RP-HPLC同時測定中藥苦黃注射劑中4種生物堿的含量

　　摘要：目的：建立同時測定中藥苦黃注射劑中生物堿的含量方法。方法：采用高效液相色譜法同時在線檢測4個生物堿類活性化合物，通過實驗優選出最佳的流動相組成，流速和檢測波長。結果：4個生物堿的標準曲線顯示很好的線性關系，該檢測方法精密度好、穩定性和重復性好、分析效率高。結論：本方法簡便易行，可用于該類生物堿的同時測定，對控制苦黃注射劑的質量具有重要意義。
　　
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　　關鍵詞：苦黃注射劑；生物堿；高效液相
　　中圖分類號：R284文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）11-0076-02
　　苦黃注射液是由國家衛生部批準常熟雷允上制藥有限公司生產的中藥復方靜脈注射液。處方由茵陳、柴胡、苦參、大黃和大青葉等中藥組成，具有濕熱利濕、疏肝退黃的功效，主治濕熱黃疸。臨床上用于濕熱內蘊而引起的病毒性黃疸型肝炎的退黃。具有穩定和良好的臨床療效。苦黃注射劑活性成分中含有蒽醌類化合物，黃酮類化合物和生物堿類化合物，其中生物堿有苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿等生物堿活性成分，目前文獻有報道蒽醌類化合物的檢測方法^[1]，但是苦黃注射劑活性成分的質量標準檢測方法只能一個一個對活性成分進行單獨檢測，檢測工作繁瑣，檢測效率低，且檢測的活性成分數量有限，不能很好的反映制劑的質量，所以本實驗創立了用高效液相色譜法同時檢測苦黃注射劑中各生物堿類化合物的檢測方法。
　　1材料與儀器
　　11供試液的制備取苦黃注射液5批（1010191、1010151、1009072、1009211、1007311）（藥品批準文號為國藥準字Z10960004）作為供試液稀釋10倍，045μm微孔濾膜過濾后進行分析
　　12混合標準對照液制備精密秤取苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿各10mg，配成1mg/mL的混合標準對照液。
　　13儀器高效液相色譜儀分析（安捷倫110型分析儀）
　　2方法學考察
　　21色譜條件流動相：A相為水-四氫呋喃-氨水體積比為100∶01∶01，B相為甲醇，線性梯度洗脫（其中線性梯度洗脫程序為：0min時流動相A∶B的比例為100∶0，25min時流動相A∶B的比例為82∶18，70min時流動相A∶B的比例為28∶72，流速08mL/min，紫外檢測器，檢測波長為220nm，柱溫為30℃。）
　　22生物堿類化合物標準曲線的制備精密吸取苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿混合標準液2μL、4μL、6μL、8μL和10μL，按照上述21色譜條件進行液相分析，分別注入安捷倫110高效液相色譜儀分析70min。然后以峰面積為縱坐標、各標準品的濃度為橫坐標繪制標準曲線。
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　　23精密度試驗日內精密度測定：取混合對照品溶液，按21的色譜條件進行液相分析，在一天內連續進樣6次，用以上22標準曲線計算混合對照品中苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿的含量，求出平均值，并計算各化合物的標準偏差（RSD）。結果表明最大標準偏差小于152。如表1所示。
　　日間精密度測定：取混合對照品溶液，按21的色譜條件進行液相分析，對照品溶液連續進樣3天，用以上22標準曲線計算混合對照品中苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿的含量，求出平均值，并計算各化合物的標準偏差（RSD）。結果表明最大標準偏差小于238。
　　
　　24穩定性試驗取21的樣品溶液，按21的色譜條件進行液相分析，在0、2、4、6、8、12、24、48h內測定，并根據表22的標準曲線計算各生物堿的含量。計算標準偏差均小于232%。
　　25加樣回收試驗取苦黃注射液（藥品批準文號為國藥準字Z10960004），11所述方法制備得到樣品，分別加入苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿適量。按21的色譜條件進行液相分析，并且用外標二點法計算加入對照品后樣品中含有的苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿的含量。計算回收率和相對標準偏差，4種生物堿的回收率范圍為9581~1053%，最大標準偏差小于45%。
　　
　　3樣品含量測定
　　采用高效液相色譜法測定生物堿類化合物，分別精密吸取以上5批苦黃注射液（藥品批準文號為國藥準字Z10960004）的供試液各10μL，按21的色譜條件進行液相分析，注入安捷倫110高效液相色譜儀分析70min，然后按22所述的總生物堿標準曲線鑒定和檢測各化合物的含量。圖5為混合標準品的高效液相色譜分析圖，圖6為中藥苦黃注射劑樣品中生物堿類化合物的高效液相色譜檢測分析圖。圖中1，2，3和4的色譜峰分別為氧化苦參堿、槐定堿、槐果堿和苦參堿。在色譜柱上具有較好的分離。
　　
　　4討論
　　由圖1~圖2所示，苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿四種生物堿類化合物在本實驗提供的分析條件下，能夠很好的達到分離，分離度均達到15以上，各化合物的標準曲線的線性關系良好，r值均達到0999以上。由表1和表2的精密度和加樣回收實驗結果表明，該檢測分析方法的精密度高和準確性好，因此本實驗提供的分析方法可以用于同時檢測中藥苦黃注射中苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿和槐定堿。由表3和4表中藥苦黃注射劑中生物堿類化合物的檢測結果表明，可以同時檢測到5批中藥苦黃注射劑中苦參堿等4個生物堿類化合物，4個生物堿類化合物在色譜柱上能同時分開，具有很好的分離度，且各化合物的保留時間和對照品具有很好的匹配度，因此采用該檢測方法只要進一針樣品即可定性和定量檢測到中藥苦黃注射劑中的4個生物堿活性化合物，相比現有技術具有方便、快捷、工作效率高的優點。
　　參考文獻：
　　［1］吳永江，陳建軍，程翼宇RP-HPLC同時測定苦黃注射液中4中大黃蒽醌類成分含量［J］中國中藥雜志，2004，29：11
　　［2］季芳，闕瑞艷，周小軍高效液相色譜法測量苦黃顆粒中大黃素和大黃酚的含量［J］陜西中醫學院學報，2005，28：6
　　［3］袁紅宇，李翔，張先明，等苦黃口服液質量標準研究［J］中華中醫藥學刊2008，26：5
　　（收稿日期：2011-09-13）