九里香葉的抗炎鎮痛作用研究

摘要：采用小鼠扭體試驗、熱板法、二甲苯致耳朵腫脹法和角叉菜膠致足腫脹法研究了九里香［Ｍｕｒｒａｙａ ｅｘｏｔｉｃａ（Ｌ．）］葉的鎮痛抗炎作用。結果表明，九里香葉醇提物可有效抑制醋酸致小鼠的扭體反應，延長小鼠的痛閾值，顯著抑制二甲苯及角叉菜膠誘導的腫脹。表明中藥九里香葉醇提物具有顯著的抗炎、鎮痛藥理學作用，為中藥九里香的二次開發提供了有益的科學依據。

關鍵詞：九里香［Ｍｕｒｒａｙａ ｅｘｏｔｉｃａ（Ｌ．）］；抗炎；鎮痛

中圖分類號：Ｓ８５３．７４文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）21－4435-03

Ｓｔｕｄｙ ｏｎ tｈｅ Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ Ａｎａｌｇｅｓｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｍｕｒｒａｙａ ｅｘｏｔｉｃａ Ｌ．

ＷＵ Ｌｏｎｇ－ｈｕｏ１，２，ＬＩＵ Ｚｈａｏ－ｗｅｎ１，ＸＵ Ｒｕｉ－ａｎ２

（１．Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｉｎ Ｇａｎｎａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇａｎｚｈｏｕ ３４１０００，Ｊｉａｎｇｘｉ，China；

２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｉｎ Ｈｕａqｉａｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｑｕａｎｚｈｏｕ ３６２０２１，Ｆｕｊｉａｎ，China）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｍｕｒｒａｙａ eｘｏｔｉｃａ（Ｌ．） ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｂｏｄｙ－ｔｏｒｓｉｏｎ ｔｅｓｔ， ｈｏｔ－ｐｌａｔｅ ｔｅｓｔ， ｘｙｌｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅａｒ ｅｄｅｍａ ｔｅｓｔ， ａｎｄ ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐａｗ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｔｅｓｔ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｍ． eｘｏｔｉｃａ ｌｅａｖｅｓ ｃｏｕｌｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｗｒｉｔｈｉｎｇ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ， ｐｒｏｌｏｎｇ ｔｈｅ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｔｉｍｅ ｏｆ ｐａｉｎ， ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｅｄｅｍａ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｘｙｌｅｎｅ ａｎｄ ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｍ． eｘｏｔｉｃａ ｌｅａｖｅｓ ｐｏｓｓｅｓｅｄ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ａｎａｌｇｅｓｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ． Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｕｓｅｆｕｌ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ “ｓｅｃｏｎｄ” ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍ． eｘｏｔｉｃａ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｍｕｒｒａｙａ eｘｏｔｉｃａ（Ｌ．）；ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ； ａｎａｌｇｅｓｉｃ

九里香［Ｍｕｒｒａｙａ eｘｏｔｉｃａ（Ｌ．）］又稱千里香、滿山香、過山香、千只眼等，為蕓香科九里香屬植物，以根和葉入藥，性辛、苦、微寒。具有行氣止痛、活血化瘀、祛風除濕、麻醉鎮驚等功效。早期曾有報道，九里香在臨床上可用于局部麻醉、抗生育作用［１］、治療流行性乙型腦炎、破傷風、急、慢性腎炎等。現代藥理學研究表明，九里香具有抗生育和終止妊娠、抗菌、抗甲狀腺腫大、降血糖、麻醉鎮靜及增強免疫功能等作用，但未見有對九里香的抗炎鎮痛等生物學活性的研究報道。本試驗采用小鼠扭體試驗、熱板法、二甲苯致耳朵腫脹法和角叉菜膠致足腫脹法研究了九里香葉的鎮痛抗炎作用，為中藥九里香的二次開發提供了有益的科學依據。

１材料

１．１藥材

九里香采自福建省漳州市，經華僑大學分子藥物學研究所張景紅教授鑒定為九里香，自然陰干，機械粉碎過４０目篩。石油醚、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇及二甲苯等均為分析純。

１．２試驗動物

昆明小鼠，雌雄兼用，體重為（２０±２）ｇ。均由福建醫科大學實驗動物中心提供，合格證號：ＳＣＸ（閩）２００４－００２。

１．３主要儀器

ＷＫ－２００Ｂ高速藥物粉碎機，ＨＨ－４電熱恒溫水浴鍋，ＦＡ２００４精密電子天平。

２試驗方法

２．１提取溶劑的確定

取干燥九里香葉粉末５０ ｇ，用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、７０％乙醇及沸水各５００ ｍＬ分別進行回流提取３次，每次２ ｈ。合并提取液并蒸去溶劑得到粗浸膏。以小鼠扭體鎮痛試驗為篩選依據（具體操作如下）。

