厚樸等藥材TLC條件的優選試驗

廣西桂林食品藥品檢驗所（541002）趙純玉 饒偉文 覃曉

《中國藥典》2005版一部收載了厚樸、厚樸花、竹節參、蓽茇、豆蔻等5種藥材薄層色譜（TLC）鑒別[1][2]，其采用的展開系統均含有毒性很大的苯。本研究按2010版《中國藥典》修訂任務的要求對TLC展開系統苯替代品種進行研究，建立了厚樸、厚樸花、竹節參、蓽茇、豆蔻等的TLC新方法，收效良好，現報道如下：

1 儀器與試藥

TLC VISUALIZER薄層色譜照相儀；硅膠G預制板 100mm×100mm、100mm×200mm（青島海洋化工廠分廠生產 批號：20081211、20070607）；薄層色譜展開缸①100mm×100mm，雙槽，②200mm×100mm，雙槽；對照品：厚樸酚（批號：11029-200309）、和厚樸酚（批號：0730-200206）、桉油精（批號：110788-9202）、齊敦果酸（批號：110709-200304）、人參二醇（批號：110701-200412）、人參三醇（批號：110702-200210）、胡椒堿（批號：0775-9702）均由中國藥品生物制品檢定所提供；苯、環己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、冰乙酸、石油醚（60℃～90℃）、濃氨試液、甲醇、丙酮均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC展開系統的優選

2.1.1 厚樸 取本品粉末0.5g，加甲醇5ml，密塞，振搖30min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取厚樸酚對照品與和厚樸酚對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》附錄ⅥB）試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯－濃氨試液（5∶2∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，檢視。先后對36個展開系統進行了比較，除本系統外還有2個系統，①甲苯－甲醇（25∶1），②環己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯－濃氨試液（4∶1∶3∶0.5）也能有效地將主斑點與雜質斑點分離，但本系統分離效果最佳，重現性好，明顯優于原藥典含苯系統。見附圖1。

2.1.2 厚樸花 取本品粉末1g，加甲醇8ml，密塞，其余同 2.1.1厚樸項下。本系統能使主成分斑點與雜質斑點明顯分離，避免了原藥典含苯系統由于斑點重疊給判定帶來的困難。如附圖2 所示，原藥典含苯系統中3個供試品在與對照品相應的位置上有隱約可見的斑點（見A 4，5，6），但在新建的TLC鑒別系統中則未檢出厚樸酚與和厚樸酚（見C 3，4，5）。繼而用HPLC確認，結果與新TLC鑒別一致。

附圖1 厚樸不同展開系統TLC對比

附圖2 厚樸花不同展開系統TLC對比

附圖3 竹節參不同展開系統TLC對比

2.1.3 竹節參 取本品粉末1g，加水5～10滴，攪勻，再加水飽和的正丁醇溶液10ml，密塞，振搖約10min，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加硫酸與30%乙醇的混合溶液（1～20）10ml，加熱回流2小時，用三氯甲烷20ml振搖提取，分取三氯甲烷層，用水10ml洗滌，棄去洗液，三氯甲烷液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取齊敦果酸對照品、人參二醇對照品、人參三醇對照品，分別加甲醇制成每1ml含齊敦果酸2mg，人參二醇，人參三醇各0.5mg的三種溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液5μl、對照品溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯－冰醋酸（20∶5∶8∶0.5）展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，檢視。先后對28個展開系統進行了比較，結果為本系統所顯斑點的顏色與分離效果最佳，明顯優于原藥典含苯系統，見附圖3。

2.1.4 蓽茇 取本品粉末0.8g，加無水乙醇5ml，超聲處理30min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取胡椒堿對照品，置棕色量瓶中，加無水乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷－乙酸乙酯－丙酮（7∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同的藍色熒光斑點；噴以10%硫酸乙醇溶液加熱至斑點顯色清晰，檢視。本系統是從10個展開系統中比較而得，從附圖4可見，展開結果與原藥典含苯系統比較，主成分所顯斑點的顏色相當，主成分與其他成分的分離度優于原藥典含苯系統。

附圖4 蓽茇不同展開系統TLC對比

2.1.5 豆蔻 取豆蔻仁粉末（過三號篩）約5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水200ml，連接揮發油測定器，自測定器上端加水至刻度3ml，再加正己烷2～3ml，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持2h，放冷，分取正己烷液，通過鋪有無水硫酸鈉約1g的漏斗濾過，濾液置5ml量瓶中，揮發油測定器內壁用正己烷少量洗滌，洗液并入同一量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。另取桉油精對照品適量，加正己烷制成每1ml含25mg的溶液，作為對照品溶液（必要時可分別加乙醇適量稀釋）。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯（15∶5∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，立即機檢視。由于主成分為揮發油，展出斑點極易擴散，先后對14個展開系統進行了比較，結果以本系統為滿意。見附圖5。

附圖5 豆蔻不同展開系統TLC對比

2.2 系統耐用性試驗 對上述5種藥材的新TLC鑒別展開系統進行了不同溫度(5℃、20℃、30℃)、濕度（40%、50%、80%、90%）下的展開效果比較；進行了不同品牌、不同類型的薄層板的展開效果比較，即用不同品牌、不同類型的預制硅膠G板、預制硅膠GF254板試驗；進行了不同品牌的試劑及各種試劑比例改變下的展開效果比較等耐用性考查，結果各系統中供試品所顯主斑點的顏色、位置以及與雜質斑點的分離度均變化不大，令人滿意。

3 討論

3.1 新建上述5種藥材TLC鑒別系統，試劑毒性小、污染少，在確保分離效果的前提下，有效替代了原藥典含苯系統，達到了高效、環保的目的，已被新版藥典采用。

3.2 本鑒別不受藥材雜質成分的干擾，各系統的分離度均優于原藥典含苯系統。

3.3 中國藥典2005年版中，厚樸與厚樸花的TLC鑒別條件相同，供試液制備濃度相近，但實際上，厚樸花中厚樸酚與和厚樸酚的含量只有厚樸中含量的約十分之一。如按原來的點樣量，TLC斑點很淡。因此，現把供試品溶液點樣量修訂為10μl。

3.4 本研究共收集15批厚樸花樣品，8批次樣品的TLC色譜中沒有檢出厚樸酚與和厚樸酚的斑點，和HPLC結果一致。可能跟樣品不完整（只有花瓣），或儲存時間較長，或品種不對有關，有待進一步探討。