高糖中膀胱ICCs超微結構的變化

范勇洪

作為膀胱舒縮活動的起搏和傳導者，ICCs細胞在膀胱活動中起著關鍵作用［1］。其功能改變可能是造成膀胱功能障礙的原因。因此推測，DCP發病可能與ICCs改變有關。本研究通過單細胞培養、觀察ICCs超微結構在高糖環境中的變化，探討DCP功能改變的細胞生物學基礎。

1 材料與方法

1.1 主要材料 英國種健康豚鼠，透射電鏡。

1.2 方法

1.2.1 豚鼠膀胱ICCs細胞的體外培養和制備 脫臼處死豚鼠，無菌手術取出其膀胱，取肌層并剪成碎塊，膠原酶V消化，制成無糖的DMEM細胞懸液于培養皿中，培養箱中培養24 h，棄去原液，分別加入5、10、15 mmol/L葡萄糖 DMEM 細胞培養液，繼續培養24、72 h。胰蛋白酶消化，刮刀刮取ICCs細胞，高速離心，戊二醛固定細胞團。

1.2.2 電鏡觀察 細胞團經沖洗、固定、梯度序列丙酮浸泡脫水、聚合后，超薄切片，再醋酸鈾、檸檬酸鉛順序染色后，切片置于透射電鏡下，選圖像清晰之ICCs細胞觀察。

2 結果

ICCs細胞超微結構在高濃度糖環境中發生明顯變化，隨培養液中糖濃度升高及時間增長，ICCs細胞損害也就越明顯。①5 mol組培養24和72 h組后，ICCs細胞無明顯變化，鏡下見核仁大而多，核漿比例大，線粒體豐富，胞突長而少。②10 mol組培養24 h則見核仁多，邊集，核漿比例大，細胞內部細胞器減少，比如核糖體、內質網數量減少，內質網開始擴張，胞突變短，細胞內較多顆粒狀類釋放物存在，多位于胞突內，顆粒狀物外有被膜。培養72 h后可見核仁大，數量多且形態不規則，核漿比例增大，細胞內部細胞器更少，細胞內顆粒狀類釋放物更多，位于胞突，并且有向外釋放之勢，胞突特別多且更短。……