高效液相色譜法測定功勞木溶液中鹽酸小檗堿的含量

廣西桂林食品藥品檢驗(yàn)所（541002）蔣玲

廣西中醫(yī)學(xué)院（530001）曾榕榕

功勞木溶液是由功勞木藥材經(jīng)提取加工制成的溶液型醫(yī)院制劑，具有清熱解毒，消毒殺菌之功效，臨床上用于沖洗傷口或濕敷患處。該醫(yī)院制劑現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)目[1]。功勞木中主含鹽酸小檗堿[2]。本研究采用高效液相色譜法測定制劑中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

美國Waters公司515HPLC泵，Waters2487檢測器，Waters717自動進(jìn)樣器，Easy3000色譜工作站。

鹽酸小檗堿對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（含量98.1%，批號：110713-200609），功勞木溶液由桂林市中醫(yī)院提供（批號：20080103、20070321、20060926、20060216），乙腈、磷酸為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：phenomenex C18色譜柱，（5μm，4.6mm×250mm）；流動相：乙腈-0.1%十二烷基硫酸鈉-磷酸（480：520：1）；流速：1.0ml?min-1；檢測波長：265nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿10.10mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為儲備液。取儲備液1ml，置20ml量瓶中，加甲醇至刻度（含鹽酸小檗堿9.9081μg?ml-1）搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取供試品2ml，置25ml容量瓶中，加鹽酸－甲醇（1∶100）溶液至刻度，搖勻；精密吸取2ml，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測定波長選擇 取鹽酸小檗堿對照品加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，在200～400μm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在265nm處有最大吸收，故選擇265nm為測定波長。

2.5 空白試驗(yàn) 本品為單一藥材制成的制劑，以溶劑作為空白溶液，再取上述對照品溶液和供試品溶液，照色譜條件測定，結(jié)果表明溶劑對測定無干擾，見附圖。

附圖 HPLC色譜圖

2.6 線性范圍考察 取鹽酸小檗堿對照品儲備液2ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，分別進(jìn)樣1μl、2μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl、30μl進(jìn)行測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，鹽酸小檗堿回歸方程為：Y=4882966X－2419，r＝0.99996，表明鹽酸小檗堿在0.03964μg～1.18897μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對同一供試品溶液（批號：20080103），分別在0h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、18 h測定。結(jié)果，鹽酸小檗堿峰面積積分平均值為661549，RSD為 1.3%，說明供試液在18小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 精密度試驗(yàn) 取對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積的RSD為0.7%，說明精密度良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一供試品（批號：20080103）6份，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按色譜條件測定。結(jié)果平均含量為2.087mg?ml-1，RSD＝0.8%。

2.10 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的供試品（批號：20080103）1ml，精密加入一定量的鹽酸小檗堿對照品溶液，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，測定并計(jì)算回收率。結(jié)果，鹽酸小檗堿平均回收率為 100.4%，RSD＝1.3%（n＝6），見附表1。

附表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

附表2 樣品含量測定結(jié)果

2.11 樣品測定 取樣品，分別按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，測定，結(jié)果見附表2。

3 討論

3.1 考察了乙腈-磷酸二氫鉀緩沖液（用磷酸調(diào)至pH3.0）、乙腈-十二烷基磺酸鈉-磷酸和乙腈-十二烷基硫酸鈉-磷酸等流動相系統(tǒng)，同時(shí)還考察了以不同濃度的十二烷基硫酸鈉作為水相時(shí)對峰形、分離度、理論塔板數(shù)、保留時(shí)間等的影響，最后確定以乙腈-0.1%十二烷基硫酸鈉-磷酸（480：520：1）為流動相，在此條件下，理論塔板數(shù)高、峰形較好、分離效果最佳。值得借鑒使用。

3.2 對柱溫20℃、25℃、30℃、35℃、40℃進(jìn)行比較，以25℃～30℃效果最佳。

3.3 供試品溶液制備方法的選擇。比較了供試品2ml，先加鹽酸-甲醇（1∶100）至25ml，再取2ml加甲醇至25ml，兩步均用甲醇稀釋的方法，結(jié)果以前者為佳。