北五味子配方顆粒中五味子甲素及乙素的含量測定

　　摘 要：目的：北五味子配方顆粒中五味子甲素（DSSD）及五味子乙素（r-SSD）含量的HPLC方法學的建立及研究。方法：采用Hypersil C18（Φ 4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動相為甲醇-水（75：25），流速為1.0 mL/min，檢測波長為254 nm。結果：北五味子配方顆粒中DSSD及r-SSD含量在既定的HPLC測定方法下，在0.265~1.590 μg 和0.638~3.188 μg范圍內進樣量與峰面積的線性關系良好（R=1.0000，R=0.9999），平均回收率為101.12%和100.38%，RSD（%）值為1.75和1.10。結論：所建立的HPLC測定方法準確、靈敏、重現性好，可用于北五味子顆粒中五味子配方顆粒甲素及乙素的質量控制。
　　關鍵詞：北五味子配方顆粒；五味子甲素；五味子乙素；HPLC
　　中圖分類號：R282 文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）08-0067-03
　　
　　中藥配方顆粒又稱免煎中藥，單味中藥濃縮顆粒是將單味中藥飲片經過科學加工并提取中藥材的有效成分，制成的中藥飲片新劑型［1］。北五味子配方顆粒劑是以北五味子藥材或飲片為原料，經水提取后加適量輔料，濃縮，噴霧干燥，干式制粒而制成的顆粒，臨床要求其具有原藥材相同的功效［2~4］，用于久咳虛喘，夢遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗，盜汗，津傷口渴，短氣脈虛，內熱消渴，心悸失眠等［5］。本實驗依據中藥傳統湯劑的煎煮方法，建立北五味子顆粒中五味子甲素及乙素含量的HPLC檢測方法，現報道如下。
　　1 儀器和材料
　　1.1 儀器 美國Agilent 1100 高效液相色譜儀，G1322A-Degasser真空脫氣機，G1311A-QuatPump四元泵，G1313A-ALS自動進樣器，G1311B-DAD檢測器，Agilent Chemstation化學工作站。AND GR202電子分析天平（0.01mg，日本），CREST超聲波清洗器（美國），旋轉蒸發儀RE-52A（上海亞榮生化儀器廠），KDM型連續可調控溫電熱套（山東鄄城）。
　　1.2 試劑 娃哈哈純凈水（桂林娃哈哈飲用水有限公司），五味子甲素（批號110764-200405）、五味子乙素（批號110765-200205）由中國藥品生物制品檢定所提供。HPLC用甲醇為色譜純，其他化學試劑均為分析純。北五味子配方顆粒，自制。
　　2 實驗方法及結果
　　2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil C18（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（75：25）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫。理論板數按五味子甲素和五味子乙素不低于3000，分離度不低于1.5。
　　2.2 溶液的配劑
　　2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取取減壓干燥至恒重的五味子甲素及五味子乙素對照品適量，分別加甲醇配制成0.100 mg/mL及0.125 mg/mL的溶液，即得。
　　2.2.2 供試品溶液的制備 取北五味子顆粒約1.0 g，精密稱定，加氯仿3 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容至5 mL量瓶中，作為供試品溶液。
　　2.3 測定方法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按確定的色譜條件測定，五味子甲素及五味子乙素與其他成分分離良好，見圖1~圖3。
　　2.4 線性關系考察 精密稱取五味子甲素對照品5.0 mg，加甲醇溶解，定容至20 mL，精密吸取1、2、3、4、5 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。精密稱取五味子乙素對照品6.25 mg，加甲醇溶解，定容至20 mL，精密吸取1、2、3、4、5 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。按上述色譜條件，分別進樣10 μL，測定，以峰面積積分Y對五味子甲素及五味子乙素進樣量C（μg）進行回歸分析，結果五味子甲素得回歸方程：Y=1969.96C-0.91，R=1.0000，表明五味子甲素在（0.265~1.590） μg進樣范圍內呈良好的線性關系。五味子乙素得回歸方程為：Y=1925.39C-2.84，R=0.9999，表明五味子乙素在（0.638~3.188） μg進樣范圍內呈良好的線性關系。
