏的3種劇毒性成分，選擇色譜柱為150mm×416mm id 的不銹鋼柱；流動相甲醇-水-氯仿-三乙醇（70:30:20:11），檢測波長230nm。平均回收率：新烏頭堿9817%，RSD=2.1%；烏頭堿93.65%，RSD 為1.1%；次烏頭堿101.7%，RSD = 3.2%。

現行2010年版《中國藥典》中采用的高效液相色譜法可以同時測定含烏頭堿的復方制劑中六個組分，包括單酯型和雙酯型生物堿[2]。

用HPLC 測定中烏頭堿的含量，操作簡便，樣品用量少，雜質分離效果好，烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿均達到了基線分離，回收率、重現性、精密度均很好。

3 總結

現在測定烏頭總生物堿或者是測定酯型生物堿的含量有許多方法，但要根據條件進行靈活的選擇。酸堿中和法適用于川烏、草烏、附子單味藥材烏頭生物堿含量測定，不適合用于測定含有其他堿性成分的復方制劑；紫外分光光度法一般只能測定烏頭生物堿總量；薄層掃描法不僅可用于單味藥材川烏、草烏、附子中烏頭堿的含量測定，還廣泛應用于含有川烏的復方中藥制劑中酯型生物堿含量測定；高效液相色譜法可分別測定烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿的含量，且操作簡便，結果準確、重現性好，是目前復方中藥制劑中烏頭類生物堿含量測定的首選方法。

[1] 李婭萍,田頌九,王國榮.烏頭類藥物的化學成分及分析方法概況[J].中國中藥雜志,2001,26(10):659-660.

[2] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國藥典 2010年版(一部) [M].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[3] 張衛東,韓公羽,梁華清,等.國內外對中藥附子成分與活性的研究[J].藥學實踐,1996,14(2):91-95.

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[11] 顏根寶,胥法領,金鳳珠.小活絡丸中烏頭總堿的分析[J].中成藥,1989,11(3):14.

[12] 張國紅,由會玲,劉云肖.烏頭生物堿含量測定方法現況[J].河北中醫藥學報,2000,15(1):45-47.

[13] 王海孫.風濕骨痛酒中烏頭總生物堿的含量測定[J].中成藥研究,1988,10(4):14.

[14] 龍沛霞,王玉珍.一階導數紫外分光光度法測定制川烏、制草烏、附子中生物堿含量[J].中草藥, 1996,27(9):531～532.

[15] 徐思文.二階導數光譜法測定三七傷藥片中烏頭總堿的含量[J].中成藥,1989,11(5):3.

10.3969/j.issn.1672-2779.2011.02.171

1672-2779（2011）-02-0223-02

2010-09-19）

四川省樂山市市中區中醫醫院藥劑科（614000）