益氣方對化療所致小鼠免疫功能影響的實驗研究

蘇 穎，郭 焱，劉 智，朱 娜，李春子，顧紅纓

（長春中醫藥大學基礎醫學院，吉林長春130117）

腫瘤患者術后放化療造成的毒副作用嚴重影響術后治療與康復，特別是對機體免疫機能產生嚴重影響，因此，采取有效措施防治放化療的毒副反應，越來越引起關注。中藥能夠提高放化療患者機體免疫力，其研究已受到醫學界的重視。本研究基于當今臨床發病實際，采用來自臨床的調節放化療所致免疫功能低下的驗方益氣方，通過對小鼠細胞因子IL-2水平檢測和小鼠血清免疫球蛋白指標觀察益氣方對經環磷酰胺抑制的免疫功能低下小鼠所具有的免疫重建作用，證明中藥制劑增強機體免疫功能的正向調節作用，并進一步篩選益氣方最佳劑量［2］。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 實驗動物取CAR小鼠，體質量18～22g，SPF級，雌雄各半。由長春中醫藥大學基礎實驗中心提供。益氣方根據藥典配方調配，按湯劑常規煎藥、過濾。各飲片由長春中醫藥大學附屬醫院提供。環磷酰胺（cyclophosphamide，CY）：每支200mg，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司生產，批號04090321。IL-2與IgG試劑盒：美國BD公司產品。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗分組 取CAR小鼠50只，隨機分為模型組，空白對照組，益氣方高、中、低劑量治療組，每組10只，雌雄各半。動物室室溫19～21℃，相對濕度40％～60％，每日光照12h，實驗期間動物可自由進食飲水，實驗環境條件符合GB1495-94國家標準。

1.2.2 模型建立 給藥第8天開始對模型組，益氣方高、中、低劑量治療組小鼠腹腔注射環磷酰胺80mg/kg體質量，連續3d［3］。

1.2.3 分組給藥 給藥組小鼠按劑量分別灌胃給藥，各組給藥劑量均按小鼠臨床等效量計算所得。空白對照組與模型組小鼠同時灌服等容量生理鹽水，連續15d，給藥體積為30mL/kg體質量，每日給藥1次。從第8天起模型組與給藥組小鼠腹腔注射環磷酰胺80mg/kg體質量，連續3d，正常組小鼠同時注射等體積生理鹽水。

1.2.4 小鼠外周血IL-2、IgG水平測定 用ELISA法檢測小鼠外周血IL-2、IgG水平，小鼠眼球取血0.6mL，3 000r/min，離心30min分離血清，放置-20℃冰箱保存［4］。

1.2.5 統計學分析 實驗數據用SPSS軟件進行方差分析兩兩比較，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 益氣方對細胞因子IL-2的影響 見圖1。

2.2 益氣方對小鼠血清免疫球蛋白（IgG）的影響 見圖2。

圖1 益氣方對化療小鼠細胞因子IL-2水平的影響

圖2 益氣方對化療小鼠血清免疫球蛋白（IgG）水平的影響

3 討論

CY是臨床治療腫瘤的最常用藥物之一，人和動物具有較高相似的毒性反應，對藥物反應具有一致性，并且重復性較好，故本實驗采用CY化療制備引起免疫力下降的模型［5］。CY具有細胞毒性，能抑制細胞分裂，致骨髓造血功能損壞，引發多系血細胞數量減少。

本實驗選用環磷酰胺造小鼠實驗模型，注射環磷酰胺后，小鼠的細胞因子IL-2、IgG的水平指標均顯著低于正常小鼠，表明其處于免疫抑制狀態。注射環磷酰胺并灌服益氣方的小鼠外周血象較模型組小鼠有明顯提高，說明灌服中藥益氣方能恢復或改善機體免疫功能。尤以給予益氣方中劑量治療后，上述各項指標顯著增高，且達到正常對照水平。IgG在機體免疫中起主要保護作用，IL-2有多種免疫增強效應，在眾多的細胞因子網絡中起重要作用。本實驗結果提示益氣方可以抵消環磷酞胺引起的機體免疫損傷，對機體低下的細胞免疫具有一定的恢復作用［6］。

益氣方湯劑的主要成分為黃芪、當歸、阿膠、川芎、芍藥，具有補氣固表、補血活血作用。方中黃芪含有多種生物活性成分，其中含量最多的為黃芪多糖（APS），其對機體特異性和非特異性免疫有廣泛的影響，能明顯增加正常小鼠的脾臟重量，能顯著對抗CY使動物脾臟重量下降的作用，增加小鼠脾臟重量、脾細胞數及抗體生成量［7］；當歸及其提取物阿魏酸鈉和當歸多糖對單核巨噬細胞系統有明顯的刺激作用，對免疫功能低下的機體也有免疫調節和恢復作用。研究表明，由當歸提取物制成的當歸注射液，每毫升相當于含原生藥0.05g，化學成分主要為丁苯酞，能增強小鼠巨噬細胞的吞噬功能，并能拮抗環磷酰胺對巨噬細胞的抑制作用；阿膠可明顯提高小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬能力，能增強小鼠自然殺傷細胞活性，并能促進健康人淋巴細胞轉化，通過補血，提高體弱人群的免疫力，迅速補充疾病過程中消耗氣血陰液，保證一定免疫力，避免其他疾病的再次發生，是易傷陰液的流行疾病中后期不可缺少的治療藥物。總之，本實驗研究結果表明，益氣方劑［8］對環磷酞胺所致的免疫損傷小鼠的免疫功能具有一定的恢復或增強作用。提示益氣加減方可作為各種免疫功能低下疾病或腫瘤放療、化療患者的輔助治療藥物，對該藥的臨床應用有一定的參考價值。其中，中劑量治療組效果最為顯著，高劑量治療組次之，低劑量治療組效果不明顯。其有關機制需進一步研究闡明。

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［7］張均田.現代藥理實驗方法［M］.北京：北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1998：743.

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