食品中3種致病菌的Taqman多重熒光定量PCR檢測

張馳，楊軍，劉新梅，王曉麗

（國家農副產品監督檢驗中心，南京市產品質量監督檢驗院，江蘇 南京 210028）

食品中3種致病菌的Taqman多重熒光定量PCR檢測

張馳，楊軍，劉新梅，王曉麗

（國家農副產品監督檢驗中心，南京市產品質量監督檢驗院，江蘇 南京 210028）

利用實時熒光定量PCR（RTi-PCR）技術探索病原微生物的快速高通量檢測方法已是食品微生物學的研究熱點之一。首先，通過調整混合培養基的配比摸索食品中金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和志賀氏菌的快速共增菌條件，并選擇穩定高效的細菌基因組DNA提取方法，然后根據3種目標致病菌的保守基因分別設計RTi-PCR引物和雙標記Taqman探針，分別使用FAM、TAMRA及CY5作為報告基團，對致病菌進行多重RTi-PCR檢測，并設計、構建了陽性內參用于檢測反應體系。結果表明，方法針對42種已知目標菌株和21種已知菌株組合特異性良好，檢測限可達101cfu/PCR反應，且反應體系各組分間未見交叉干擾。陽性內參Ct值保持穩定，有效地保證了檢測的可靠性。對人工污染的食品盲樣檢測驗證了方法的實用性。總之，建立了一種食品中金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和志賀氏菌同時快速檢測的多重RTi-PCR方法，為食源性致病菌的檢測提供了新的方法學依據。

金黃色葡萄球菌；沙門氏菌；志賀氏菌；熒光定量PCR；陽性內參

金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和志賀氏菌是3種常見的食源性致病菌，也是我國食品國家衛生標準中致病菌檢測的3項重要指標。其中金黃色葡萄球菌是引起人類化膿性感染最常見的致病菌；……