王軍偉
尿液潛血檢查是尿液檢驗中一個必不可少的項目,常用的檢驗方法有尿液分析儀潛血反應和尿液顯微鏡檢查紅細胞(鏡檢RBC)兩種。近年來隨著尿液分析儀的迅速普及,測量參數向著快速、簡便、準確的方向發展,為臨床提供了更好的診斷依據。筆者對284例門診患者的隨機尿樣,用尿液分析儀潛血反應和尿液顯微鏡檢查紅細胞兩種方法進行檢驗,并對兩種方法的符合程度進行比較。
1.1 標本來源 隨機選取本院門診和住院患者尿液檢查標本284例,其中男127例,女157例。每例標本均在15min內分別進行尿液化學分析儀檢查和顯微鏡檢查。
1.2 試劑和儀器 本檢驗室所用儀器為長春迪瑞實業有限公司H-500型尿液化學分析儀,所用試紙為長春萬成生物電子工程有限公司11 d(100人份/瓶)。電鏡顯微鏡為奧林巴斯CX21生物顯微鏡。
1.3 檢驗原理 尿液分析儀使用的是干化學試紙法,是根據多聯試帶上各模塊與尿液成分發生化學反應后顏色變化的深淺來檢測尿液中的某化學物質,如直接檢測紅細胞、白細胞的胞質內涵物,問接推斷細胞的有無。尿液分析儀潛血反應原理是:血紅蛋白(Hb)中亞鐵血紅素的過氧化物酶樣活性可使過氧化物分解釋放出新生態[O],后者氧化底物鄰甲苯胺變成鄰聯甲苯胺發生上由黃色→草綠色→深藍色的顏色變化。尿液顯微鏡檢查則是通過顯微鏡的放大作用直接將細胞等有形成分直觀真實地呈現在鏡下,是對底物的真實反映。
1.4 檢驗方法
1.4.1 尿液分析儀檢測 于混勻的10ml新鮮尿液中浸入尿試紙條1 s后取出,上儀器進行測定,自動打印結果。結果報告分為:-、+-、+、++、+++、++++。
1.4.2 顯微鏡檢測 取尿液10ml于試管中,在水平離心機1500 r/min條件下有效離心5min。棄去上清液,留沉淀0.2ml。充分混勻后,取出約20 ul于載玻片上,加蓋玻片(2.0 cm×2.0 cm),然后用較弱的光線以低倍鏡觀察全貌,以免漏掉量少而有意義的物體,再轉用高倍鏡辨認細胞,記錄10個視野的紅細胞數,并計算出平均值。結果報告為:個/高倍視野(HP)。
在隨機選取的284例檢查標本中,尿液分析儀潛血反應呈陽性,顯微鏡檢查有紅細胞的有98例,鏡檢無紅細胞的有14例;尿液分析儀潛血反應呈陰性,顯微鏡檢查有紅細胞的有8例,顯微鏡無紅細胞的有164例。兩種檢驗方法結果存在一定差異。
2.1 假陽性 即尿液分析儀潛血反應陽性,鏡檢陰性,其常見原因有:①血紅蛋白(Hb)尿液分析儀潛血反應既能與完整的RBC發生陽性反應,也可與RBC溶解釋放的Hb發生陽性反應,而顯微鏡只能檢出尿中未溶解的RBC。健康人尿中Hb含量極微,定性為陰性。疾病時,尿中Hb有兩個來源:一是發生血管內溶血,血漿Hb超過了結合珠蛋白的結合能力,游離Hb從尿中排出。另一個是尿路(尤其是上尿路)出血,RBC在高滲或(和)低滲時破壞Hb逸出。此時,尿液分析儀潛血反應陽性,但尿沉渣鏡檢不見RBC或僅見RBC碎片。②肌紅蛋白(Mb)分子中也含有血紅素基團,具有過氧化物酶活性。