　　2.5 儀器精密度考察 取五味子甲素對照品溶液（100.0 μg/mL）及五味子乙素對照品溶液（125.0 μg/mL），按上述色譜條件，依法操作測定，重復進樣6次，測定色譜峰面積，計算RSD（%）值分別為0.149、0.472，說明儀器精密度很好。
　　2.6 穩定性試驗 精密吸取同一批供試品溶液10 μL，按樣品溶液制備方法制備樣品溶液，在2、4、6、8、24、48、72 h時間間隔進行分析，測定五味子甲素及五味子乙素色譜峰面積，計算RSD（%）值分別為2.02和1.28，表明樣品溶液制備后72 h內穩定。
　　2.7 重復性試驗 取同一批號北五味子配方顆粒6份，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定含量進行分析，結果五味子甲素及五味子乙素的平均含量分別為1.827、4.1657 mg/g，RSD（%）分別為1.84、1.79，表明重復性較好。
　　2.8 加樣回收實驗 取已知五味子甲素及五味子乙素準確含量（五味子甲素0.199 mg/g，五味子乙素0.478 mg/g）的樣品6份，每份取1.0 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，精密加入2.0 mL五味子甲素（0.103 mg/mL）及4.0 mL五味子乙素對照品溶液（0.126 mg/mL），揮去甲醇，按樣品溶液制備方法制備，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定五味子甲素及五味子乙素峰面積，計算回收率，結果表明，五味子甲素、五味子乙素加樣回收率的平均值分別為100.80%、100.38%，RSD（%）的值分別2.11、1.10，表明所設定的測定方法回收率較好，結果見表1、表2。
　　2.9 樣品的含量測定 取北五味子配方顆粒8批，按上述方法測定，測得配方顆粒五味子甲素平均含量為0.0215%，五味子乙素平均含量為0.0416%，結果見表3。
　　3 討論
　　中藥配方顆粒是近十年來對傳統中藥飲片應用形式的突破，它主要是在中醫藥理論的指導下，供中醫師臨床配方使用，具有免煎易服、作用迅速、成分完全、療效確切、安全衛生、攜帶方便等優點，更有利于藥房調劑和藥材資源的深度開發，有利于中藥的標準化和國際化。實驗建立了北五味子配方顆粒中五味子甲素及乙素的HPLC測定方法，五味子甲素、乙素分離效果較好，方法簡便、迅速。
　　方法學考察初期，曾用正己烷直接萃取濃縮液3次，將萃取物蒸干，用甲醇溶解定容至5 mL，進樣測定，五味子甲素、乙素分離較好；但由于溫度等各方面因素的影響，萃取較困難，且用甲醇不能完全溶解萃取液殘渣，實驗結果不穩定。之后，又嘗試將濃縮液直接烘干后，用甲醇超聲提取測定，又因濃縮液較難烘干，所以沒有采用該法。最終采用氯仿超聲提取，提取液蒸干，用甲醇溶解定容至5 mL的方法。結果表明分離效果良好，方法線性、穩定性、重現性、回收率等方法學考察均符合定量測定的要求。目前，為了使配方顆粒的功效及特性盡可能地與中藥湯劑接近，國內大部分專家、學者都主張采用水作為提取溶媒。所以在五味子配方顆粒制備過程中，同樣也采納了這一個主張，但是在研究中發現，北五味子提取液中五味子甲素、乙素含量較低，這可能與用水作為溶媒有關，不同批次五味子甲素、乙素含量有一定差異，生產過程中的工藝參數的控制以及原料選取應予以重視。
　　參考文獻：
　　［1］諸明娜.免煎中藥配方顆粒與傳統中藥飲片的比較［J］.湖北中醫雜志，2004，26（11）：55.
　　［2］國家藥品監督管理局.中藥配方顆粒管理暫行規定［S］.2001.
　　［3］聶江力，裴毅，祖元剛.北五味子果實超臨界CO2萃取工藝的研究［J］.植物研究，2005，25（2）：213~215.
　　［4］楊放，袁軍，付平.五味子的研究概況［J］.華西藥學雜志，2003，18（6）：438~440.
　　［5］國家藥典委員會.中國藥典［M］.一部.北京：化學工業出版社，2005：44~45.
　　（收稿日期：2011-04-03）