HPLC-DAD法對通絡活血膠囊中非法使用龍血竭的鑒別

北京市朝陽區藥品檢驗所（100028）肖宏華 甄誠 許佳

血竭為我國傳統傷科用藥，現版《中國藥典》規定為棕櫚科植物麒麟竭果實滲出的樹脂制成的加工品[1]，龍血竭是我國研制的血竭替代品，于1999年獲批局頒標準WS3-082(Z-016)-99(Z)，原植物為百合科劍葉龍血樹。兩者功效相似，但價格相差較大，從性狀來看二者極其相似，有些藥品生產企業在購進時如果把關不嚴，可能以龍血竭代替血竭投料。我們在日常檢測中發現，處方標明為血竭的通絡活血膠囊[國家食品藥品監督管理局標準（試行）WS-5574(B-0574)-2002]就存在這種現象。照該制劑質量標準，采用薄層色譜法進行鑒別，無法準確地對血竭與龍血竭區別和定性。本文參考[2～4]相關文獻，以特征成分龍血素A、龍血素B和血竭對照藥材為參照物建立了HPLC鑒別方法，可以準確識別通絡活血膠囊中是否含有以上兩種藥味。該法靈敏準確，重現性良好，可有效地對通絡活血膠囊和同類含血竭或龍血竭的制劑進行鑒別。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀（2698 PDA 檢測器，Epower2工作站），Sartorius BT25S電子天平，Mettler-TOLEDOXS 204 電子天平， 龍 血 素A 對照品（ 11660 -200402）、龍血素B對照品（111558-200405）和血竭對照藥材（120906-200609）均購自中國食品藥品檢定研究院，乙腈（色譜純，J.T.Baker公司），冰醋酸、甲醇、二氯甲烷、三氯甲烷（分析純，北京化工廠），實驗用純化水（自制），通絡活血膠囊（市售）。

附圖1 HPLC色譜圖

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Waters SunFireTMC18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相為1%冰醋酸溶液-乙腈（58:42）；檢測波長280nm；3D掃描（210nm～400nm）；柱溫30℃；流速1.0ml/min。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取龍血素A對照品6.80mg、龍血素B對照品5.42mg，分別置50ml量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度。分別精密量取上述兩種對照品溶液各5ml置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.3 供試品溶液的制備 取供試品粉末1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入二氯甲烷25ml，密塞，稱定重量。超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量。用二氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1ml，置蒸發皿中，水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.4 血竭對照藥材溶液的制備 取血竭對照藥材0.2g，精密稱定，照2.3項制成對照藥材溶液。

2.5 結果 從附圖1中可見，龍血竭的特征成分龍血素A、龍血素B與血竭對照藥材的特征峰均分離良好，且相互無干擾。0～11min主要是處方中其他藥味的特征峰，11～17min主要是血竭的特征峰，比較明顯的有色譜峰1和2，17～25min主要是龍血竭的特征峰，3、4號峰分別對應龍血素A和B。本文建立的方法可以準確區分所投原料是血竭抑或龍血竭，甚至兩者混合投料也可以識別。我們還采集了這4個成分對應的紫外光譜圖，結果表明供試品峰的光譜圖與對照品和對照藥材一致，進一步佐證了我們的推測，見附圖2。

3 討論

附圖2 成分1～4對應紫外光譜圖

3.1 制備供試品溶液時比較了甲醇、二氯甲烷、三氯甲烷三種溶劑的提取效果，其中甲醇提取雜質最多，二氯甲烷與三氯甲烷提取無明顯差異，但三氯甲烷毒性較大，故選擇二氯甲烷。

3.2 試驗中考察了不同品牌的高效液相色譜儀和色譜柱，結果表明色譜峰的保留時間稍有差異，但整體分離效果較為一致，均可區分血竭特征區和龍血竭特征區。

3.3 本方法除了對通絡活血膠囊進行鑒別外，對其他含血竭或龍血竭類似的制劑均有參考價值和意義。