Mb主要存在于心肌和骨骼肌組織中,正常人尿中含量甚微,不能檢出。當心肌或骨骼肌發生嚴重損傷時,血漿Mb增高,經腎臟排泄,使尿液Mb含量增高,故潛血反應呈陽性,鏡檢RBC為陰性[1]。③某些患者尿液中含有對熱不穩定酶,也可使試劑塊發生顏色改變,出現潛血反應陽性,鏡檢為陰性。④某些氧化性污染物,例如次氯酸鹽會導致潛血反應假陽性。⑤菌尿,在泌尿系感染中,大多數革蘭陰性菌和某些革蘭陽性菌可能釋放過氧化物酶活性物質或本身為了代謝的需要,在繁殖過程中,合成觸酶、過氧化物酶和超氧化物歧化酶,這些物質和酶在干化學法測定尿紅細胞時,都能使試帶中的過氧化氫茴香素或過氧化氫稀枯分解出游離氧,可造成假陽性結果。鏡檢RBC為陰性。⑥長時間存放及高溫實驗證明,標本不新鮮,存放時間長或高溫存放,使潛血反應的陽性率相對增高,而RBC鏡檢相應減少,測試結果極有可能出現假陽性。因此,建議尿液標本存放時間不得超過4 h[2]。⑦尿試紙條的超期使用或被污染以及不妥善保存和操作方法的不正確,均可造成測試結果假陽性。⑧尿液分析儀靈敏度過高(0.2 mg/dl出現++),“級差”范圍太大(0.8~50 mg/dl級為+++),常會遇到儀器測試為++,而鏡檢測試紅細胞為陰性,臨床上又找不到任何導致血紅蛋白尿原因的情況。
2.2 假陰性 即顯微鏡檢查呈陽性,尿液分析儀潛血反應呈陰性,其常見原因有:尿液標本中存在大量的維生素C時,能競爭性奪取反應產生的氧,從而引起假陰性反應。高比重、高蛋白尿樣降低了試劑潛血反應的靈敏度,使潛血反應呈假陰性。
2.3 離心對結果的影響 離心時,如速度過快,可使有形成分破壞;但速度過慢,當每毫升尿液中的RBC在5000個以下時,沉渣中可能找不到RBC,以至把隱匿型腎小球腎炎漏掉,因而在對檢驗結果有懷疑時,可用潛血反應證實。
綜上所述,尿液標本中紅細胞異常敏感,尿液分析儀檢測有時可能與顯微鏡檢測結果存在差異,我們要充分考慮影響檢測結果各種因素,并結合臨床癥狀進行系統分析。
采用兩種不同檢測方法的目的,在于區分尿隱血陽性患者的血尿原因。當紅細胞通過腎小球基底膜裂孔時,會使其大小和形態或血紅蛋白含量發生改變,如皺縮紅細胞、大紅細胞、胞質有葫蘆狀外展、內有細顆粒或胞膜破裂及部分胞質丟失畸形紅細胞。我們將之定義為腎小球性紅細胞,而由于腎小球以下部位和泌尿通路上的出血多因毛細血管破裂所致,紅細胞形態可完全正常。
尿液分析儀法檢測尿中紅細胞異常敏感,有時可與鏡檢結果存在差異,要充分考慮影響測定結果因素,并結合臨床進行分析,原則上尿液分析儀潛血反應陽性結果都應以顯微鏡法復檢,這是做好尿液檢驗質量保證的重要環節和關鍵所在。對于尿液分析儀法測定的陰性結果與鏡檢不一致的也應復查,以確保測定結果的準確性,為臨床診斷提供可靠的依據。
[1]何艷.尿液分析儀檢測尿隱血與鏡檢紅細胞對照.今日科技,2000,10:36.
[2]邊衛萍.FA-100尿液分析儀檢測潛血與血尿測定的影響因素探討.Proceeding0TClinicalMedicine,2003,12(6):450.