HPLC法測定注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關物質和含量

北京四環科寶制藥有限公司（100070）曹相林 魏墨璽 馬月梅 方賢羅 陳婧

鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯是甲砜霉素的衍生物，是氯霉素的同類物，抗菌譜和抗菌作用與氯霉素相似。其水溶性好，當溶液的pH值增高或受到體內酶的作用后，迅速釋放出甲砜霉素而發揮作用[1]。鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯拓寬了甲砜霉素的臨床應用，克服了其水溶性差的劣勢[2]。有些文獻報道的鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關物質的檢測方法中，流動相及其pH值、溶解樣品的溶劑的選擇是不恰當的，未充分驗證鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯在不同pH值條件下的穩定性或相應峰純度的考察，有關物質的檢測結果欠準確。因此，本研究在大量實驗的基礎上，建立了一種準確快速檢測注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯有關物質和含量的高效液相色譜法。經過系統的方法學驗證，選用本方法測定有關物質，能保證各雜質有效檢出，峰型對稱性好，積分結果準確，且各雜質峰與主成分峰分離度較好。選用本方法測定含量靈敏度高、專屬性強、線性范圍寬、方法回收率好。完全能夠達到質量控制的要求。

1 儀器與試藥

島津LCSolution高效液相色譜儀（日本島津公司）；Sartorius PB-10型酸度計（德國賽多利斯公司）；CP225D型電子天平（德國賽多利斯公司）；鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯對照品（批號：20100301）自制；甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 HPLC測定方法的建立與驗證

2.1 色譜條件的建立 經試驗，流動相pH值對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯主峰及其雜質峰峰形、峰面積和分離度均有影響。對流動相pH值為3.0和4.5的對比發現，前者明顯比后者峰型對稱性好，積分結果準確，各雜質峰與主成分峰分離度好。最終確認以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液-三乙胺（20∶80∶0.05）用磷酸調節pH至3.0為流動相，能保證各雜質有效檢出。

附表1 重復性試驗結果

附表2 精密度試驗結果

2.2 空白試驗 本品以0.01mol/L的鹽酸溶液為溶劑，經試驗驗證選用本HPLC測定方法，空白溶劑不干擾樣品的雜質檢測。

2.3 最小檢測限 按儀器噪音的3倍響應值測定最小檢測量為0.4ng，表明本色譜條件的靈敏度較好。

2.4 方法線性試驗 取鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯適量，共6 份，精密稱定，加0.01mol/L的鹽酸溶液制成每1ml約含50、75、100、130、150、200μg的一系列溶液，在選定的色譜條件下，分別精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，濃度對峰面積做標準曲線，結果表明本品在51.45～200.5μg/ml范圍呈良好線性，回歸線性方程：Y=36.186X+23.439 R2=0.9999。

2.5 重復性試驗 取本品適量，照含量測定方法平行配制6份樣品，測定樣品含量，考察該含量測定方法的重復性。結果顯示，采用本法對同批樣品，平行試驗6份，6次含量測定結果的RSD=0.68%，表明本方法重復性較好。見附表1。

2.6 精密度試驗 取重復性試驗項下樣6，照含量測定方法連續進樣6次，考察該含量測定方法的精密度，結果表明本方法精密度良好。見附表2。

2.7 溶液的穩定性試驗 考察供試品溶液在第0、30、60、120、180、240、360和480min的穩定性。結果表明，樣品溶液在室溫中放置480min后峰面積并無明顯變化，RSD為0.47%，適合常規分析。見附表3。

2.8 回收率試驗 精密稱定鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯對照品適量（約相當于甲砜霉素8、10、12mg），置100ml量瓶中，加0.01M鹽酸溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試溶液。另取鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯對照品適量，用0.01M鹽酸制成每1ml中約含甲砜霉素甘氨酸酯100μg的對照溶液。照上述方法試驗，高、中、低3個不同測定量的樣品，分別平行試驗3次。結果表明，含量測定準確度好，方法可行性較強。見附表4。

2.9 樣品含量測定 取本品連續試制的3批樣品，采用高效液相色譜法測定含量，見附表5。

附表3 溶液穩定性試驗結果

附表4 回收率試驗結果

附表5 三批樣品的含量測定結果

附表6 溶液穩定性考察結果

2.10 溶液pH值對樣品穩定性的影響 分別選用pH4.5流動相、0.001 mol/L鹽酸、0.01mol/L鹽酸，以有關物質為指標，考察樣品配制后放置穩定性情況。結果表明：不同pH值的溶劑對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的穩定性有明顯影響。在pH值對雜質的影響的考察中發現，在考察的3h內，在同一pH值條件下，有關物質隨放置時間延長而增長，因此為保證結果準確，有關物質測定時樣品應現配現用；在考察的3h內，隨著溶液pH值的降低，樣品在放置相同的時間內，雜質增長幅度明顯降低，因此選用溶解樣品的溶劑為0.01mol/L鹽酸，能保證測定結果更加準確。見附表6。

3 討論

本研究在對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關物質及含量測定過程中，考察了色譜條件的流動相組成及其pH值、溶劑pH值對樣品的穩定性，進行了系統的方法學研究。采用本方法測定有關物質，能保證各雜質有效檢出，峰型對稱性好，積分結果準確，且各雜質峰與主成分峰分離度較好；本方法靈敏度高、專屬性強、線性范圍寬、方法回收率好。解決了某些文獻報道的鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關物質測定方法檢測結果欠準確的問題。值得推廣用于注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的質量控制。