２．２小鼠扭體鎮痛試驗

按照Ｎａｋａｍｕｒａ等［２］的方法。取健康、體重為（２０±２）ｇ的小鼠，隨機分為５組（分別為試驗組3個組，藥物對照和空白對照各1組，下同），每組６只，試驗組分別灌胃給予提取物５０、１００及２００ ｍｇ／ｋｇ。藥物對照組灌胃吲哚美辛１０ ｍｇ／ｋｇ，空白對照組給予等體積的０．８％的ＣＭＣ－Ｎａ（羧甲基纖維素鈉）。連續給藥７ ｄ，末次給藥后１ ｈ，于腹腔注射０．６％醋酸０．２ ｍＬ／只，同時用秒表計時，記錄在注射醋酸溶液后１５ ｍｉｎ內小鼠的扭體次數（包括腹部收縮內凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行等陽性行為）。計算藥物的疼痛抑制率。

疼痛抑制率＝

■×100%

２．３小鼠熱板法鎮痛試驗

按照Ｅｄｄｙ等［３］的方法。取健康、體重為（２０±２）ｇ的雌性小鼠，放入（５５±０．５）℃熱板水浴中，以舔后足作為疼痛反應指標，預測小鼠的疼痛閾值。以５ ｓ＜閾值＜３０ ｓ視為合格小鼠。將疼痛閾值合格的３０只小鼠隨機分為５組，每組６只，試驗組分別灌胃給予提取物５０、１００及２００ ｍｇ／ｋｇ。藥物對照組灌胃右旋酮洛芬１０ ｍｇ／ｋｇ，空白對照組給予等體積的０．８％的ＣＭＣ－Ｎａ。連續給藥７ ｄ，末次給藥后３０、６０及９０ ｍｉｎ分別測定疼痛閾值。

２．４小鼠二甲苯致耳朵腫脹試驗

按照Ｃｈｅｎ等［４］的方法。取健康、體重為（２０±２） ｇ的小鼠，隨機分５組，每組６只，試驗組分別灌胃給予提取物５０、１００及２００ ｍｇ／ｋｇ。藥物對照組灌胃地塞米松 ０．５ ｍｇ／ｋｇ，空白對照組給予等體積的０．８％的ＣＭＣ－Ｎａ。連續給藥７ ｄ，末次給藥后１ ｈ，于小鼠右耳正反面均勻涂抹二甲苯３０ μＬ／只，左耳為參照。１ ｈ后脫頸處死，用８ ｍｍ的打孔器在左右耳相同部位打下耳孔片，用萬分之一天平稱重，計算腫脹度及腫脹度抑制率。

腫脹度＝右耳耳孔片重－左耳耳孔片重

腫脹抑制率＝

■×100%

２．５小鼠角叉菜膠致足腫脹試驗

按照Ｗｉｎｔｅｒ等［５］的方法。取健康、體重為（２０±２）ｇ小鼠，隨機分５組，每組６只，試驗組分別灌胃給予提取物５０、１００及２００ ｍｇ／ｋｇ。藥物對照組灌胃地塞米松 ０．５ ｍｇ／ｋｇ，空白對照組給予等體積的０．８％的ＣＭＣ－Ｎａ。連續給藥７ ｄ，末次給藥后１ ｈ，于每只小鼠右后足跖部皮下注射１％的角叉菜膠２０ μＬ，左足為參照。并于注射后的１、２、３、４ ｈ分別用毛細管放大裝置測量小鼠的足體積。計算小鼠的足腫脹度及腫脹度抑制率。

腫脹度＝右足體積－左足體積

腫脹抑制率＝■×100%

３結果與分析

３．１提取溶劑的確定

提取物不同溶劑的鎮痛效果見圖１。由圖１可見，中藥九里香用不同溶劑提取所得的浸膏均顯示有一定的鎮痛作用。空白對照組在腹腔注射０．６％醋酸溶液（０．2 ｍＬ／只）后１５ ｍｉｎ內小鼠的扭體次數為（５８.0±２．３）次。在所有的不同溶劑提取物中，７０％的乙醇提取物的鎮痛效果最好，小鼠的扭體次數為（２２.0±４．２）次，疼痛抑制率為６２．１％，與對照相比呈顯著性差異（Ｐ＜０．０５）。其余溶劑提取物的鎮痛效果為氯仿＞乙酸乙酯＞沸水＞乙醚＞石油醚，其扭體次數分別為（２７．3±２．４）、（２９．０±３．１）、（３０．５±３．２）、（３２．５±４．８）、（３３．3±３．５）次，與對照相比均呈顯著性差異。

３．２小鼠扭體鎮痛試驗結果

小鼠扭體鎮痛試驗結果見圖２。由圖２可見，７０％乙醇提取物的鎮痛效果比吲哚美辛組要弱，且呈劑量依賴性。在劑量為２００、１００及５０ ｍｇ／ｋｇ時，小鼠的扭體次數分別為（１１．８±１．９）、（１５．４±１．２）、（２５．６±２．７）次，與空白對照組相比均呈顯著性差異（Ｐ＜０．０５）。而吲哚美辛可使小鼠的扭體次數減少至（８．３±０．７）次，與空白對照組相比呈極顯著性差異（Ｐ＜０．０１）。

