脊髓繼發性損傷大鼠動物模型的制作

孫莉莉 周酈楠

急性脊髓損傷后開始時常為不完全性，最后結果常為兩種損害機制引起:原發性脊髓損傷和繼發性脊髓損傷(SSCI)。繼發性脊髓損傷為傷后幾小時至幾天發生的一系列損傷激活的自身破壞過程，使最初病灶周圍原來完整的組織發生自身破壞性病變，周圍神經功能損害逐漸發展。所產生的脊髓損害遠遠超過了原發性損傷[1]。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 雄性SPF大鼠60只，電子顯微鏡，化學試劑。

1.2 實驗動物分組 本實驗選用雄性健康SPF大鼠60只，體重260～300 g，正常對照組:20只。動物模型組的組織化學染色:20只。動物模型組的電子顯微鏡組:20只。

1.3 實驗方法

1.3.1 繼發性脊髓損傷大鼠模型制備 1%戊巴比妥鈉腹腔麻醉動物(30 mg/kg)，俯臥位固定于立體定位儀上。以T10為中心暴露上下位錐板，咬除椎板，保持硬脊膜完整。在T10階段節段脊髓表面墊一曲度與脊髓表面一致的3 mm×8 mm塑料片，用30 g重物垂直壓迫T10節段脊髓10 min，逐層縫合肌肉皮膚。符合以下條件的大鼠歸入損傷組:壓迫時身體痙攣性顫動、尾巴痙攣性擺動、雙下肢及軀體回縮樣撲動;壓迫后硬脊膜內充血或水腫，雙下肢呈遲緩性癱瘓，斜板實驗測定最大角度＜30°。對照組大鼠只暴露脊髓。術后不同時間點處死動物，4%多聚甲醛灌注固定，無菌條件下取損傷節段脊髓組織約1.0 cm，液氮保存或石蠟包埋。

1.3.2 組織染色標本的取材 對實驗動物用1%戊巴比妥鈉(40 ml/kg)腹腔麻醉后開胸，經左心室70滴/min滴入1%肝素鈉的生理鹽水500 ml，同時剪開右心耳。繼用0.1 m磷酸鹽緩沖液(PBS，pH=7.4)配制的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定。……