３．３小鼠熱板法鎮痛試驗結果

小鼠熱板法鎮痛試驗結果與“３．２”類似（圖３）。７０％乙醇提取物對小鼠熱板潛伏期的影響呈劑量依賴性關系，弱于右旋酮洛芬，與空白對照組相比均呈顯著性差異（Ｐ＜０．０5），鎮痛高峰期均出現在藥后６０ ｍｉｎ左右。在劑量為２００、１００及５０ ｍｇ／ｋｇ時，小鼠的耐熱潛伏期分別為（２６.0±３．８）ｓ、（３２．４±３．５）ｓ、（３０.0±４．２）ｓ，（２１．４±３．９）ｓ、（２９．４±４．２）ｓ、（２６．８±２．６）ｓ及（１６．６±２．２）ｓ、（２４．２±４．１）ｓ、（２３．０±４．７）ｓ。而右旋酮洛芬在藥后６０ ｍｉｎ時，其耐熱潛伏期為（３９．６±２．２）ｓ。

３．４小鼠二甲苯致耳朵腫脹試驗結果

小鼠二甲苯致耳朵腫脹試驗結果見圖４。由圖４可見，７０％乙醇提取物對二甲苯所致的小鼠耳朵腫脹具有一定的消腫作用，且呈劑量依賴性，但其作用效果遠弱于地塞米松（０．５ ｍｇ／ｋｇ）。地塞米松對二甲苯所致的小鼠耳朵腫脹抑制率達（５８．８±６．２）％，與空白對照組相比呈極顯著性差異（Ｐ＜０．０１）。而７０％乙醇提取物在劑量為２００ ｍｇ／ｋｇ時，其抑制率只有（４１．４±４．３）％，但不同劑量組與空白對照組相比均呈顯著性差異（Ｐ＜０．０５）。

３．５小鼠角叉菜膠致足腫脹試驗結果

小鼠角叉菜膠致足腫脹試驗結果與“３．４”類似（圖５）。７０％乙醇提取物對角叉菜膠所致小鼠足腫脹的影響是呈劑量依賴性關系且與空白對照組相比呈顯著性差異（Ｐ＜０．０５），但其效果遠弱于地塞米松，作用高峰期均出現在３ ｈ左右。在３ ｈ時，７０％乙醇提取物劑量為２００、１００及５０ ｍｇ／ｋｇ時，對足腫脹抑制率分別為（３９．５±４．１）％、（３１．６±８．８）％、（１７．２±４．３）％。而地塞米松（０．５ ｍｇ／ｋｇ）在１～４ ｈ內均保持較強的抑制腫脹能力，其在３ ｈ時的足腫脹抑制率為（５６．５±５．８）％，與空白對照組相比呈極顯著性差異（Ｐ＜０．０１）。

４討論

九里香作為一種傳統中藥材，具有廣泛的藥理學作用。本試驗研究鎮痛的動物模型采用了醋酸致痛小鼠扭體試驗及熱板試驗。扭體試驗是常用來篩選非甾體類抗炎藥鎮痛作用的一種敏感而簡便的方法，與外周神經鎮痛有很大的關系。熱板試驗是常用于篩選中樞鎮痛藥的一種動物模型，中樞鎮痛藥可相對延長對熱板刺激的反應時間，而外周鎮痛藥則不能。熱板試驗的疼痛反應機理目前還不是很清楚。但Ａｂｂｏｔｔ等［６］認為可能與μ阿片受體有關。九里香在這兩個模型中均表現出一定的鎮痛作用，說明其具有一定的外周鎮痛及中樞鎮痛作用，可能與抑制一些內源性炎癥介質有關，而是否與μ阿片受體有關還有待進一步研究。

炎癥初期以毛細血管通透性增高、滲出、水腫為主。足腫脹法及耳腫脹法均為在此基礎上的動物模型。角叉菜膠誘導的急性炎癥與內源性化學因子有很大的關系。其機理為：角叉菜膠注入局部后被肥大細胞吞噬而使得肥大細胞脫顆粒，釋放ＰＧ、組胺、５－羥色胺等炎癥介質；被中性粒細胞吞噬，造成粒細胞受損，釋放磷脂酶Ａ２，觸發花生四烯酸代謝途徑，生成ＰＧｓ、白三烯等，最終導致局部充血、腫脹、疼痛等炎癥癥狀。二甲苯所誘導釋放的炎癥介質與角叉菜膠的基本相似，包括５－羥色胺、組胺、緩激肽及ＰＧｓ等。本試驗研究發現，７０％乙醇提取物可有效地抑制角叉菜膠所致足腫脹及二甲苯所致耳腫脹，說明九里香對炎癥早期的滲出、水腫具有一定的抑制作用。

因此，中藥九里香葉乙醇提物具有顯著的抗炎鎮痛的生物學活性。本試驗為中藥九里香的二次開發提供了有益的科學依據。

參考文獻：

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